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閱讀:192發(fā)布時間:2016-2-19
【爬片的準備】
1.爬片可用一般的蓋玻片,也可用爬片;
2.應用蓋玻片,可根據(jù)自己的需要剪裁成合適的大小,以備置于6孔板、12孔板或24孔板;裁剪時可用前護士輸液用于打開玻璃安瓶的小沙輪,或者是口腔科的那種小沙輪,輕輕劃一下后,稍用力一掰就分開了。
如果接種大皿的話,我一般不將蓋玻片切開,直接清潔后放入培養(yǎng)皿中,到染色時再將之切開,這樣既保證了細胞均一性,又可同時做幾個指標的染色。
3.將剪裁好的爬片,置于濃硫酸中浸泡并過夜,第二天先用自來水沖洗20遍,再置于無水酒清中浸泡6小時,再用三蒸水沖洗3遍(個人認為主要目的是將酸沖洗干凈就可以了,如果不干凈的話,細胞帖壁不好),放在飯盒或者玻璃培養(yǎng)皿中烘干后進行高壓消毒。
4.高壓后取出放入烤箱中烤干,備用。烤干后可放入超凈臺中。
5.關于多聚賴氨酸,很多人都將玻片用此處理,以使細胞與玻片結(jié)合更牢。但我在做爬片時從來沒用過多聚賴氨酸,細胞貼壁仍然很好,且在做后續(xù)的免疫細胞化學染色、TUNEL等凋亡檢測、免疫熒光等也從未脫過片。
【細胞爬片】
1.*消化細胞后計數(shù)重懸細胞于*培養(yǎng)基中。
2.加細胞時,根據(jù)玻片的大小,先在每個孔里準備放爬片的位置滴少量培養(yǎng)基,目的是使玻片與培養(yǎng)皿靠培養(yǎng)基的張力粘合到一起,然后放玻片,防止加細胞懸液時玻片漂起,造成雙層細胞貼片。整個過程注意無菌操作。
3.根據(jù)自己的需要選擇合適的細胞密度種入培養(yǎng)板內(nèi)即可
4.待細胞貼壁后,可去上清加含藥培養(yǎng)基。
5.按照實驗設計,作用一定時間后取玻片。取玻片時由于玻片與培養(yǎng)皿底結(jié)合較緊,張力較大,我一般將注射器針頭針尖向背面弄個小鉤,這樣將爬片輕輕勾起,用小鑷子取出就可以了。如果要做諸如24h,48h,72h等這樣時間點的實驗的話,將所需數(shù)量的爬片取出時應用酒精燈火焰燒一下針頭和鑷子。末取出的可接著繼續(xù)培養(yǎng)。
【細胞爬片的固定】
細胞爬片取出后,一般用PBS洗2遍,然后再做固定。當然,根據(jù)研究目的,PBS洗也不是一定要做的,比如做凋亡的TUNEL染色時就避免洗,因為凋亡的細胞在洗的過程中有可能會脫落。
另外在保存細胞爬片的時候,我一般用培養(yǎng)皿或板,先在皿底放一層面巾紙,然后再放爬片,這樣方便做實驗時取片。然后蓋上蓋子,并在蓋子上做標記,為避免混淆,可用透明膠帶將蓋子和皿連在一起。一般-20℃保存2-3個月的片子做免疫組化是沒有問題的。
以下為常用的固定液
1. 冷丙酮 可用于一般的免疫組化染色。
將純的丙酮預先放入冰箱-20℃后便為冷丙酮(放心,丙酮在此溫度不會為固體的)細胞爬片取出后,PBS洗2遍,便可加入冷丙酮于-20℃(丙酮有很強的揮發(fā)性,注意將含有丙酮和爬片的器皿蓋嚴,防止其揮發(fā))固定10分鐘。取出后,室溫吹干,然后放入-20℃保存。
2. 多聚甲醛(常用4%):可用于免疫電鏡;也可用于免疫熒光以及TUNEL染色。
主要檢測組織內(nèi)一些性能嬌弱的抗原特別是細胞表面抗原,例如各類淋巴細胸分化決定簇(CD)、主要組織相容性抗原等
室溫固定15分鐘后,將表面液體吹干,入-20℃保存
3. 95%乙醇,可用于免疫組化。
優(yōu)點:穿透性強、抗原性保存較好。
缺點:但醇類對低分子蛋白質(zhì)、多肽及胞漿內(nèi)蛋白質(zhì)保存效果較差,使蛋白變性的作用輕,固定后可再溶解;染色過程中,溫育時間長,抗原可流失而減弱反應強度
室溫固定15分鐘后,將表面液體吹干,入-20℃保存
4. 甲醛(福爾馬林)應用zui廣
優(yōu)點:形態(tài)結(jié)構保存好,且穿透性強,
