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公司動態(tài)

細胞爬片制備詳細過程

閱讀:192發(fā)布時間:2016-2-19

【爬片的準備】

1.爬片可用一般的蓋玻片,也可用爬片;

 

2.應用蓋玻片,可根據(jù)自己的需要剪裁成合適的大小,以備置于6孔板、12孔板或24孔板;裁剪時可用前護士輸液用于打開玻璃安瓶的小沙輪,或者是口腔科的那種小沙輪,輕輕劃一下后,稍用力一掰就分開了。

 

如果接種大皿的話,我一般不將蓋玻片切開,直接清潔后放入培養(yǎng)皿中,到染色時再將之切開,這樣既保證了細胞均一性,又可同時做幾個指標的染色。

 

3.將剪裁好的爬片,置于濃硫酸中浸泡并過夜,第二天先用自來水沖洗20遍,再置于無水酒清中浸泡6小時,再用三蒸水沖洗3遍(個人認為主要目的是將酸沖洗干凈就可以了,如果不干凈的話,細胞帖壁不好),放在飯盒或者玻璃培養(yǎng)皿中烘干后進行高壓消毒。

 

4.高壓后取出放入烤箱中烤干,備用。烤干后可放入超凈臺中。

 

5.關于多聚賴氨酸,很多人都將玻片用此處理,以使細胞與玻片結(jié)合更牢。但我在做爬片時從來沒用過多聚賴氨酸,細胞貼壁仍然很好,且在做后續(xù)的免疫細胞化學染色、TUNEL等凋亡檢測、免疫熒光等也從未脫過片。

 

 

 

【細胞爬片】

 

1.*消化細胞后計數(shù)重懸細胞于*培養(yǎng)基中。

 

2.加細胞時,根據(jù)玻片的大小,先在每個孔里準備放爬片的位置滴少量培養(yǎng)基,目的是使玻片與培養(yǎng)皿靠培養(yǎng)基的張力粘合到一起,然后放玻片,防止加細胞懸液時玻片漂起,造成雙層細胞貼片。整個過程注意無菌操作。

 

3.根據(jù)自己的需要選擇合適的細胞密度種入培養(yǎng)板內(nèi)即可

 

4.待細胞貼壁后,可去上清加含藥培養(yǎng)基。

 

5.按照實驗設計,作用一定時間后取玻片。取玻片時由于玻片與培養(yǎng)皿底結(jié)合較緊,張力較大,我一般將注射器針頭針尖向背面弄個小鉤,這樣將爬片輕輕勾起,用小鑷子取出就可以了。如果要做諸如24h,48h,72h等這樣時間點的實驗的話,將所需數(shù)量的爬片取出時應用酒精燈火焰燒一下針頭和鑷子。末取出的可接著繼續(xù)培養(yǎng)。

 

 

 

 

 

 

【細胞爬片的固定】

 

細胞爬片取出后,一般用PBS洗2遍,然后再做固定。當然,根據(jù)研究目的,PBS洗也不是一定要做的,比如做凋亡的TUNEL染色時就避免洗,因為凋亡的細胞在洗的過程中有可能會脫落。

 

另外在保存細胞爬片的時候,我一般用培養(yǎng)皿或板,先在皿底放一層面巾紙,然后再放爬片,這樣方便做實驗時取片。然后蓋上蓋子,并在蓋子上做標記,為避免混淆,可用透明膠帶將蓋子和皿連在一起。一般-20℃保存2-3個月的片子做免疫組化是沒有問題的。

 

以下為常用的固定液

 

1. 冷丙酮 可用于一般的免疫組化染色。

將純的丙酮預先放入冰箱-20℃后便為冷丙酮(放心,丙酮在此溫度不會為固體的)細胞爬片取出后,PBS洗2遍,便可加入冷丙酮于-20℃(丙酮有很強的揮發(fā)性,注意將含有丙酮和爬片的器皿蓋嚴,防止其揮發(fā))固定10分鐘。取出后,室溫吹干,然后放入-20℃保存。

 

