做elisa實(shí)驗(yàn)時(shí)需要注意哪些問(wèn)題？
Elisa實(shí)驗(yàn)中應(yīng)該注意的問(wèn)題,包括樣品稀釋、試劑盒平衡、樣品和試劑的混勻、加樣、溫育等問(wèn)題。
1、樣品稀釋 ：
一般產(chǎn)品的樣品稀釋倍數(shù)均通過(guò)大量試驗(yàn)確定,以保證試驗(yàn)的靈敏度和特異性。酶聯(lián)免疫反應(yīng)是一種敏感性很高的反應(yīng),如果血清不稀釋,不可避免會(huì)產(chǎn)生很強(qiáng)的非特異性反應(yīng),出現(xiàn)假陽(yáng)性。
2、試劑盒平衡：
Elisa中所有試劑和板條均應(yīng)在試驗(yàn)前平衡至室溫(約25℃),一般需在室溫放置20～30分鐘以上。平衡時(shí)間太短會(huì)造成試劑混勻不夠,樣品孵育時(shí)間相對(duì)縮短,ELISA反應(yīng)不夠充分。冬季室溫低,可將試劑盒置37℃溫箱20分鐘。
3、樣品和試劑的混勻：
在稀釋前、后的樣品必須充分混勻,所有試劑在加樣前也須搖勻,以保證試驗(yàn)的均一性。
4、加樣：
加樣是一項(xiàng)很重要的步驟。加樣不可太快,要避免加在孔壁上部,不可濺出和產(chǎn)生氣泡。加樣太快,無(wú)法保證微量加樣的準(zhǔn)確性和均一性。加在孔壁上部的非包被區(qū),易導(dǎo)致非特異吸附。
5、溫育：
溫育是ELISA測(cè)定中影響測(cè)定成敗zui為關(guān)鍵的一個(gè)因素。ELISA作為一種固相免疫測(cè)定,抗原抗體的結(jié)合反應(yīng)在固相上進(jìn)行,要使液相中的抗原或抗體與固相上的特異抗體或抗原*結(jié)合,必須在一定的溫度條件下反應(yīng)一定的時(shí)間。
6、洗板：
固相免疫測(cè)定技術(shù)是一種非均相免疫測(cè)定技術(shù),需以洗滌操作將特異結(jié)合于固相的抗原或抗體與反應(yīng)溫育過(guò)程中吸附的非特異成份分離開(kāi)來(lái),以保證ELISA測(cè)定的特異性。洗液盡量不要溢出孔外；加洗液后要靜置1分鐘,甩去板孔中洗液后,一定要大力拍干；及時(shí)更換吸水紙,尤其是拍過(guò)酶標(biāo)記物的吸水紙一定要棄去,否則可能影響試驗(yàn)結(jié)果。
7、顯色：
顯色一定要控制時(shí)間,根據(jù)試劑盒說(shuō)明操作即可。一般來(lái)說(shuō),顯色時(shí)間過(guò)短,結(jié)果偏低；顯色時(shí)間過(guò)長(zhǎng),空白增高或者非特異性顯色增加。
8、比色：
比色要注意波長(zhǎng)的選擇。以TMB為底物和以O(shè)PD為底物的試劑盒均有使用,而前者比色波長(zhǎng)為450nm,后者為492nm,濾光片需根據(jù)要求隨時(shí)更換。因此,容易出現(xiàn)濾光片錯(cuò)用的問(wèn)題。
ELISA試劑盒代理方面：
本公司elisa試劑盒可以提供免費(fèi)代測(cè)服務(wù)，客戶自己提供代測(cè)樣本，七個(gè)工作日即可提供客戶所需原始數(shù)據(jù) 。本公司*代理各種種屬的elisa試劑盒（酶聯(lián)免疫法）同時(shí)還經(jīng)營(yíng)各種*產(chǎn)品：sigma，amresco（大量現(xiàn)貨），Abcam，OXOID，Axygen試劑盒，Santa，invitrogen等，貨期穩(wěn)定！
相關(guān)試劑盒*：
犬血管緊張素轉(zhuǎn)化酶(ACE)ELISA試劑盒,96T/48T,KB16678
大鼠卵巢癌標(biāo)志物CA125ELISA試劑盒使用