缺點: 甲醛放置過久可氧化為甲酸,使溶液pH降低,影響染色; 分子間交聯(lián)形成的網(wǎng)格結(jié)構可能部分或*掩蓋某些抗原決定簇,使之不能充分暴露??稍斐杉訇幮缘娜旧Y(jié)果。
產(chǎn)品:
鮑氏多價診斷血清 | 咨詢. | 1ml/瓶 | 注冊批件 | 【英文名稱】咨詢. 【編號】BS6234 【規(guī)格】1ml/瓶 【包裝用途】注冊批件 |
馬尿酸鈉 | 咨詢. | 20支/盒 | 可參考產(chǎn)品說明書(索取產(chǎn)品說明書) | 【英文名稱】咨詢. 【編號】BS5090 【規(guī)格】20支/盒 【包裝用途】可參考產(chǎn)品說明書(索取產(chǎn)品說明書) |
阪崎腸桿菌套裝生化鑒定管10種(GB4789) | 咨詢. | 12支/套×10套 | 包含氧化酶、賴氨酸、*、*、氨基酸對照、*、蔗糖、 鼠李糖、蜜二糖、苦杏仁甙、檸檬酸鹽、液體石蠟 | 【英文名稱】咨詢. 【編號】21508 【規(guī)格】12支/套×10套 【包裝用途】包含氧化酶、賴氨酸、*、*、氨基酸對照、*、蔗糖、 鼠李糖、蜜二糖、苦杏仁甙、檸檬酸鹽、液體石蠟 |
創(chuàng)傷弧菌成套生化鑒定管 | 咨詢. | 9種×2套/盒×5盒 | 用于創(chuàng)傷弧菌的生化鑒定,每盒組成:無鹽胰胨水2支,6%氯化鈉胰胨水2支,8%氯化鈉胰胨水2支,10%氯化鈉胰胨水2支,3%氯化鈉VP半固體培養(yǎng)基2支,3%氯化鈉賴氨酸脫羧酶2支,3%氯化鈉氨基酸脫羧酶對照2支,3%氯化鈉ONPG2支,氧化酶試紙1包,無菌液體石蠟1支(GB 標準) | 【英文名稱】咨詢. 【編號】SHBG12 【規(guī)格】9種×2套/盒×5盒 【包裝用途】用于創(chuàng)傷弧菌的生化鑒定,每盒組成:無鹽胰胨水2支,6%氯化鈉胰胨水2支,8%氯化鈉胰胨水2支,10%氯化鈉胰胨水2支,3%氯化鈉VP半固體培養(yǎng)基2支,3%氯化鈉賴氨酸脫羧酶2支,3%氯化鈉氨基酸脫羧酶對照2支,3%氯化鈉ONPG2支,氧化酶試紙1包,無菌液體石蠟1支(GB 標準) |
腮腺炎病毒IgG抗體測定試劑盒 | 咨詢. | 48T | 供研究用 | 【英文名稱】咨詢. 【編號】BS6319 【規(guī)格】48T 【包裝用途】供研究用 |
*顯色平板(9cm) | 咨詢. | 10個/包 | 可參考產(chǎn)品說明書(索取產(chǎn)品說明書) | 【英文名稱】咨詢. 【編號】HBPM7009 【規(guī)格】10個/包 【包裝用途】可參考產(chǎn)品說明書(索取產(chǎn)品說明書) |
固氮根瘤菌培養(yǎng)基 | Nitrogen-fixing Rhizobium Medium | 250g | 用于固氮菌的分離培養(yǎng) | 【英文名稱】Nitrogen-fixing Rhizobium Medium 【編號】HB8542 【規(guī)格】250g 【包裝用途】用于固氮菌的分離培養(yǎng) |
胰酪胨大豆多粘菌素肉湯添加劑 | 咨詢. | 1ml×10支/盒 | 每 0.1ml 加入 15ml11213 中 | 【英文名稱】咨詢. 【編號】21204 【規(guī)格】1ml×10支/盒 【包裝用途】每 0.1ml 加入 15ml11213 中 |
姜黃素 | 咨詢. | 5g | AR | 【英文名稱】咨詢. 【編號】BS7134 【規(guī)格】5g 【包裝用途】AR |
腸道菌增菌肉湯(2015版藥典) | 咨詢. | 250g | 可參考產(chǎn)品說明書(索取產(chǎn)品說明書) | 【英文名稱】咨詢. 【編號】22161 【規(guī)格】250g 【包裝用途】可參考產(chǎn)品說明書(索取產(chǎn)品說明書) |
培養(yǎng)基Q | Medium Q (Columbia agar) | 250g | 用于梭菌的分離培養(yǎng) | 【英文名稱】Medium Q (Columbia agar) 【編號】HB0124-4 【規(guī)格】250g 【包裝用途】用于梭菌的分離培養(yǎng) |
