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閱讀:250發(fā)布時間:2015-7-2
實驗方法原理 在葡萄糖-6-磷酸(GbB)和NADP存在下,葡萄糖-6-磷酸脫氫酶(G6PD)能使用NADP還原成NADPH,后者在紫外線照射下不會發(fā)出熒光。
實驗材料 G6P NADPHCl
試劑、試劑盒 氧化型*皂素蒸餾水
實驗步驟
一、 實驗試劑:混合試劑的與配方:
0.1mol/L G6P 1ml
7.5mmol/L NADP 1ml 0.7mol/L tris-HCl(PH7.8)3ml
8mmol/L 氧化型* 1ml
10g/L皂素2ml
蒸餾水2ml
如混合試劑分裝后-20℃保存,可穩(wěn)定數(shù)月
二、實驗操作:
1. 標本采集:EDTA·Na2H或肝素抗凝全血,若置4℃保存可穩(wěn)定1周,亦可用肝素化毛細血管從手指或足踉采末梢血液。
2. 取12MM×75MM試管3支,患者.正常(對照)和陽性(對照),血各管加入追合試劑200微升.
3. 向各管分別加入患者正常和陽性的抗凝全血20微升,混合后置25℃室溫中。
4. 在反應0/min(混勻后立即吸出)5min和10min時分別從各管吸出反應液1滴,加于新華1號液紙上,使充分干燥.
5. 在暗室內(nèi),用波長200-340nm的紫外線照射濾紙上的斑點,檢查有無熒光.
6. 正常人的0min斑點無熒光,5min和10min斑點出現(xiàn)熒光,10min斑點熒光zui強,G6PD缺陷患者在0min. 5min和10min均無熒光。
三、 實驗結果:正常人有甚強的熒光,G6PD缺陷患者熒光很弱或無熒光,雜合于或某些G6PD變異體者則可能有輕度到中度熒光.
收起
注意事項
1. 本法是直接測定;NADPH的量特異性較好.
2. 每次或每批要有G6PD正常和缺陷者的標本作對照.
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