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當(dāng)前位置:上海酶聯(lián)生物研究所>>技術(shù)文章>>大鼠elisa試劑盒檢測步驟及注意事項(xiàng)
大鼠elisa試劑盒以靈敏度較高、特異性較好的特點(diǎn)在科研上得到了廣泛的應(yīng)用,但操作中的各個環(huán)節(jié)對試驗(yàn)的檢測效果影響較大,如不注意,有可能導(dǎo)致顯色不全、花板等結(jié)果。大鼠elisa試劑盒可以檢測多少樣品?在市場中,主要規(guī)格有兩種,它們分別是48T和96T,48T可測42個標(biāo)本,96T可測94個樣本。標(biāo)本收集與保存:避免使用肉眼可見的溶血標(biāo)本、高脂標(biāo)本和混濁標(biāo)本;2-8℃下,標(biāo)本可放置24-48小時,長期保存需放置-20℃下,請避免反復(fù)凍融。
大鼠elisa試劑盒在檢測樣品的過程中,請注意:
①洗滌液:用前配制,有的試劑盒會標(biāo)明,配好的4度下一般可以放一個月,如果沒有標(biāo)明,盡量用新鮮的,不要多配制;
②顯色液(有A液和B液的),用前15分鐘配制;
③標(biāo)準(zhǔn)品:有的大鼠elisa試劑盒中標(biāo)準(zhǔn)品是已經(jīng)配制好的,4度保存,有的是要現(xiàn)配制的,按照大鼠elisa試劑盒說明書操作;
④濃縮*結(jié)合的二抗和HRP:如果需要配制,大鼠elisa試劑盒沒注明配好可以保存多久的話,盡量現(xiàn)配現(xiàn)用(用前15分鐘配制);原則是大鼠elisa試劑盒上沒有指出配制物的儲藏方式的話,應(yīng)該現(xiàn)配現(xiàn)用;不要怕麻煩;還有小瓶的管子開蓋前要離心,以免蓋子上粘連以后總量不夠;
⑤加樣:室溫溫育的試劑,特別是溫育時間比較短的實(shí)驗(yàn)操作的試劑,加樣對數(shù)據(jù)的影響比較大,特別要注意加樣問題。
大鼠elisa試劑盒實(shí)踐過程技巧:
1.操作前應(yīng)對實(shí)驗(yàn)的物理參數(shù)有充分的了解,如環(huán)境溫度(保持在18C~25℃)、反應(yīng)孵育溫度和孵育時間、洗滌的次數(shù)等,要先查看水育箱溫度,大鼠elisa試劑盒是否符合求。
2.正確使用加樣器加樣器應(yīng)垂直加入標(biāo)本或試劑,避免刮擦包被板底部。大鼠elisa試劑盒加樣過程中避免液體外濺,血清殘留在反應(yīng)孔壁上,加樣器吸頭要清洗干凈,避免污染,加樣次序要與說明書一致,否則可導(dǎo)致結(jié)果錯誤,實(shí)驗(yàn)重復(fù)性差。
3.手工洗板加洗液時沖擊力不要太大,洗滌次數(shù)不要超過說明書推薦的洗滌次數(shù),洗液在反應(yīng)孑L內(nèi)滯留的時間不宜太長。不要使洗液在孑L間竄流,造成孔問污染,導(dǎo)致假陰性或假陽性。
4.要保證加液量一致我們在使用時感覺滴瓶加液不如加樣器好,滴瓶不易控制加液量不準(zhǔn),造成顯色不統(tǒng)一,判斷錯誤。
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