2. 多聚甲醛(常用4%):可用于免疫電鏡;也可用于免疫熒光以及TUNEL染色。 

主要檢測組織內(nèi)一些性能嬌弱的抗原特別是細胞表面抗原,例如各類淋巴細胸分化決定簇(CD)、主要組織相容性抗原等

室溫固定15分鐘后,將表面液體吹干,入-20℃保存

 

3. 95%乙醇,可用于免疫組化。

優(yōu)點:穿透性強、抗原性保存較好。

缺點:但醇類對低分子蛋白質(zhì)、多肽及胞漿內(nèi)蛋白質(zhì)保存效果較差,使蛋白變性的作用輕,固定后可再溶解;染色過程中,溫育時間長,抗原可流失而減弱反應強度

室溫固定15分鐘后,將表面液體吹干,入-20℃保存

 

4. 甲醛(福爾馬林)應用zui廣 

優(yōu)點:形態(tài)結(jié)構保存好,且穿透性強,

缺點: 甲醛放置過久可氧化為甲酸,使溶液pH降低,影響染色; 分子間交聯(lián)形成的網(wǎng)格結(jié)構可能部分或*掩蓋某些抗原決定簇,使之不能充分暴露??稍斐杉訇幮缘娜旧Y(jié)果。

 

產(chǎn)品:

