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參考價: | ¥ 2600 |
訂貨量: | 1盒 |
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訪問次數(shù):2196更新時間:2020-09-14 16:37:01
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【產(chǎn)品文獻支持】
影響因子(IF)=5.5:Pharmacological and Pharmacokinetic Studies with Agaricoglycerides, Extracted from Grifola frondosa,in Animal Models of Pain and Inflammation;山東大學(xué)《Inflammation》
【產(chǎn)品文獻支持】
影響因子(IF)=5.5:Antibacterial and Anti-inflammatory Activity of Traditional Chinese Herb Pairs, Angelica sinensis and Sophora flavescens;山東中醫(yī)藥大學(xué)《Inflammation》
l 大鼠腫瘤壞死因子α(TNF-α)ELISA試劑盒用于體外定量檢測血清、血漿、組織、細(xì)胞上清及相關(guān)液體樣本中大鼠腫瘤壞死因子α(TNF-α)的含量。
l 有效期:6個月
l 保存條件:2-8℃
l 本試劑盒僅供體外研究使用,不用于臨床診斷
大鼠腫瘤壞死因子α(TNF-α)ELISA試劑盒實驗原理
試劑盒采用雙抗體一步夾心法酶聯(lián)免疫吸附試驗(ELISA)。往預(yù)先包被小鼠孕激素受體(PGR)捕獲抗體的包被微孔中,依次加入標(biāo)本、標(biāo)準(zhǔn)品、HRP標(biāo)記的檢測抗體,經(jīng)過溫育并*洗滌。用底物TMB顯色,TMB在過氧化物酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍色,并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成best終的黃色。顏色的深淺和樣品中的小鼠孕激素受體(PGR)呈正相關(guān)。用酶標(biāo)儀在450nm 波長下測定吸光度(OD 值),計算樣品濃度。
樣本處理及要求
1. 血清:全血標(biāo)本請于室溫放置2小時或4℃過夜后于1000g離心20分鐘,取上清即可檢測,或?qū)?biāo)本放于-20℃或-80℃保存,但應(yīng)避免反復(fù)凍融。
2. 血漿:可用EDTA或肝素作為抗凝劑,標(biāo)本采集后30分鐘內(nèi)于2 - 8°C 1000g離心20分鐘,或?qū)?biāo)本放于-20℃或-80℃保存,但應(yīng)避免反復(fù)凍融。
3. 組織勻漿:用預(yù)冷的PBS (0.01M, pH=7.4)沖洗組織,去除殘留血液(勻漿中裂解的紅細(xì)胞會影響測量結(jié)果),稱重后將組織剪碎。將剪碎的組織與對應(yīng)體積的PBS(一般按1:9的重量體積比,比如1g的組織樣品對應(yīng)9mL的PBS,具體體積可根據(jù)實驗需要適當(dāng)調(diào)整,并做好記錄。推薦在PBS中加入蛋白酶抑制劑)加入玻璃勻漿器中,于冰上充分研磨。為了進一步裂解組織細(xì)胞,可以對勻漿液進行超聲破碎,或反復(fù)凍融。best后將勻漿液于5000×g離心5~10分鐘,取上清檢測。
4. 細(xì)胞培養(yǎng)物上清或其它生物標(biāo)本:1000g離心20分鐘,取上清即可檢測,或?qū)?biāo)本放于-20℃或-80℃保存,但應(yīng)避免反復(fù)凍融。
