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試驗開端前,各試劑均應(yīng)平衡至室溫,試劑不能直接在37溶解;試劑或樣品制造時,均需充沛混勻,混勻時盡量防止起泡。試驗前應(yīng)預(yù)測樣品含量,如樣品濃度過高時,應(yīng)對樣品進行稀釋,以使稀釋后的樣品契合試劑盒的檢測規(guī)模,核算時再乘以相應(yīng)的稀釋倍數(shù)。
1,抗血清的制備
① 所需的抗原量
一般1-10mg/mL。②免疫途徑抗原的打針辦法有皮下打針、肌肉打針、腹膜內(nèi)打針、靜脈打針和淋巴結(jié)打針等。其中以靜脈打針*為簡略便利,不需要佐劑乳化,發(fā)生抗體的高峰值出現(xiàn)較早,一般在一周左右,打針后一周即可采血測試效價。免疫過程中應(yīng)注意:a.佐劑只能現(xiàn)配現(xiàn)用:b.采血時刻不宜拖得太長。因為免疫時刻越長,發(fā)生穿插反應(yīng)的抗體也越多。
③抗血清的別離 當?shù)玫綕M足的效價時,即可進行取血。將收集到的血液成斜面放置在37℃、溫箱中2h。然后置于4℃冰箱過一夜。次日用滴管汲取抗血清,用離心法(2000-3000r/min,20min)去掉沉積。然后測定效價、判定純度。純度用紫外分光光度計或Folin氏比色法進行測定??寡灞4嬗?25℃低溫處。
④抗血清的效價測定 測定的辦法一般有兩種,即試管沉積法和免疫雙擴散法。關(guān)于免疫酶技能運用的抗血清,有必要具有必定的效價,試管沉積法應(yīng)不低于1:2,免疫雙擴散法不低于1:2,且要求單價抗血清。
2,捕食者的收集和準備
首要辦法有3個:①將胃內(nèi)含物擠在質(zhì)量好的濾紙上,但蛋白質(zhì)易與纖維素結(jié)合,若保存過久則難以洗脫:②將待查看的捕食關(guān)閉在明膠膠囊內(nèi),并加枯燥劑,以使蟲體與膠囊別離:③盡可能快地將收集到 的捕食者貯存于低溫下(如-40℃)。
3,試驗血清的制備
按戊二醛簡易法進行。
前兩種辦法適于郵寄和長途運輸,后一種辦法能保存較長的時刻。一切的辦法都需堅持枯燥。對較大的捕食者,可將消化道別離,像蟻、蝸牛以及蜘蛛等小型動物則整個蟲體。
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