酵母菌是單細(xì)胞的真核微生物。酵母菌的有性繁殖是通過(guò)形成單倍體的子囊孢子的方式進(jìn)行的。酵母菌存在單倍體和二倍體的生活史，具有孟德?tīng)柺降姆蛛x現(xiàn)象，以及a和a接合型．具有這兩種接合型的子囊孢子萌發(fā)生長(zhǎng)成單倍體的菌株，不同接合型的單倍體菌株細(xì)胞可以接合生成二倍體菌株。酵母菌二倍體的生活力較單倍體強(qiáng)，生產(chǎn)能力也明顯高于單倍體，因此通過(guò)雜交得到二倍體，有可能達(dá)到育種的目的。

    酵母菌的雜交主要是通過(guò)有性雜交，有性雜交是利用兩種不同接合型的單倍體菌株或子囊孢子進(jìn)行的。有的酵母菌如假絲酵母不具有性生殖，即不產(chǎn)生子囊孢子，它們的雜交與霉菌一樣，是通過(guò)準(zhǔn)性生殖過(guò)程進(jìn)行的。酵母菌雜交一般指異接合型菌株的雜交。雜交過(guò)程包括子囊孢子接觸、接合、合子形成．直至二倍體細(xì)胞出芽為止的一系列過(guò)程。雜交步驟包括遺傳標(biāo)記菌株的選擇和不同遺傳標(biāo)記的異接合型細(xì)胞雜交。

1.標(biāo)記親株的選擇

    酵母菌雜交育種的親株要求攜帶遺傳標(biāo)記，常用的遺傳標(biāo)記為營(yíng)養(yǎng)缺陷型或抗性突變型，也可以是菌落和細(xì)胞的形態(tài)。選擇標(biāo)記親本菌株一般是先選擇遺傳性狀優(yōu)良的原始親本，然后從兩個(gè)原始親本中選出不同接合型的單倍體菌株或者單倍體的子囊孢子，采用適合的誘變劑處理單倍體菌株，從中獲得帶有不同營(yíng)養(yǎng)缺陷基因的親本菌株作為雜交的直接親本。

2.雜交方法

(1)子囊孢子的制備酵母菌二倍體細(xì)胞在營(yíng)養(yǎng)貧乏的產(chǎn)孢子培養(yǎng)基上培養(yǎng)可形成子囊孢子。通常子囊孢子不易分離，可用蝸牛酶處理，振蕩，加液體石蠟，搖勻后子囊孢子就聚集于液體石蠟層中；或洗下子囊．加液體石蠟和硅膠土，研磨，4500r／min離心10min，破壁后被分離的子囊孢子集中到石蠟層。取含有子囊孢子的石蠟，再加人等量的15％明膠．混勻后涂布到瓊脂平板上培養(yǎng)，即可得到單倍體菌落，移人斜面，備用。

    酵母菌單倍體細(xì)胞與二倍體細(xì)胞在形態(tài)上存在一定的區(qū)別。二倍體細(xì)胞較大，呈橢圓形；菌落大且形態(tài)較一致；液體培養(yǎng)繁殖快，細(xì)胞較分散；在孢子培養(yǎng)基上可形成子囊。而單倍體細(xì)胞較小，呈球形；菌落小并且形態(tài)多變；液體培養(yǎng)時(shí)繁殖慢，細(xì)胞聚集成團(tuán)；在孢子培養(yǎng)基上不形成子囊。單倍體細(xì)胞具有接合能力，但不能形成孢子。根據(jù)在產(chǎn)孢子培養(yǎng)基上能否形成子囊孢子可以確定是否為單倍體細(xì)胞。將單倍體菌株與已知接合型a或a標(biāo)準(zhǔn)單倍體細(xì)胞雜交，確定單倍體細(xì)胞的接合型。

(2)有性雜交 酵母菌有性雜交的方法主要有孢子雜交法、群體雜交法和單倍體細(xì)胞雜交法三種。

①孢子雜交法在顯微操作器下．取單個(gè)子囊孢子．隨機(jī)配對(duì)，置于微滴培養(yǎng)液中培養(yǎng)，子囊孢子發(fā)芽并發(fā)生接合，形成接合子。

②群體雜交法把帶有遺傳標(biāo)記的兩種不同接合型單倍體細(xì)胞移接到*培養(yǎng)液中，混合培養(yǎng)過(guò)夜，使兩親本細(xì)胞在生長(zhǎng)中充分接合，然而把混合液分離在選擇培養(yǎng)基或基本培養(yǎng)基上，培養(yǎng)后形成二倍體的雜種菌落。

③單倍體細(xì)胞雜交法將兩種不同接合型的單倍體細(xì)胞在顯微操作器下隨機(jī)配對(duì)，進(jìn)行微滴培養(yǎng)。在顯微鏡下可直接觀(guān)察雜合子形成，并可在無(wú)遺傳標(biāo)記的情況下獲得雜合二倍體細(xì)胞。

    酵母菌和其他微生物雜交一樣，種間雜交比屬間雜交容易獲得優(yōu)良性狀的重組體。這是因?yàn)榉N問(wèn)雜交的遺傳特性比較穩(wěn)定，而屬間雜交產(chǎn)物易于發(fā)生遺傳分離造成的。