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當(dāng)前位置:上海酶聯(lián)生物研究所>>技術(shù)文章>>ELISA試劑盒操作方法
酶聯(lián)生物ELISA試劑盒是一種敏感性高、特異性強、重復(fù)性好的實驗確診方法,因為其試劑穩(wěn)定、易保存、操作簡潔、成果判斷較客觀等因素,以及既適宜于大規(guī)模篩查實驗又能夠用于少數(shù)標本的檢測,既能夠做定性實驗也能夠做定量分析等長處,已廣泛應(yīng)用于微生物學(xué)、寄生蟲學(xué)、腫瘤學(xué)和細胞因子等領(lǐng)域。
ELISA試劑盒操作方法:
1.于反響孔中,參加新鮮稀釋的酶標第二抗體(抗抗體)0.1ml,37℃孵育30-60分鐘,洗刷,zui后一遍用DDW洗刷。
2.加底物液顯色:于各反響孔中參加暫時制造的TMB底物溶液0.1ml,37℃ 10~30分鐘。
3.于各反響孔中參加2M硫酸0.05ml
4.可于白色布景上,直接用肉眼調(diào)查成果:反響孔內(nèi)色彩越深,陽性程度越強,陰性反響為無色或極淺,根據(jù)所呈色彩的深淺,以“+"、“-"號表示。也可測OD值:在ELISA檢測儀上,于450nm(若以ABTS顯色,則410nm)處,以空白對照孔調(diào)零后測各孔OD值,若大于規(guī)則的陰性對照OD值的2.1倍,即為陽性。
5.包被:用0.05MPH9.牰碳酸鹽包被緩沖液將抗體稀釋至蛋白質(zhì)含量為1~10μg/ml。在每個聚苯乙烯板的反響孔中加0.1ml,4℃ 過夜。次日,棄去孔內(nèi)溶液,用洗刷緩沖液洗3次,每次3分鐘。(簡稱洗刷,下同)。
6.加樣:加必定稀釋的待檢樣品0.1ml于上述已包被之反響孔中,置37℃ 孵育1小時。然后洗刷。(一起做空白孔,陰性對照孔及陽性對照孔)。
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