包姜氏瓊脂培養(yǎng)基基礎 | Bordet-Gengou Agar Medium Base | 250g/瓶 | 用于百日咳桿菌的分離,需添加 1%甘油和 15%脫纖維羊血 50701 | 【英文名稱】Bordet-Gengou Agar Medium Base 【編號】12145 【規(guī)格】250g/瓶 【包裝用途】用于百日咳桿菌的分離,需添加 1%甘油和 15%脫纖維羊血 50701 |
L-*營養(yǎng)瓊脂基礎 | 咨詢. | 250g | 可參考產(chǎn)品說明書(索取產(chǎn)品說明書) | 【英文名稱】咨詢. 【編號】28382 【規(guī)格】250g 【包裝用途】可參考產(chǎn)品說明書(索取產(chǎn)品說明書) |
DKW培養(yǎng)基 | 咨詢. | 250g | 用于植物組織的培養(yǎng) | 【英文名稱】咨詢. 【編號】BS1317 【規(guī)格】250g 【包裝用途】用于植物組織的培養(yǎng) |
輪狀病毒酶免疫試劑盒 | 咨詢. | 96tests | 可參考產(chǎn)品說明書(索取產(chǎn)品說明書) | 【英文名稱】咨詢. 【編號】M480 【規(guī)格】96tests 【包裝用途】可參考產(chǎn)品說明書(索取產(chǎn)品說明書) |
*(USP) | Potato Dextrose Agar Medium | 250g | 用于霉菌、酵母菌計數(shù) | 【英文名稱】Potato Dextrose Agar Medium 【編號】HB0233-11 【規(guī)格】250g 【包裝用途】用于霉菌、酵母菌計數(shù) |
Stuart* | Stuart Transport Medium | 250g/瓶 | 用于致病菌標本的采集、運輸和保存 | 【英文名稱】Stuart Transport Medium 【編號】12003 【規(guī)格】250g/瓶 【包裝用途】用于致病菌標本的采集、運輸和保存 |
60g/L氯化鈉蛋白胨水(PW) | 咨詢. | 250g | 可參考產(chǎn)品說明書(索取產(chǎn)品說明書) | 【英文名稱】咨詢. 【編號】25063 【規(guī)格】250g 【包裝用途】可參考產(chǎn)品說明書(索取產(chǎn)品說明書) |
3%NaCl*脫羧酶試驗 | 咨詢. | 1ml×10支/盒 | 生化試驗,接種后每支滴加200~300ul 20303 覆蓋 | 【英文名稱】咨詢. 【編號】20511 【規(guī)格】1ml×10支/盒 【包裝用途】生化試驗,接種后每支滴加200~300ul 20303 覆蓋 |
改良磷酸鹽緩沖液PSB | Phosphate Saline Buffer,Modified | 250g | 用于小腸結(jié)腸炎耶爾森氏菌冷增菌培養(yǎng) (GB標準) | 【英文名稱】Phosphate Saline Buffer,Modified 【編號】HB0271 【規(guī)格】250g 【包裝用途】用于小腸結(jié)腸炎耶爾森氏菌冷增菌培養(yǎng) (GB標準) |
改良Y瓊脂平板 | 咨詢. | 90mm×20個/盒 | 可參考產(chǎn)品說明書(索取產(chǎn)品說明書) | 【英文名稱】咨詢. 【編號】C29915B1 【規(guī)格】90mm×20個/盒 【包裝用途】可參考產(chǎn)品說明書(索取產(chǎn)品說明書) |
馬鈴薯蔗糖水 | Potato Sucrose Water | 250g/瓶 | 用于真菌的培養(yǎng) | 【英文名稱】Potato Sucrose Water 【編號】11175 【規(guī)格】250g/瓶 【包裝用途】用于真菌的培養(yǎng) |
干熱滅菌指示標簽 | 咨詢. | 1000片/卷 | 可參考產(chǎn)品說明書(索取產(chǎn)品說明書) | 【英文名稱】咨詢. 【編號】CI-DHI 【規(guī)格】1000片/卷 【包裝用途】可參考產(chǎn)品說明書(索取產(chǎn)品說明書) |