人糖化血紅蛋白A1c(GHbA1c)ELISA試劑盒
小鼠上皮中性粒細(xì)胞活化肽78(ENA-78/CXCL5)ELISA測(cè)定試劑盒,96T/48T
大鼠90kDa熱休克蛋白αB1(HSP90αB1)ELISA試劑盒使用
人α*(AMY1)ELISA檢測(cè)試劑盒
人脆性*三聯(lián)體(FHIT)ELISA測(cè)定試劑盒,96T/48T
大鼠骨粘連蛋白(ON)ELISA酶免試劑盒
馬血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子A(VEGFA)ELISA測(cè)定試劑盒,96T/48T
大鼠抗中性粒/中心體抗體(ACA)ELISA檢測(cè)試劑盒
豬皮質(zhì)酮/腎上腺酮(CORT)ELISA測(cè)定試劑盒,96T/48T
兔子白血病抑制因子受體(LIFR)ELISA試劑盒
大鼠細(xì)胞周期素D3(Cyclin-D3)ELISA試劑盒,96T/48T,KB10342
兔子白介素10(IL-10)ELISA酶免試劑盒
人*型纖溶酶原激活劑受體(uPAR)ELISA試劑盒使用
人*蛋白聚糖5(CSPG5)ELISA試劑盒
微生物尿苷二磷酸葡萄糖焦磷酸化酶(UGP)ELISA試劑盒使用
猴三碘甲狀腺原氨酸(T3)ELISA酶免試劑盒
人潛伏轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子β結(jié)合蛋白2(LTBP2)ELISA試劑盒,96T/48T,KB15055
大鼠雌二醇受體(ER)ELISA檢測(cè)試劑盒
人甲種胎兒球蛋白/甲胎蛋白(AFP)ELISA試劑盒
兔超敏C反應(yīng)蛋白(hs-CRP)ELISA酶免試劑盒
植物花生四烯酸(AA)ELISA試劑盒使用
人橋粒糖蛋白2(DSC2)ELISA試劑盒
魚(yú)葡萄糖6磷酸脫氫酶(G-6-PD)ELISA測(cè)定試劑盒,96T/48T
人*1(VB1)ELISA檢測(cè)試劑盒
山羊褪黑素(MT)ELISA酶免試劑盒
人羥*糖蛋白(HRGP)ELISA酶免試劑盒,Hydroxyproline human glycoprotein (HRGP) ELISA Kit
大鼠Janus激酶3(JAK3)ELISA酶免試劑盒,Rats Janus kinase 3 (JAK3) ELISA kit
人殺菌性/通透性增加蛋白(BPI)ELISA測(cè)定試劑盒,96T/48T
豬可溶性血管細(xì)胞粘附分子1(sVCAM-1)ELISA試劑盒
犬脂多糖/內(nèi)毒素(LPS)ELISA酶免試劑盒
人分泌性免疫球蛋白A(SIgA)ELISA測(cè)定試劑盒,96T/48T
大鼠白介素7(IL7)ELISA檢測(cè)試劑盒
豚鼠γ干擾素(IFN-γ)ELISA試劑盒,96T/48T,KB11665
豚鼠腎素(Renin)ELISA檢測(cè)試劑盒
豬肺表面活性物質(zhì)相關(guān)蛋白A(SP-A)ELISA試劑盒使用
牛著絲粒蛋白H(CENPH)ELISA試劑盒,96T/48T,KB16274
人NADPH氧化酶1(/MOX1/)ELISA試劑盒,96T/48T,KB14361
人Sc5b-9末端補(bǔ)體復(fù)合物ELISA試劑盒使用試劑盒
人丙型肝炎病毒(HCV)核心抗原(HCV core Ag) ELISA酶免試劑盒
雞膜聯(lián)蛋白A5(ANXA5)ELISA試劑盒,96T/48T,KB16033
大鼠胰島素樣生長(zhǎng)因子結(jié)合蛋白2(IGFBP-2)ELISA酶免試劑盒,Insulin-like growth factor binding protein-2 (IGFBP-2) ELISA kit