鮑氏多價診斷血清咨詢.1ml/瓶注冊批件【英文名稱】咨詢.
【編號】BS6234
【規(guī)格】1ml/瓶
【包裝用途】注冊批件
馬尿酸鈉咨詢.20支/盒可參考產(chǎn)品說明書(索取產(chǎn)品說明書)【英文名稱】咨詢.
【編號】BS5090
【規(guī)格】20支/盒
【包裝用途】可參考產(chǎn)品說明書(索取產(chǎn)品說明書)
阪崎腸桿菌套裝生化鑒定管10種(GB4789)咨詢.12支/套×10套包含氧化酶、賴氨酸、*、*、氨基酸對照、*、蔗糖、 鼠李糖、蜜二糖、苦杏仁甙、檸檬酸鹽、液體石蠟【英文名稱】咨詢.
【編號】21508
【規(guī)格】12支/套×10套
【包裝用途】包含氧化酶、賴氨酸、*、*、氨基酸對照、*、蔗糖、 鼠李糖、蜜二糖、苦杏仁甙、檸檬酸鹽、液體石蠟
創(chuàng)傷弧菌成套生化鑒定管咨詢.9種×2套/盒×5盒用于創(chuàng)傷弧菌的生化鑒定,每盒組成:無鹽胰胨水2支,6%氯化鈉胰胨水2支,8%氯化鈉胰胨水2支,10%氯化鈉胰胨水2支,3%氯化鈉VP半固體培養(yǎng)基2支,3%氯化鈉賴氨酸脫羧酶2支,3%氯化鈉氨基酸脫羧酶對照2支,3%氯化鈉ONPG2支,氧化酶試紙1包,無菌液體石蠟1支(GB 標準)【英文名稱】咨詢.
【編號】SHBG12
【規(guī)格】9種×2套/盒×5盒
【包裝用途】用于創(chuàng)傷弧菌的生化鑒定,每盒組成:無鹽胰胨水2支,6%氯化鈉胰胨水2支,8%氯化鈉胰胨水2支,10%氯化鈉胰胨水2支,3%氯化鈉VP半固體培養(yǎng)基2支,3%氯化鈉賴氨酸脫羧酶2支,3%氯化鈉氨基酸脫羧酶對照2支,3%氯化鈉ONPG2支,氧化酶試紙1包,無菌液體石蠟1支(GB 標準)
腮腺炎病毒IgG抗體測定試劑盒咨詢.48T供研究用【英文名稱】咨詢.
【編號】BS6319
【規(guī)格】48T
【包裝用途】供研究用
*顯色平板(9cm)咨詢.10個/包可參考產(chǎn)品說明書(索取產(chǎn)品說明書)【英文名稱】咨詢.
【編號】HBPM7009
【規(guī)格】10個/包
【包裝用途】可參考產(chǎn)品說明書(索取產(chǎn)品說明書)
固氮根瘤菌培養(yǎng)基Nitrogen-fixing Rhizobium Medium250g用于固氮菌的分離培養(yǎng)【英文名稱】Nitrogen-fixing Rhizobium Medium
【編號】HB8542
【規(guī)格】250g
【包裝用途】用于固氮菌的分離培養(yǎng)
胰酪胨大豆多粘菌素肉湯添加劑咨詢.1ml×10支/盒每 0.1ml 加入 15ml11213 中【英文名稱】咨詢.
【編號】21204
【規(guī)格】1ml×10支/盒
【包裝用途】每 0.1ml 加入 15ml11213 中
姜黃素咨詢.5gAR【英文名稱】咨詢.
【編號】BS7134
【規(guī)格】5g
【包裝用途】AR
腸道菌增菌肉湯(2015版藥典)咨詢.250g可參考產(chǎn)品說明書(索取產(chǎn)品說明書)【英文名稱】咨詢.
【編號】22161
【規(guī)格】250g
【包裝用途】可參考產(chǎn)品說明書(索取產(chǎn)品說明書)
培養(yǎng)基QMedium Q (Columbia agar)250g用于梭菌的分離培養(yǎng)【英文名稱】Medium Q (Columbia agar)
【編號】HB0124-4 
【規(guī)格】250g
【包裝用途】用于梭菌的分離培養(yǎng)
包姜氏瓊脂培養(yǎng)基基礎Bordet-Gengou Agar Medium Base250g/瓶用于百日咳桿菌的分離,需添加 1%甘油和 15%脫纖維羊血 50701【英文名稱】Bordet-Gengou Agar Medium Base
【編號】12145
【規(guī)格】250g/瓶
【包裝用途】用于百日咳桿菌的分離,需添加 1%甘油和 15%脫纖維羊血 50701
L-*營養(yǎng)瓊脂基礎咨詢.250g可參考產(chǎn)品說明書(索取產(chǎn)品說明書)【英文名稱】咨詢.
【編號】28382
【規(guī)格】250g
【包裝用途】可參考產(chǎn)品說明書(索取產(chǎn)品說明書)
DKW培養(yǎng)基咨詢.250g用于植物組織的培養(yǎng) 【英文名稱】咨詢.
【編號】BS1317
【規(guī)格】250g
【包裝用途】用于植物組織的培養(yǎng) 
輪狀病毒酶免疫試劑盒咨詢.96tests可參考產(chǎn)品說明書(索取產(chǎn)品說明書)【英文名稱】咨詢.
【編號】M480
【規(guī)格】96tests
【包裝用途】可參考產(chǎn)品說明書(索取產(chǎn)品說明書)
