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EL DRGelisa試劑盒說明書

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更新時間:2019-01-18 14:01:06瀏覽次數(shù):503次

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EL DRGelisa試劑盒說明書

Human Endothelial lipase,EL ELISA Kit

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人內(nèi)皮脂肪酶(EL)DRGelisa試劑盒 Human Endothelial lipase,EL ELISA Kit
EL DRGelisa試劑盒說明書【實驗用途】內(nèi)皮脂肪酶(Endothelial lipase,EL)是近幾年被發(fā)現(xiàn)的一個脂肪酶家族新成員.1999年Hirata等利用削減雜交在培養(yǎng)的人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞中*克隆到了EL,同年,Jaye等利用其他方法也證實了EL.近,人們又克隆出了EL的兩種異構(gòu)體,它們存在于內(nèi)皮細(xì)胞胞質(zhì)內(nèi),但并沒有脂肪酶活性。所提供的ELISA Kit是典型的夾心法酶聯(lián)免疫吸附測定試劑盒(ELISA)。預(yù)先包被的抗體為多克隆抗體。檢測相抗體也為多克隆抗體,經(jīng)(biotin)標(biāo)記。樣品和標(biāo)記抗體先后加入酶標(biāo)板孔反應(yīng)后,PBS或TBS洗滌。隨后加入過氧化物酶標(biāo)記的親和素反應(yīng);經(jīng)過PBS或TBS的*洗滌后用底物TMB顯色。TMB在過氧化物酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色,并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成終的黃色。顏色的深淺和樣品中的待測因子呈正相關(guān)。
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操作流程:
(1)EL DRGelisa試劑盒說明書待測樣品孔中每孔加入待測樣品100μl,每種樣品設(shè)3個平行孔;設(shè)兩個陰性對照孔,每孔加未處理組的細(xì)胞裂解液100μl;另設(shè)一個空白對照孔,加入純細(xì)胞裂解液100μl。 
(2)酶標(biāo)板置4℃,包被過夜。
(3)洗板:吸干孔內(nèi)反應(yīng)液,用洗滌液過洗一遍(將洗滌液注滿板孔后,即甩去),之后將洗滌液注滿板孔,浸泡1-2分鐘,間歇搖動。甩去孔內(nèi)液體后在吸水紙上拍干。重復(fù)洗滌3-4次。
(4)陰性對照孔每孔加入PBS 50μl,樣品孔及空白孔每孔加入1:500稀釋的兔抗人AIF抗體工作液50μl。 
(5)酶標(biāo)板置37℃培養(yǎng)箱的濕盒內(nèi),孵育60min。 
(6)洗板,同(4)。 
(7)每孔加1:5000稀釋的HRP-標(biāo)記的山羊抗兔抗體工作液 100μl。 
(8)酶標(biāo)板置37℃培養(yǎng)箱的濕盒內(nèi),孵育60min。 
(9)洗板,同(4)。 
(10)每孔加TMB顯色液 100μl,輕輕混勻10s,置37℃暗處反應(yīng)15-20min。 
(11)每孔加100μl 2mol/L H2SO4終止反應(yīng)。 
(12)分別測450nm 吸光值W1和630nm吸光值W2,終測得的OD值為兩者之差(W1-W2),以減少由容器上的劃痕或指印等造成的光干擾。
(13)數(shù)據(jù)處理:在得出標(biāo)本(S)和陰性對照(N)的 OD值后,計算S/N值。S/N≥2.1為陽性判定標(biāo)準(zhǔn)。
試劑盒組成及試劑配制 :
1.EL DRGelisa試劑盒說明書 酶聯(lián)板(Assay plate ):一塊(96孔)。 
2. 標(biāo)準(zhǔn)品(Standard):2瓶(凍干品)。
3. 樣品稀釋液(Sample Diluent):1×20ml/瓶
4. 標(biāo)記抗體稀釋液(Biotin-antibody Diluent):1×10ml/瓶。
5. 辣根過氧化物酶標(biāo)記親和素稀釋液 (HRP-avidin Diluent):1×10ml/瓶。
6. 標(biāo)記抗體(Biotin-antibody):1×120μl/瓶(1:100)
7. 辣根過氧化物酶標(biāo)記親和素(HRP-avidin):1×120μl/瓶(1:100)
8. 底物溶液(TMB Substrate):1×10ml/瓶。 
9. 濃洗滌液(Wash Buffer):1×20ml/瓶,使用時每瓶用蒸餾水稀釋25倍。 
10. 終止液(Stop Solution):1×10ml/瓶(2N H2SO4)。
兔子Ⅲ型前膠原氨基端肽(PⅢNT)ELISA Kit  *