人U1小核核糖核蛋白A(SNRPA)ELISA試劑盒,96T/48T,KB14418
牛骨橋素(OPN)ELISA測(cè)定試劑盒,96T/48T
大鼠胸腺活化調(diào)節(jié)趨化因子(TARC/CCL17)ELISA試劑盒,96T/48T,KB15766
雞乙酰*羧化酶α(ACACA)ELISA試劑盒
小鼠一氧化氮合成酶(NOS)ELISA試劑盒,96T/48T,KB12339
大鼠干擾素誘導(dǎo)蛋白10(IP-10/CXCL10)ELISA酶免試劑盒
人肝細(xì)胞生長(zhǎng)因子激活物(HGFA)ELISA檢測(cè)試劑盒
馬白介素12A(IL12A)ELISA酶免試劑盒,Ma interleukin 12A (IL12A) ELISA kit
牛凋亡相關(guān)因子(FAS)ELISA檢測(cè)試劑盒
人誘導(dǎo)型一氧化氮合成酶(iNOS)ELISA試劑盒,96T/48T,KB13140
人腫瘤壞死因γ(TNFγ)ELISA酶免試劑盒
*γ1鏈C區(qū)(IGHGI)ELISA試劑盒使用
小鼠*型纖溶酶原激活物(uPA)ELISA試劑盒
牛一氧化氮(NO)ELISA試劑盒
雞前列腺素E2(PGE2)ELISA試劑盒,96T/48T,KB15927
豬血管生成素1(ANG-1)ELISA試劑盒,96T/48T,KB10618
人基質(zhì)裂解素(ST3)ELISA試劑盒,96T/48T,KB12459
兔子端粒酶(TE)ELISA測(cè)定試劑盒,96T/48T
人生長(zhǎng)分化因子9(GDF9)ELISA試劑盒,96T/48T,KB15025
人組織多肽抗原(TPA)ELISA試劑盒
人補(bǔ)體因子H相關(guān)蛋白1(CFHR1)ELISA試劑盒使用
兔子軟骨寡聚蛋白(COMP)ELISA試劑盒
大鼠CD83分子(CD83)ELISA酶免試劑盒,Rat CD83 molecule (CD83) ELISA kit
馬紅細(xì)胞生成素(EPO)ELISA試劑盒使用
豬內(nèi)皮型一氧化氮合成酶3(eNOS-3)ELISA酶免試劑盒,Porcine endothelial nitric oxide synthase 3 (eNOS-3) ELISA kit
人磷脂肌醇3激酶(PI3K)ELISA酶免試劑盒
人凝聚素(CLU)ELISA試劑盒使用
人神經(jīng)調(diào)節(jié)蛋白2(NRG2)ELISA試劑盒,96T/48T,KB15127
人靶向核糖核酸酶(TR)ELISA測(cè)定試劑盒,96T/48T
豚鼠干擾素α(IFNα)ELISA試劑盒使用
小鼠中性粒細(xì)胞彈性蛋白酶(NE)ELISA檢測(cè)試劑盒
人脂聯(lián)素受體2(ADIPOR2)ELISA酶免試劑盒
人抗Smith抗體(Sm)ELISA試劑盒,96T/48T,KB14848
植物P型ATP酶(P-ATPases)ELISA酶免試劑盒
大鼠血管內(nèi)皮細(xì)胞生長(zhǎng)因子受體2(VEGFR2/Flk1)ELISA試劑盒
人IPO38蛋白(IPO38)ELISA酶免試劑盒
人周期素依賴(lài)性激酶7(CDK7)ELISA測(cè)定試劑盒,96T/48T
豬活性氧(ROS)ELISA試劑盒,96T/48T,KB17838
雞白介素15(IL15)ELISA試劑盒
人胰島素自身抗體(IAA)ELISA酶免試劑盒
兔窖蛋白(CAV1)ELISA測(cè)定試劑盒,96T/48T
牛表面活性物質(zhì)關(guān)聯(lián)蛋白C(SPC)ELISA酶免試劑盒,Bovine surfactant associated protein C (SPC) ELISA kit
會(huì)員1.png)