*(USP)Potato Dextrose Agar Medium250g用于霉菌、酵母菌計數(shù)【英文名稱】Potato Dextrose Agar Medium
【編號】HB0233-11
【規(guī)格】250g
【包裝用途】用于霉菌、酵母菌計數(shù)
Stuart*Stuart Transport Medium250g/瓶用于致病菌標本的采集、運輸和保存【英文名稱】Stuart Transport Medium
【編號】12003
【規(guī)格】250g/瓶
【包裝用途】用于致病菌標本的采集、運輸和保存
60g/L氯化鈉蛋白胨水(PW)咨詢.250g可參考產(chǎn)品說明書(索取產(chǎn)品說明書)【英文名稱】咨詢.
【編號】25063
【規(guī)格】250g
【包裝用途】可參考產(chǎn)品說明書(索取產(chǎn)品說明書)
3%NaCl*脫羧酶試驗咨詢.1ml×10支/盒生化試驗,接種后每支滴加200~300ul 20303 覆蓋【英文名稱】咨詢.
【編號】20511
【規(guī)格】1ml×10支/盒
【包裝用途】生化試驗,接種后每支滴加200~300ul 20303 覆蓋
改良磷酸鹽緩沖液PSBPhosphate Saline Buffer,Modified250g用于小腸結(jié)腸炎耶爾森氏菌冷增菌培養(yǎng) (GB標準)【英文名稱】Phosphate Saline Buffer,Modified
【編號】HB0271
【規(guī)格】250g
【包裝用途】用于小腸結(jié)腸炎耶爾森氏菌冷增菌培養(yǎng) (GB標準)
改良Y瓊脂平板咨詢.90mm×20個/盒可參考產(chǎn)品說明書(索取產(chǎn)品說明書)【英文名稱】咨詢.
【編號】C29915B1
【規(guī)格】90mm×20個/盒
【包裝用途】可參考產(chǎn)品說明書(索取產(chǎn)品說明書)
馬鈴薯蔗糖水Potato  Sucrose Water250g/瓶用于真菌的培養(yǎng)【英文名稱】Potato  Sucrose Water
【編號】11175
【規(guī)格】250g/瓶
【包裝用途】用于真菌的培養(yǎng)
干熱滅菌指示標簽咨詢.1000片/卷可參考產(chǎn)品說明書(索取產(chǎn)品說明書)【英文名稱】咨詢.
【編號】CI-DHI
【規(guī)格】1000片/卷
【包裝用途】可參考產(chǎn)品說明書(索取產(chǎn)品說明書)
兔血漿Rabbit  Plasma0.5ml/支×10用于*凝固酶試驗【英文名稱】Rabbit  Plasma
【編號】HB4117
【規(guī)格】0.5ml/支×10
【包裝用途】用于*凝固酶試驗
Pfizer選擇性腸球菌瓊脂培養(yǎng)基咨詢.100g可參考產(chǎn)品說明書(索取產(chǎn)品說明書)【英文名稱】咨詢.
【編號】28961
【規(guī)格】100g
【包裝用途】可參考產(chǎn)品說明書(索取產(chǎn)品說明書)
茚三酮試劑(馬尿酸鹽試劑)咨詢.10ml/盒可參考產(chǎn)品說明書(索取產(chǎn)品說明書)【英文名稱】咨詢.
【編號】29231
【規(guī)格】10ml/盒
【包裝用途】可參考產(chǎn)品說明書(索取產(chǎn)品說明書)
瓊脂培養(yǎng)基SAgar medium S(R2A)250g用于制藥用水中菌落總數(shù)測定 【英文名稱】Agar medium S(R2A)
【編號】HB0167-1 
【規(guī)格】250g
【包裝用途】用于制藥用水中菌落總數(shù)測定 
抗生素檢定培養(yǎng)基2號(高pH)咨詢.250g可參考產(chǎn)品說明書(索取產(chǎn)品說明書)【英文名稱】咨詢.
【編號】22174
【規(guī)格】250g
【包裝用途】可參考產(chǎn)品說明書(索取產(chǎn)品說明書)
阿東醇發(fā)酵管咨詢.1ml×10支/盒可參考產(chǎn)品說明書(索取產(chǎn)品說明書)【英文名稱】咨詢.
【編號】20219
【規(guī)格】1ml×10支/盒
【包裝用途】可參考產(chǎn)品說明書(索取產(chǎn)品說明書)
*培養(yǎng)基Glycine Medium250g用于彎曲桿菌*耐受性試驗(GB標準)【英文名稱】Glycine Medium
【編號】HB0245
【規(guī)格】250g
【包裝用途】用于彎曲桿菌*耐受性試驗(GB標準)
GVPC瓊脂平板(9cm)GVPC Agar Base10個/包用于軍團菌的選擇性分離培養(yǎng)【英文名稱】GVPC Agar Base
【編號】HBPM031
【規(guī)格】10個/包
【包裝用途】用于軍團菌的選擇性分離培養(yǎng)
細菌增菌液咨詢.10ml×10支/盒用于細菌的增菌培養(yǎng)【英文名稱】咨詢.
