內(nèi)源性一氧化碳（CO）測(cè)試盒

（測(cè)全血）

一、 檢測(cè)意義：

一氧化碳（carbon monoxide，CO）是與一氧化氮

（NO）極相似的小分子氣態(tài)物質(zhì)。90 年代以來(lái)的大量

研究揭示，生物體內(nèi)源性 CO 不僅作為一種新型的神經(jīng)

遞質(zhì)參與中樞神經(jīng)系統(tǒng)的信息傳遞，還具有舒張血管、

抑制血管平滑肌和血管內(nèi)膜增殖、抑制血小板聚集、調(diào)

節(jié)體內(nèi)激素分泌、抑制細(xì)胞凋亡等多種生物學(xué)功能，在

機(jī)體多種生理及病理狀態(tài)中發(fā)揮重要的作用。

二、 測(cè)定原理：

根據(jù)碳氧血紅蛋白（HbCO）和還原血紅蛋白（Hb）

吸收光譜的差異，選擇 HbCO 吸光度之差而 Hb 吸

光度之差為零的兩個(gè)波長(zhǎng)，應(yīng)用雙波長(zhǎng)分光光度法測(cè)定

樣本在這兩個(gè)波長(zhǎng)下的吸光度差值（△OD），再通過(guò)標(biāo)

