17羥孕酮Elisa試劑盒法測定單克隆抗體的效價(jià)點(diǎn)擊次數(shù)：483 發(fā)布時(shí)間：2013/12/27
一、ELISA試劑盒實(shí)驗(yàn)?zāi)康?br />1、深入了解ELISA法測定抗體效價(jià)的原理。
2、掌握ELISA法測定單克隆抗體效價(jià)的方法。
二、實(shí)驗(yàn)原理
    ELISA是以免疫學(xué)反應(yīng)為基礎(chǔ)，將抗原、抗體的特異性反應(yīng)與酶對(duì)底物的催化作用相結(jié)合起來的一種敏感性很高的試驗(yàn)技術(shù)。免疫酶技術(shù)是將酶標(biāo)記在抗體/抗原分子上，形成酶標(biāo)抗體/酶標(biāo)抗原，稱為酶結(jié)合物。該酶結(jié)合物的酶在免疫反 應(yīng)后，作用于底物使之呈色，根據(jù)顏色的有無和深淺，定位或定量抗原/抗體。ELISA 法是免疫酶技術(shù)的一種，其特點(diǎn)是利用聚苯乙烯微量反應(yīng)板(或球)吸附抗原/抗體，使之固相化，免疫反應(yīng)和酶促反應(yīng)都在其中進(jìn)行。在每次反應(yīng)后都要反復(fù)洗 滌，這既保證了反應(yīng)的定量關(guān)系，也避免了末反應(yīng)的游離抗體/抗原的分離步驟。ELISA試劑盒在ELISA 法中。酶促反應(yīng)只進(jìn)行一次，而 抗原、抗體的免疫反應(yīng)可進(jìn)行一次或數(shù)次，即可用二抗(抗抗體)、三抗再次進(jìn)行免疫反應(yīng)。
   目前常用的幾種ELISA方法有：測定抗體的間接法，測定抗原的雙抗體夾心法和測定抗原的競爭法等。本實(shí)驗(yàn)采用間接法測定單克隆抗體效價(jià)。其主要過程為：首先將已知定量抗原吸附在聚苯乙烯微量反應(yīng)板的凹孔內(nèi)，加待測抗體，保溫后洗滌以除去未結(jié)合的雜蛋白質(zhì)，加酶標(biāo)抗抗體，保溫后洗滌，加底物保溫30分鐘后，加酸或堿終止酶促反應(yīng)，用目測或光電 
比色測定抗體含量。
三、操作步驟
①抗原包被：兔抗人IgG 作為抗原，用包被液l：8000稀釋，100μL/孔加入聚苯乙烯96孔反應(yīng)板中。4℃放置過夜。
②洗滌：次日傾去凹孔內(nèi)的液體，洗滌液洗3次。
③封閉：加l00μL/孔封閉液，室溫放置0.5h.
④洗滌：用洗滌液洗3次。
⑤加待測樣品(一抗)：將含單克降抗體的細(xì)胞培養(yǎng)上清在另-塊板上用PBS 連續(xù)稀釋(按照1：2或1：10)，100μL /孔加到 已包被的板上，每個(gè)樣品平行做兩份，PBS 或空白培養(yǎng)基作為陰性對(duì)照，已知樣品作為陽性對(duì)照。加蓋37℃恒溫箱溫育 1~2h。
⑥洗滌：用洗滌液洗3次。
⑦加酶標(biāo)抗抗體：兔抗鼠IgG-HRP，用封閉液l ：8000稀釋，100μL／孔，加蓋37℃恒溫箱溫育1h。
⑧洗滌：用洗滌液洗5次，蒸餾水洗2次。
⑨顯色：加新鮮配制的底物溶液100μL/孔，室溫暗處放置5～30min，顯示藍(lán)色。
⑩終止反應(yīng)、比色：加50μL/孔終止液。17羥孕酮Elisa試劑盒顏色變黃；用酶標(biāo)儀測定450nm 處各孔的吸光值，陽性反應(yīng)的zui大稀釋度為待測樣品的效價(jià)。
                        
    633-65-8        Berberine hydrochloride        HPLC≥98%    20mg/支
小檗堿    2086-83-1    黃連素堿    Berberine        HPLC≥98%    20mg/支
黃連堿    3486-66-6        Coptisine        HPLC≥98%    20mg/支
鹽酸黃連堿    6020-18-4    氯化黃連堿    Coptisine chloride        HPLC≥98%    20mg/支
胡黃連苷I    27409-30-9    胡黃連苦苷I    Picroside I        HPLC≥98%    20mg/支
胡黃連苷II    39012-20-9    胡黃連苦苷II    Picroside II        HPLC≥98%    20mg/支
胡黃連苷III    64461-95-6    胡黃連苦苷III    Picroside III        HPLC≥98%    10mg/支
(+)-兒茶素    225937-10-0        (+)-Catechin hydrate        HPLC≥98%    20mg/支
17羥孕酮Elisa試劑盒