【編號】BS3092
【規(guī)格】10ml×10支/盒
【包裝用途】用于細菌的增菌培養(yǎng)
MSB培養(yǎng)基Modified Scholtens’Broth(MSB)250g用于宿主細胞大腸桿菌WG5的培養(yǎng)【英文名稱】Modified Scholtens’Broth(MSB)
【編號】HB8720
【規(guī)格】250g
【包裝用途】用于宿主細胞大腸桿菌WG5的培養(yǎng)
大豆酪蛋白消化肉湯Casein soya bean digest broth250g/瓶用于藥品的無菌檢測【英文名稱】Casein soya bean digest broth
【編號】10109
【規(guī)格】250g/瓶
【包裝用途】用于藥品的無菌檢測
伊紅美藍瓊脂咨詢.90mm×10個/包用于腸道菌選擇性分離培養(yǎng)【英文名稱】咨詢.
【編號】30404
【規(guī)格】90mm×10個/包
【包裝用途】用于腸道菌選擇性分離培養(yǎng)
乙型腦炎疫苗效力測定試劑盒咨詢.48T供研究用【英文名稱】咨詢.
【編號】BS6359
【規(guī)格】48T
【包裝用途】供研究用
MH肉湯Mueller-Hinton Broth250g/瓶用于稀釋法進行藥敏試驗【英文名稱】Mueller-Hinton Broth
【編號】11816
【規(guī)格】250g/瓶
【包裝用途】用于稀釋法進行藥敏試驗
賴氨酸脫羧酶試驗培養(yǎng)基Lysine-decarboxylase Test Medium250g/瓶用于細菌的賴氨酸脫羧酶試驗【英文名稱】Lysine-decarboxylase Test Medium
【編號】10406
【規(guī)格】250g/瓶
【包裝用途】用于細菌的賴氨酸脫羧酶試驗
羅伊氏乳桿菌CICC6226咨詢.凍干可參考產(chǎn)品說明書(索取產(chǎn)品說明書)【英文名稱】咨詢.
【編號】FSCC173017
【規(guī)格】凍干
【包裝用途】可參考產(chǎn)品說明書(索取產(chǎn)品說明書)
豬心胨(進口)咨詢.25kg可參考產(chǎn)品說明書(索取產(chǎn)品說明書)【英文名稱】咨詢.
【編號】A1504
【規(guī)格】25kg
【包裝用途】可參考產(chǎn)品說明書(索取產(chǎn)品說明書)
MRSA篩選瓊脂基礎Oxacillin Resistance Screening Agar Base250g/瓶用于抗**的篩選,每升培養(yǎng)基中需添加5萬IU*和2mg苯唑西林【英文名稱】Oxacillin Resistance Screening Agar Base
【編號】10833
【規(guī)格】250g/瓶
【包裝用途】用于抗**的篩選,每升培養(yǎng)基中需添加5萬IU*和2mg苯唑西林
95%乙醇溶液咨詢.10ml×4支/盒可參考產(chǎn)品說明書(索取產(chǎn)品說明書)【英文名稱】咨詢.
【編號】21511
【規(guī)格】10ml×4支/盒
【包裝用途】可參考產(chǎn)品說明書(索取產(chǎn)品說明書)
臧紅T咨詢.25gAR【英文名稱】咨詢.
【編號】BS7150
【規(guī)格】25g
【包裝用途】AR
羅*咨詢.5gAR   CAS NO【英文名稱】咨詢.
【編號】BS7122-5g
【規(guī)格】5g
【包裝用途】AR   CAS NO
革蘭氏陰性桿菌鑒定系統(tǒng)BGN-MIDB咨詢.MID-65
(12tests)
可參考產(chǎn)品說明書(索取產(chǎn)品說明書)【英文名稱】咨詢.
【編號】HK-MID-65
【規(guī)格】MID-65
(12tests)
【包裝用途】可參考產(chǎn)品說明書(索取產(chǎn)品說明書)
底層培養(yǎng)基(Ames試驗)咨詢.250g/瓶用于沙門氏菌/哺乳動物微粒體酶 系統(tǒng)誘變實驗(Ames Test)【英文名稱】咨詢.
【編號】10364
【規(guī)格】250g/瓶
【包裝用途】用于沙門氏菌/哺乳動物微粒體酶 系統(tǒng)誘變實驗(Ames Test)
0.1%亮綠溶液咨詢.1ml×10支/盒各取1支用于100ml10302中【英文名稱】咨詢.
【編號】20316
【規(guī)格】1ml×10支/盒
【包裝用途】各取1支用于100ml10302中
改良MC培養(yǎng)基咨詢.250ml×20瓶用于食品中乳酸菌總數(shù)測定 【英文名稱】咨詢.
【編號】BS2628
【規(guī)格】250ml×20瓶
【包裝用途】用于食品中乳酸菌總數(shù)測定 

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