兔血漿 | Rabbit Plasma | 0.5ml/支×10 | 用于*凝固酶試驗 | 【英文名稱】Rabbit Plasma 【編號】HB4117 【規(guī)格】0.5ml/支×10 【包裝用途】用于*凝固酶試驗 |
Pfizer選擇性腸球菌瓊脂培養(yǎng)基 | 咨詢. | 100g | 可參考產(chǎn)品說明書(索取產(chǎn)品說明書) | 【英文名稱】咨詢. 【編號】28961 【規(guī)格】100g 【包裝用途】可參考產(chǎn)品說明書(索取產(chǎn)品說明書) |
茚三酮試劑(馬尿酸鹽試劑) | 咨詢. | 10ml/盒 | 可參考產(chǎn)品說明書(索取產(chǎn)品說明書) | 【英文名稱】咨詢. 【編號】29231 【規(guī)格】10ml/盒 【包裝用途】可參考產(chǎn)品說明書(索取產(chǎn)品說明書) |
瓊脂培養(yǎng)基S | Agar medium S(R2A) | 250g | 用于制藥用水中菌落總數(shù)測定 | 【英文名稱】Agar medium S(R2A) 【編號】HB0167-1 【規(guī)格】250g 【包裝用途】用于制藥用水中菌落總數(shù)測定 |
抗生素檢定培養(yǎng)基2號(高pH) | 咨詢. | 250g | 可參考產(chǎn)品說明書(索取產(chǎn)品說明書) | 【英文名稱】咨詢. 【編號】22174 【規(guī)格】250g 【包裝用途】可參考產(chǎn)品說明書(索取產(chǎn)品說明書) |
阿東醇發(fā)酵管 | 咨詢. | 1ml×10支/盒 | 可參考產(chǎn)品說明書(索取產(chǎn)品說明書) | 【英文名稱】咨詢. 【編號】20219 【規(guī)格】1ml×10支/盒 【包裝用途】可參考產(chǎn)品說明書(索取產(chǎn)品說明書) |
*培養(yǎng)基 | Glycine Medium | 250g | 用于彎曲桿菌*耐受性試驗(GB標準) | 【英文名稱】Glycine Medium 【編號】HB0245 【規(guī)格】250g 【包裝用途】用于彎曲桿菌*耐受性試驗(GB標準) |
GVPC瓊脂平板(9cm) | GVPC Agar Base | 10個/包 | 用于軍團菌的選擇性分離培養(yǎng) | 【英文名稱】GVPC Agar Base 【編號】HBPM031 【規(guī)格】10個/包 【包裝用途】用于軍團菌的選擇性分離培養(yǎng) |
細菌增菌液 | 咨詢. | 10ml×10支/盒 | 用于細菌的增菌培養(yǎng) | 【英文名稱】咨詢. 【編號】BS3092 【規(guī)格】10ml×10支/盒 【包裝用途】用于細菌的增菌培養(yǎng) |
MSB培養(yǎng)基 | Modified Scholtens’Broth(MSB) | 250g | 用于宿主細胞大腸桿菌WG5的培養(yǎng) | 【英文名稱】Modified Scholtens’Broth(MSB) 【編號】HB8720 【規(guī)格】250g 【包裝用途】用于宿主細胞大腸桿菌WG5的培養(yǎng) |
大豆酪蛋白消化肉湯 | Casein soya bean digest broth | 250g/瓶 | 用于藥品的無菌檢測 | 【英文名稱】Casein soya bean digest broth 【編號】10109 【規(guī)格】250g/瓶 【包裝用途】用于藥品的無菌檢測 |
伊紅美藍瓊脂 | 咨詢. | 90mm×10個/包 | 用于腸道菌選擇性分離培養(yǎng) | 【英文名稱】咨詢. 【編號】30404 【規(guī)格】90mm×10個/包 【包裝用途】用于腸道菌選擇性分離培養(yǎng) |
乙型腦炎疫苗效力測定試劑盒 | 咨詢. | 48T | 供研究用 | 【英文名稱】咨詢. 【編號】BS6359 【規(guī)格】48T 【包裝用途】供研究用 |