兔子Ⅲ型前膠原肽(PⅢNP)ELISA Kit  *

兔子α2抗纖溶酶(α2-AP)ELISA Kit  *

兔子α干擾素(IFN-α)ELISA Kit  *

兔子β血小板球蛋白/β血栓環(huán)蛋白(β-TG)ELISA Kit  *

兔子γ干擾素(IFN-γ)ELISA Kit  *

兔子白介素1(IL-1)ELISA Kit  *

兔子白介素10(IL-10)ELISA Kit  *

兔子白介素1β (IL-1β)ELISA Kit  *

兔子白介素1可溶性受體I (IL-1sR Ⅰ)ELISA Kit  *

兔子白介素2(IL-2)ELISA Kit  *

兔子白介素3(IL-3)ELISA Kit  *
高pH 緩沖液套裝 30次 High pH Buffer Set 常溫保存(5×高pH上樣液需要-20℃保存)

中pH 緩沖液套裝 30次 Medium pH Buffer Set 常溫保存(5×中pH上樣液需要-20℃保存)

低pH 緩沖液套裝 30次 Low pH Buffer Set 常溫保存(5×低pH上樣液需要-20℃保存)

銀染清除劑 30次 Silver Stain Erasol 常溫保存

終點顯色法內(nèi)毒素定量試劑盒 32次 Chromogenic End-point TAL Kit  4℃避光保存

DNA UV防護(hù)劑 3g NDAUV Erasol 4℃保存

蛋白去除試劑S 3g  Oxidative Stress Detection Kit 常溫保存

Tubulin-Tracker Red(微管紅色熒光探針) 40 μl Fluorescent Probe and Tracer -20℃保存

限制性內(nèi)切酶NdeI 400 U Restriction Endonuclease -20℃保存

乙?;Q灏椎鞍住?00µL Bovine Serum Albumin, Acetylated -20℃保存

Phosphate Buffered Saline,10X (for blot washing) 4000mL Phosphate Buffered Saline,10X (for blot washing) 常溫保存

RNase抑制劑(人源) 400U Human RNase Inhibitor -20℃保存

雙脫氧dNTP溶液(10mM) 40uL×4 ddNTP Solution -20℃保存

miRNA PAGE膠回收試劑盒 40次 miRNABACK 4℃保存

超氧化物歧化酶測試盒 48 T Oxidative Stress Detection Kit 常溫保存
EL DRGelisa試劑盒說明書動物糖蛋白麥芽凝集素(WGA)樹脂法純化試劑盒5次*

動物糖蛋白化學(xué)法*糖基分解試劑盒20次*

動物糖蛋白電泳遷移檢測試劑盒5次*

動物糖蛋白刀豆蛋白A(ConA)樹脂法純化試劑盒5次*

動物糖蛋白氨基苯硼酸(APA)樹脂法純化試劑盒5次*

動物腎臟組織細(xì)胞分離培養(yǎng)試劑盒10次*

動物腎上腺組織細(xì)胞分離培養(yǎng)試劑盒10次*

動物神經(jīng)組織細(xì)胞分離培養(yǎng)試劑盒10次*

 

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