準(zhǔn)曲線求出 HbCO 百分濃度，代入公式計(jì)算出內(nèi)源性一

氧化碳（CO）含量。

三、 試劑組成及配制：（50T/48 樣）

試劑一：溶血?jiǎng)?/span>100mL×1 瓶，4℃保存。

試劑二：緩沖液，100mL×2 瓶，4℃保存。

試劑三：碳氧血紅蛋白測(cè)定粉劑×6 瓶，4℃避光密封保

存。

碳氧血紅蛋白測(cè)定工作液的配制：臨用前，往每瓶測(cè)定

粉劑中加入 23 mL 試劑二緩沖液，加蓋顛倒混

合，使溶解，現(xiàn)用現(xiàn)配，用多少配多少，

2 小時(shí)內(nèi)用完，用黑袋注意避光。

試劑四：制作 HbCO 百分曲線用的還原粉劑×6 支，4℃

避光密封保存。

試劑五：血紅蛋白 Hb 測(cè)定濃縮液，1mL×2 支，4℃避

光密封保存。

血紅蛋白 Hb 測(cè)定應(yīng)用液的配制：臨用前將濃縮液用蒸

餾水 1∶99 稀釋，即 100 倍稀釋，現(xiàn)用現(xiàn)配。

配好的試劑 2～8℃避光保存，可存放 1 個(gè)月以

上。

四、操作步驟：

1、 全血中血紅蛋白 Hb 測(cè)定及計(jì)算：

取 0.01mL 樣本（全血）與 2.5mL 的 100 倍稀釋的試

劑五應(yīng)用液（血紅蛋白測(cè)定應(yīng)用液），混勻，靜置 5 分鐘

后，1cm 光徑蒸餾水調(diào)零，540nm 測(cè)定各管吸光度值。

血紅蛋白含量的計(jì)算：

血紅蛋白含量（g/L）= Α540 ×367.7

2、 樣本前處理

①、肝素抗凝全血的制備：取末梢血立即加入到肝素

抗凝管內(nèi)，加蓋封口，輕輕搓動(dòng)，制成肝素抗凝

全血，2～8℃保存。

②、溶血液的制備：取抗凝全血 10μL，加入試劑一溶

血?jiǎng)?/span> 1.2mL 混勻，靜置 5 分鐘，使溶血，待

測(cè)。（如果你的樣本量很少并很珍貴，可按樣本∶

試劑一溶血?jiǎng)?/span>1∶120 進(jìn)行稀釋并溶血）

3、 全血中碳氧血紅蛋白測(cè)定

①、取經(jīng)過(guò)前處理的樣本（全血經(jīng)前處理制備的溶血

液）0.2mL，加入試劑三碳氧血紅蛋白 Hb 測(cè)定工

作液 2.3mL，混勻。

②、靜置 10 分鐘后，試劑二緩沖液調(diào)零，1cm 光徑，

分別測(cè) 568nm 與 581nm 的吸光度。

五、碳氧血紅蛋白（HbCO）百分濃度曲線：

【可自行制作 HbCO 百分濃度曲線，也可參照本所

提供的 HbCO 百分濃度曲線】

〇 飽和碳氧血紅蛋白與飽和還原血紅蛋白的制備

1、取不吸煙健康人肝素抗凝全血 10μL，加入試劑一溶

血液 1.2mL 混勻，靜置 5 分鐘使溶血。

2、從中取 2 份，每份 0.2mL，加入到兩支具塞試管中，

再分別加入 2.3mL 試劑二緩沖液，混勻。

3、在通風(fēng)櫥內(nèi)，向其中一支試管里通純一氧化碳（CO），

連續(xù)通15分鐘，再通入氮?dú)?/span>20分鐘，得到飽和HbCO

溶液。

4、再向另一支試管通氧氣（O2），連續(xù)通 20 分鐘，得

到飽和 HbO2 溶液。

六、計(jì)算公式：

〇 碳氧血紅蛋白百分濃度（HbCO%）的計(jì)算：

通過(guò)分別測(cè)定568nm與581nm的吸光度，計(jì)算△OD

（A568-A581）的吸光度值差。再由標(biāo)準(zhǔn)曲線，

通過(guò)回歸方程計(jì)算出碳氧血紅蛋白百分比濃度，即

HbCO%。

【注 1】如不直接制作百分濃度曲線，也可參照本

所提供的百分濃度曲線，回歸方程為：y =

0.822x + 0.001

x 即為△OD（A568-A581）的吸光度值，y 即為碳

氧血紅蛋白百分比濃度。

HbCO%=[ 0.822×△OD（A568-A581）+0.001 ]×100%

【注 2】 A568 為 HbCO 吸光度之差的波長(zhǎng)；A581

為 Hb 吸光度之差為零的波長(zhǎng)

〇 溶血液中 Hb 的測(cè)定步驟及計(jì)算公式：

取 0.01mL 全血樣本與 2.5mL 的 100 倍稀釋的試劑

五應(yīng)用液（血紅蛋白測(cè)定應(yīng)用液），混勻，靜置 5

分鐘后，1cm 光徑蒸餾水調(diào)零，波長(zhǎng) 540nm 測(cè)定各

管吸光度值。

血紅蛋白含量的計(jì)算：

血紅蛋白含量（g/L）= Α540 ×367.7

七、計(jì)算：

1、全血中血紅蛋白 Hb 測(cè)定及計(jì)算：

取 0.01mL 全血樣本與 2.5mL 的 100 倍稀釋的試劑

五應(yīng)用液（血紅蛋白測(cè)定應(yīng)用液），混勻，靜置 5

分鐘后，1cm 光徑蒸餾水調(diào)零，540nm 測(cè)定各管吸

光度值。

血紅蛋白含量的計(jì)算：

血紅蛋白含量（g/L）= Α540 ×367.7

2、碳氧血紅蛋白測(cè)定前處理：

① 肝素抗凝全血的制備：取末梢血立即加入到肝

素抗凝管內(nèi)，加蓋封口，輕輕搓動(dòng)，制成肝素

抗凝全血，2～8℃保存。

② 溶血液的制備：取抗凝全血 10μL，加入試劑一

溶血?jiǎng)?/span> 1.2mL 混勻，靜置 5 分鐘，使溶血，

待測(cè)。（如果你的樣本量很少并很珍貴，可按樣

本∶試劑一溶血?jiǎng)?/span>1∶120 進(jìn)行稀釋并溶血）

3、全血中碳氧血紅蛋白測(cè)定

①、取經(jīng)過(guò)前處理的樣本（全血經(jīng)前處理制備的溶

血液）0.2mL，加入試劑三碳氧血紅蛋白 Hb

測(cè)定工作液 2.3mL，混勻。

②、靜置 10 分鐘后，試劑二緩沖液調(diào)零，1cm 光

徑，分別測(cè) 568nm 與 581nm 的吸光度。

內(nèi)源性一氧化碳（CO）測(cè)試盒