1．17羥孕酮Elisa試劑盒固相載體的選擇

    載體的種類很多，其中包括纖維素、交聯(lián)右旋糖酐、葡萄球菌聚苯乙烯、聚丙烯酰胺等。從使用形式上可有凹孔平板、試管、珠粒等。

    聚苯乙烯凹孔板是應(yīng)用zui廣泛的一種載體。聚苯乙烯塑料微量滴定板吸附蛋白的性能好，操作簡便、用量小，適于大批檢查。

    由于聚苯乙烯的工藝過程不夠穩(wěn)定,造成各批次差異較大。所以進(jìn)行ELISA之前，必須進(jìn)行篩選。

檢查方法：

⑴ 吸附性能的檢查：先加抗體包被，然后加入同一稀釋度的酶標(biāo)抗體，zui后加底物、顯色、測OD值,求出總平均OD值,再求出每相鄰兩孔的OD平均值,此均值在總均值的±10%以內(nèi)為合格,若中間孔與四周孔OD值相差太大，或一側(cè)與另一側(cè)孔OD值相差較大均屬不合格。

⑵ 對比測定陽性血清與陰性血清，觀察是否存在明顯差異，若二者OD值相差于10倍以上者為合格。

    板的處理。新板一般不用處理,用蒸餾水沖洗即可應(yīng)用。板用一次即廢。但不少實驗工作者認(rèn)為用超聲波處理，清潔液Tritonx100、20%乙二醇處理仍可應(yīng)用。但發(fā)現(xiàn)空白對照顯色較深和陽性樣品顯色結(jié)果不理想時，應(yīng)棄去不用。

2．載體的吸附條件

    載體的吸附均為物理吸附。吸附的多少取決于PH值、溫度、蛋白濃度、離子強(qiáng)度以及吸附時間等。

    較好的吸附條件是：離子強(qiáng)度為0.05Mol/L～0.10Mol/L，pH9.0～pH9.6碳酸鹽緩沖液，蛋白濃度為1μg/ml~100μg/ml，4℃過ye或37℃3h。

3．酶標(biāo)抗體使用濃度的確定

    于聚苯乙烯板孔中加足夠量的抗體包被,溫育一定時間，沖洗、把酶標(biāo)結(jié)合物倍比稀釋，每個稀釋度加2孔,溫育、沖洗、再加底物顯色、比色。以O(shè)D值為縱坐標(biāo),酶標(biāo)結(jié)合物的稀釋度為橫坐標(biāo)，制作曲線。找出OD值為1時，相對應(yīng)的酶標(biāo)抗體稀釋度為zui適酶標(biāo)抗體稀釋度。

    這個稀釋度是指在這種條件下的zui適稀釋度，換個條件就不是zui適的了。如1：400的酶標(biāo)抗體稀釋度溫育6h可與1：6 400稀釋度溫育24h結(jié)果相同。所以一旦條件確定之后，就不要變更，以保證結(jié)果的重復(fù)性和相對的準(zhǔn)確性。

    此zui適酶標(biāo)抗體稀釋度可做為工作濃度，17羥孕酮Elisa試劑盒也可提高半個至一個滴度，但不能提高過高，否則非特異性顯色增加。

    酶標(biāo)抗體的滴度反映酶標(biāo)抗體的質(zhì)量，也可以此比較酶標(biāo)結(jié)合物的優(yōu)劣。有材料報道認(rèn)為1：320滴度為合格,1：1 000以上更好。酶標(biāo)抗體滴度越高，用于工作濃度的稀釋倍數(shù)就越大，敏感性就越高，非特異性反應(yīng)就越低。
純度：    牛七堿            Szechenyine    ≥98%        
純度：    派利文堿    Perivine    ≥98%        
純度：    七葉苷    Esculin    ≥98%
純度：    漆黃素            Fisetin    ≥98%        
純度：    羥基酪醇    Hydroxytyrosol    ≥97%        
純度：    羥基吳茱萸堿    Hydroxyevodiamine    ≥98%        
純度：    茄尼醇    Solanesol    98%
純度：    芹菜苷元            Apigenin    ≥98%        
純度：    芹黃素            Apigenin    ≥98%        
純度：    秦艽甲素    Gentiannine    ≥95%
純度：    秦皮苷            Fraxin    ≥98%        
純度：    秦皮乙素            Aesculetin    ≥98%        
純度：    青陽參苷元            Qingyangshengenin    ≥98%        
純度：    人參苷元F11        Aglycone F11    ≥97%
純度：    鞣花酸    Ellagic acid    95% 98%
17羥孕酮Elisa試劑盒