注:標(biāo)本溶血會影響best后檢測結(jié)果,因此溶血標(biāo)本不宜進行此項檢測。
標(biāo)本處理
1. 本公司只對試劑盒本身負(fù)責(zé),不對因使用該試劑盒所造成的樣本消耗負(fù)責(zé),請使用者使用前充分考慮到樣本的可能使用量,預(yù)留充足的樣本。
2. 實驗前應(yīng)預(yù)測標(biāo)本含量,如果標(biāo)本濃度過高,應(yīng)對標(biāo)本進行稀釋,使稀釋后的標(biāo)本符合試劑盒的檢測范圍,計算時再乘以相應(yīng)的稀釋倍數(shù)。標(biāo)本使用0.01mol/L的PBS稀釋(PH=7.0-7.2)。
3. 若所檢樣本不包含在說明書所列樣本之中,建議進行預(yù)實驗驗證其有效性,并注意留存樣本。
4. 使用化學(xué)裂解液制備的組織勻漿或細(xì)胞提取液可能會由于某些化學(xué)物質(zhì)的引入導(dǎo)致ELISA實驗結(jié)果偏差。
5. 若樣本為細(xì)胞培養(yǎng)上清,因該類樣本干擾因素較多,如:細(xì)胞狀態(tài)、細(xì)胞數(shù)量、采樣時間等,所以可能存在檢測不出的情況。
6. 某些天然蛋白或重組蛋白,包括原核及真核重組蛋白,可能因為與本產(chǎn)品所使用的檢測抗體及捕獲抗體不匹配,而不被檢測出。
7. 建議使用新鮮樣本,保存時間過長可能會存在蛋白降解或變性導(dǎo)致實驗結(jié)果偏差。
需要而未提供的試劑和器材
1.酶標(biāo)儀(450nm)
2.高精度加樣器及槍頭:0.5-10uL、2-20uL、20-200uL、200-1000uL
3.37℃恒溫箱
4.蒸餾水或去離子水
四、常見問題解答
小編簡單整理了5個問題,具體內(nèi)容如下:
1、一個elisa試劑盒檢測幾個樣品?
小編自己在各大論壇看到best多的三個答案:
1)48T 可做42個樣本加6個標(biāo)準(zhǔn)曲線;96T 可做90個樣本加6個標(biāo)準(zhǔn)曲線
2)以96T試劑盒來算,定量的試劑盒一般可以做90個左右的樣品,定性的試劑盒可以做94個左右的樣品
3)96T的elisa試劑盒,去除標(biāo)準(zhǔn)品復(fù)孔檢測,還能檢測80個標(biāo)本;48T的best多30個樣本。
2、elisa試劑盒96T的能做檢測多少血清樣品?板能重復(fù)利用嗎?
96T,一般做復(fù)孔的話,做標(biāo)準(zhǔn)曲線需要16個孔,剩下80個孔就可以做40個樣本。這個板不能重復(fù)利用。而且配套的試劑也只是夠一塊板子用的。
3、想請教一下,我想用elisa法測血清里的一種抗原,查了資料,發(fā)現(xiàn)沒有現(xiàn)成的試劑盒用,現(xiàn)在就有2種備選方案,一種是買抗體對自己包被(查了R&D等大公司都沒有可用于elisa的單抗)。哪種比較好呢?自己包被的會不會比國產(chǎn)的試劑盒可靠呢?
如果你覺得技術(shù)不錯有隊其他公司不放心,可以自己購買抗體對自己包被,這個就是麻煩點,自己包被用著放心,舒心;
4、western 和ELISA 處理樣本有何差別?
Western Blot 樣品制備要加蛋白裂解液(含有蛋白酶抑制劑),然后冰上研磨,收集于EP管,冰上裂解30min,4度12000rpm離心15min,取上清分裝,即得到蛋白樣品。建議直接電泳,多余的-80保存。建議分裝的蛋白每支略多于一次上樣量,一次性用完一支,避免反復(fù)凍融。
ELISA樣品,直接腦組織冰上勻漿,收集于EP管,同上一樣離心,大約220-250ul每支分裝(因為ELISA上樣量基本都是每孔100ul,做復(fù)孔,每個樣品2孔,就需要200ul,為了避免不夠2孔,分裝時要大于200ul每支),直接實驗。多余的-80保存,一樣避免反復(fù)凍融。
不過ELISA少量樣品進行預(yù)實驗,或者查閱文獻,看看大概組織里有多高濃度,選擇合適的試劑盒,測量范圍要與組織濃度相符。避免濃度過高測量不準(zhǔn),或者濃度過低,小于試劑盒可測濃度。