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所 在 地上海市
更新時間:2021-03-16 15:27:17瀏覽次數(shù):881次
聯(lián)系我時,請告知來自 環(huán)保在線培養(yǎng)操作步驟 :
1.用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出,用無菌絲綢布擦拭干凈,不要用紗布;
2.將蓋玻片輕輕放入6孔培養(yǎng)板(每孔一片)或培養(yǎng)皿中(每個平皿可放置2-3片);
3.在距離紫外燈直射范圍內(nèi)20-30 厘米處照射2-3小時;
4.將經(jīng)過計數(shù)的細胞懸浮液移入培養(yǎng)板中,使蓋玻片*浸在培養(yǎng)液中;
5.將培養(yǎng)板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天,當貼壁細胞生長至覆蓋培養(yǎng)板底部2/3面積時,將培養(yǎng)板取出,用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片,用蒸餾水漂洗后即可進行快速固定以及免疫細胞化學檢測。
下列是產(chǎn)品的訂購信息:
產(chǎn)品名稱 | A375細胞,人類惡性黑色素瘤說明書 |
英文名稱 | A375 cells, human malignant melanoma |
貨號 | EY-X63403 |
細胞培養(yǎng)的優(yōu)點:
1.研究的對象是活細胞
在實驗過程中,根據(jù)要求可始終保持細胞活力,并可長時間監(jiān)控、檢測甚至定量評估一部分活細胞的情況,包括活細胞的形態(tài)、結(jié)構(gòu)、生命活動等。
2.研究條件可以人為控制
pH、溫度、氧氣、二氧化碳、張力等物理化學的條件,可以根據(jù)實際需要進行人為的控制,同時,可以施加化學、物理、生物等因素作為條件而進行實驗觀察,這些因素同樣可以處于嚴格控制之下。
3.研究的樣本可以達到比較均一性
通過細胞培養(yǎng)一定代數(shù)后,所得到的細胞系則可以達到均一性而屬于同一類型的細胞,需要時,可采用克隆化等方法使細胞達到純化。
4.研究內(nèi)容便于觀察、檢測和記錄
采用各種研究技術(shù):如倒置生物顯微鏡、熒光顯微鏡、電子顯微鏡、流式細胞術(shù)、激光共焦顯微鏡、免疫組織化學、原位雜交、同位素標記等各種儀器設(shè)備。
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實驗要點及說明:
1.本方法適用于貼壁細胞培養(yǎng),而不適用于懸浮細胞培養(yǎng),懸浮細胞可使用滴片法;
2.所使用的蓋玻片應(yīng)該為優(yōu)質(zhì)玻璃,并經(jīng)過鉻酸洗液處理;
3.蓋玻片非常薄,易碎,取放蓋玻片時動作要輕;
4.如果需要更多生長狀態(tài)一致的細胞,可以使用較大的培養(yǎng)皿,但不宜過大,以避免培養(yǎng)液的浪費和增加污染機率;
5.如果細胞貼壁生長能力較差,可將蓋玻片在0.5%多聚賴氨酸溶液中浸泡5-10分鐘并自然晾干。
細胞培養(yǎng)方法:
1、細胞傳代:細胞密度達到80-90%時即可傳代
①棄去培養(yǎng)上清,用PBS或生理鹽水清洗1-2次;
②加入2ml0.25%(T25瓶),使覆蓋整個瓶或皿,蓋好放入培養(yǎng)箱消化;
③1-2min后,顯微鏡下觀察細胞,若大部分細胞回縮且有少量細胞脫落,輕輕吹打下確認消化情況后加入*培養(yǎng)基終止消化;若細胞還是貼壁,放回培養(yǎng)箱繼續(xù)消化至可以輕輕吹打下為止;
④將細胞懸液1000RPM左右條件下離心4min,棄上清;
⑤用新鮮培養(yǎng)基重懸后加入培養(yǎng)瓶或皿中,T25培養(yǎng)瓶加6-8ml培養(yǎng)基;
⑥懸浮細胞直接離心收集,細胞沉淀重懸后分到新培養(yǎng)瓶中。
2、細胞復(fù)蘇:
①將凍存管在37℃溫水中快速搖晃融化,時間1min左右,加入4-5ml培養(yǎng)基混勻。
②在1000RPM左右條件下離心4min,棄上清,加1-2ml培養(yǎng)基吹勻,將細胞懸液加入培養(yǎng)瓶中,補加適量培養(yǎng)基。
3、細胞凍存:待細胞生長狀態(tài)良好時進行細胞凍存保種
①棄去培養(yǎng)上清,用PBS或生理鹽水清洗1-2次,加入1mL 0.25%(T25瓶)
②1-2min后,顯微鏡下觀察細胞,大部分細胞回縮且有少量細胞脫落,輕輕吹打下確認消化情況后加入*培養(yǎng)基終止消化;
③將細胞懸液1000RPM左右條件下離心4min,棄上清,加1ml凍存液重懸細胞;
④將凍存管放入程序降溫盒,放入-80℃冰箱,4小時后將凍存管轉(zhuǎn)入液氮罐儲存。
人參皂苷Rh1 CAS 63223-86-9 規(guī)格:20mg 訂購|咨詢
密蒙花 CAS 規(guī)格:0.5g 訂購|咨詢
豆腐果苷;Helicid CAS 80154-34-3 規(guī)格:100mg 訂購|咨詢
紅景天苷 CAS 10338-51-9 規(guī)格:HPLC≥98%,20mg/支 訂購|咨詢
衛(wèi)矛醇;Dulcitol CAS 608-66-2 規(guī)格:20mg 訂購|咨詢
(+)-兒茶素,兒茶酚,兒茶酸,鄰苯二酚 CAS 225937-10-0 規(guī)格:HPLC≥98%,20mg/vial 訂購|咨詢
可樂定 CAS 4205-91-8 規(guī)格:100mg 訂購|咨詢
原花青素;Procyanidin CAS 4852-22-6 規(guī)格:20mg 訂購|咨詢
大豆皂苷Ba CAS 114590-20-4 規(guī)格:HPLC≥98%;20mg 訂購|咨詢
人參皂苷Rg3;Ginseside CAS 14197-60-5 規(guī)格:20mg 訂購|咨詢
凝乳酶 CAS 規(guī)格:35mg/支 訂購|咨詢
A375細胞,人類惡性黑色素瘤說明書乙酰化組蛋白H2A抗體 英文名稱:Acetyl-Histone H2A(K5) 0.1ml
乙?;M蛋白H2B抗體 英文名稱:Acetyl-Histone H2B(K5) 0.1ml
乙?;M蛋白H2B抗體 英文名稱:Acetyl-Histone H2B(K20) 0.1ml
磷酸化組蛋白H2AX抗體 英文名稱:Phospho-Histone H2A.X (Tyr143) 0.1ml
磷酸化熱休克蛋白27抗體 英文名稱:Phospho-HSP27 (Ser254) 0.1ml
磷酸化熱休克因子1抗體 英文名稱:phospho-HSF1(Ser303) 0.2ml
磷酸化熱休克蛋白70抗體 英文名稱:phospho-HSP70(Tyr41) 0.1ml
磷酸化熱休克因子1抗體 英文名稱:phospho-HSF1(Ser307) 0.1ml
磷酸化熱休克蛋白70抗體 英文名稱:phospho-HSP70 (Tyr525) 0.1ml
E3泛素蛋白連接酶HACE1抗體 英文名稱:HACE1 0.2ml
結(jié)節(jié)性硬化癥蛋白1抗體 英文名稱:Hamartin 0.1ml
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