MH肉湯 | Mueller-Hinton Broth | 250g/瓶 | 用于稀釋法進行藥敏試驗 | 【英文名稱】Mueller-Hinton Broth 【編號】11816 【規(guī)格】250g/瓶 【包裝用途】用于稀釋法進行藥敏試驗 |
賴氨酸脫羧酶試驗培養(yǎng)基 | Lysine-decarboxylase Test Medium | 250g/瓶 | 用于細菌的賴氨酸脫羧酶試驗 | 【英文名稱】Lysine-decarboxylase Test Medium 【編號】10406 【規(guī)格】250g/瓶 【包裝用途】用于細菌的賴氨酸脫羧酶試驗 |
羅伊氏乳桿菌CICC6226 | 咨詢. | 凍干 | 可參考產(chǎn)品說明書(索取產(chǎn)品說明書) | 【英文名稱】咨詢. 【編號】FSCC173017 【規(guī)格】凍干 【包裝用途】可參考產(chǎn)品說明書(索取產(chǎn)品說明書) |
豬心胨(進口) | 咨詢. | 25kg | 可參考產(chǎn)品說明書(索取產(chǎn)品說明書) | 【英文名稱】咨詢. 【編號】A1504 【規(guī)格】25kg 【包裝用途】可參考產(chǎn)品說明書(索取產(chǎn)品說明書) |
MRSA篩選瓊脂基礎 | Oxacillin Resistance Screening Agar Base | 250g/瓶 | 用于抗**的篩選,每升培養(yǎng)基中需添加5萬IU*和2mg苯唑西林 | 【英文名稱】Oxacillin Resistance Screening Agar Base 【編號】10833 【規(guī)格】250g/瓶 【包裝用途】用于抗**的篩選,每升培養(yǎng)基中需添加5萬IU*和2mg苯唑西林 |
95%乙醇溶液 | 咨詢. | 10ml×4支/盒 | 可參考產(chǎn)品說明書(索取產(chǎn)品說明書) | 【英文名稱】咨詢. 【編號】21511 【規(guī)格】10ml×4支/盒 【包裝用途】可參考產(chǎn)品說明書(索取產(chǎn)品說明書) |
臧紅T | 咨詢. | 25g | AR | 【英文名稱】咨詢. 【編號】BS7150 【規(guī)格】25g 【包裝用途】AR |
羅* | 咨詢. | 5g | AR CAS NO | 【英文名稱】咨詢. 【編號】BS7122-5g 【規(guī)格】5g 【包裝用途】AR CAS NO |
革蘭氏陰性桿菌鑒定系統(tǒng)BGN-MIDB | 咨詢. | MID-65 (12tests) | 可參考產(chǎn)品說明書(索取產(chǎn)品說明書) | 【英文名稱】咨詢. 【編號】HK-MID-65 【規(guī)格】MID-65 (12tests) 【包裝用途】可參考產(chǎn)品說明書(索取產(chǎn)品說明書) |
底層培養(yǎng)基(Ames試驗) | 咨詢. | 250g/瓶 | 用于沙門氏菌/哺乳動物微粒體酶 系統(tǒng)誘變實驗(Ames Test) | 【英文名稱】咨詢. 【編號】10364 【規(guī)格】250g/瓶 【包裝用途】用于沙門氏菌/哺乳動物微粒體酶 系統(tǒng)誘變實驗(Ames Test) |
0.1%亮綠溶液 | 咨詢. | 1ml×10支/盒 | 各取1支用于100ml10302中 | 【英文名稱】咨詢. 【編號】20316 【規(guī)格】1ml×10支/盒 【包裝用途】各取1支用于100ml10302中 |
改良MC培養(yǎng)基 | 咨詢. | 250ml×20瓶 | 用于食品中乳酸菌總數(shù)測定 | 【英文名稱】咨詢. 【編號】BS2628 【規(guī)格】250ml×20瓶 【包裝用途】用于食品中乳酸菌總數(shù)測定 |
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