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1 菌片制備

   *ATCC 29213在*大豆瓊脂上36℃±1℃下培養(yǎng)18-24h，將2-3個(gè)菌落接種至3ml*大豆肉湯中，在36℃±1℃下培養(yǎng)18-24h。用蛋白胨水1:10稀釋至濃度為1×104CFU/mL~4×104CFU/mL，對(duì)zui終菌懸液進(jìn)行計(jì)數(shù)。

   打開(kāi)無(wú)菌袋取出仍貼附在智商的聚氨酯膜，將載菌材料片的可浸濕聚氨酯膜面朝上放在潔凈度盤(pán)子上，為了便于操作，用雙面膠帶將載菌材料片的四角固定于盤(pán)子上。用培養(yǎng)皿蓋作為模板在載菌膜上化出一個(gè)相應(yīng)的區(qū)域，在該區(qū)域涂布1.0ml*懸浮液，然后將菌片至于56℃干燥大約30min，在干燥期間采用消毒的玻璃涂布器在載菌膜上繼續(xù)涂布菌懸液，以使菌液均勻分布。

   菌片制備好后當(dāng)日使用。

2 狀態(tài)調(diào)節(jié)

   如需要，按照GB6529對(duì)試件進(jìn)行狀態(tài)調(diào)節(jié)，也可在標(biāo)準(zhǔn)正常室溫條件下進(jìn)行狀態(tài)天界和試驗(yàn)。狀態(tài)調(diào)節(jié)的方法應(yīng)記錄在試驗(yàn)報(bào)告中。

3 試驗(yàn)設(shè)定

   調(diào)節(jié)控制桿上配重，使試驗(yàn)指施加到瓊脂上的力值為3N±0.02N。

   將*個(gè)瓊脂培養(yǎng)皿放在轉(zhuǎn)盤(pán)上。

4 材料應(yīng)用

   用下列計(jì)數(shù)：采用一個(gè)由內(nèi)、外環(huán)組成的圓形砝碼，總重800g±1g對(duì)材料施加標(biāo)準(zhǔn)的繃緊力。將圓柱放在內(nèi)環(huán)中央，再將試件覆蓋在圓柱體和內(nèi)環(huán)上，將除去貼附紙后的菌片染菌面向下放在試件上。zui后在聚氨酯膜上覆蓋一層HDPE膜，向下推緊外環(huán)，使三層材料牢固的加在兩個(gè)環(huán)之間。

5 試驗(yàn)

   將上述環(huán)組件輕輕搭放在*個(gè)去下蓋子的瓊脂培養(yǎng)皿上，鋼環(huán)自由懸放于旋轉(zhuǎn)盤(pán)的外面，將試驗(yàn)指置于皿口內(nèi)測(cè)的HDPE膜上，這樣試件可與瓊脂表面接觸。試驗(yàn)指按上述規(guī)定施加3N壓力，是儀器運(yùn)行15min。

15min后立即取下環(huán)套件放在一邊。

從旋轉(zhuǎn)盤(pán)上取下*個(gè)培養(yǎng)皿并放上皿蓋。馬上將第二個(gè)培養(yǎng)皿和環(huán)套件放在旋轉(zhuǎn)盤(pán)上。

對(duì)后面的四個(gè)培養(yǎng)皿用同一個(gè)環(huán)套組件執(zhí)行上述步驟。

五個(gè)培養(yǎng)皿完成試驗(yàn)后，取下菌片并棄去，將試件反轉(zhuǎn)，上面朝下用HDPE膜覆蓋。

在第六個(gè)培養(yǎng)皿上操作15min,即完成*個(gè)平行試驗(yàn)組。

其余4片試件同樣按上述方法各運(yùn)行六個(gè)培養(yǎng)皿各15min，每片試件使用一片新鮮制備的菌片。

如果瓊脂表面聚有液體，將其置于潔凈臺(tái)上干燥，將各瓊脂培養(yǎng)皿加蓋置于36℃±1℃培養(yǎng)48h。

計(jì)數(shù)每只培養(yǎng)皿中*菌落數(shù)，培養(yǎng)皿中心15min半徑區(qū)域內(nèi)的菌落數(shù)不計(jì)。

如果右一個(gè)皿或多個(gè)皿的計(jì)數(shù)大于750CFU（不包括上述的培養(yǎng)皿中心15min半徑區(qū)域內(nèi)的菌落數(shù)），可重新驚醒試驗(yàn)。如果重新試驗(yàn)仍有一個(gè)或多個(gè)皿計(jì)數(shù)大于750CFU，表明該材料不可能具有足夠的屏障特性，可終止試驗(yàn)。