人鉤端螺旋體抗體（Lep-Ab）Elisa試劑盒說明書

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人鉤端螺旋體抗體（Lep-Ab）酶聯(lián)免疫分析

試劑盒使用說明書

本試劑盒僅供研究使用。

48T

使用目的：

本試劑盒用于測(cè)定人血清、血漿及相關(guān)液體樣本中鉤端螺旋體抗體（Lep-Ab）表達(dá)。

實(shí)驗(yàn)原理

本試劑盒應(yīng)用雙抗原夾心法測(cè)定標(biāo)本中人鉤端螺旋體抗體（Lep-Ab）表達(dá)。用純化的鉤端螺旋體抗原包被微孔板，制成固相抗原，可與樣品中鉤端螺旋體抗體（Lep-Ab）相結(jié)合，經(jīng)洗滌除去未結(jié)合的抗原和其他成分后再與HRP標(biāo)記的鉤端螺旋體抗原結(jié)合，形成抗原-抗體-酶標(biāo)抗原復(fù)合物，經(jīng)過*洗滌后加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成zui終的黃色。用酶標(biāo)儀在450nm波長下測(cè)定吸光度（OD值），與CUTOFF值相比較，從而判定標(biāo)本中人鉤端螺旋體抗體（Lep-Ab）的存在與否。

試劑盒組成

1	20倍濃縮洗滌液	20ml×1瓶	7	終止液	3ml×1瓶
2	酶標(biāo)試劑	3ml×1瓶	8	陽性對(duì)照	0.5ml×1瓶
3	酶標(biāo)包被板	12孔×4條	9	陰性對(duì)照	0.5ml×1瓶
4	樣品稀釋液	3ml×1瓶	10	說明書	1份
5	顯色劑A液	3ml×1瓶	11	封板膜	2張
6	顯色劑B液	3ml×1/瓶	12	密封袋	1個(gè)

標(biāo)本要求

1．標(biāo)本采集后盡早進(jìn)行提取，提取按相關(guān)文獻(xiàn)進(jìn)行，提取后應(yīng)盡快進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。若不能馬上進(jìn)行試驗(yàn)，可將標(biāo)本放于-20℃保存，但應(yīng)避免反復(fù)凍融

2．不能檢測(cè)含NaN3的樣品，因NaN3抑制辣根過氧化物酶的（HRP）活性。

操作步驟

1. 編號(hào)：將樣品對(duì)應(yīng)微孔按序編號(hào)，每板應(yīng)設(shè)陰性對(duì)照2孔、陽性對(duì)照2孔、空白對(duì)照1孔（空白對(duì)照孔不加樣品及酶標(biāo)試劑，其余各步操作相同）

2. 加樣：分別在陰、陽性對(duì)照孔中加入陰性對(duì)照、陽性對(duì)照50μl。然后在待測(cè)樣品孔先加樣品稀釋液40μl，然后再加待測(cè)樣品10μl。加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動(dòng)混勻，

3. 溫育：用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。

4. 配液：將20倍濃縮洗滌液用蒸餾水20倍稀釋后備用

5. 洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿洗滌液，靜置30秒后棄去，如此重復(fù)5次，拍干。

6. 加酶：每孔加入酶標(biāo)試劑50μl，空白孔除外。

7. 溫育：操作同3。

8. 洗滌：操作同5。

9. 顯色：每孔先加入顯色劑A50μl，再加入顯色劑B50μl，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色15分鐘.

10. 終止：每孔加終止液50μl，終止反應(yīng)（此時(shí)藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色）。

11. 測(cè)定：以空白空調(diào)零，450nm波長依序測(cè)量各孔的吸光度（OD值）。測(cè)定應(yīng)在加終止液后15分鐘以內(nèi)進(jìn)行。

計(jì)算和結(jié)果判定：

試驗(yàn)有效性：陽性對(duì)照孔平均值≥1.00; 陰性對(duì)照平均值≤0.10

臨界值（CUT OFF）計(jì)算：臨界值=陰性對(duì)照孔平均值+0.15

陰性判定：樣品OD值< 臨界值（CUT OFF）者為人鉤端螺旋體抗體（Lep-Ab）陰性

陽性判定：樣品OD值≥ 臨界值（CUT OFF）者為人鉤端螺旋體抗體（Lep-Ab）陽性

。

注意事項(xiàng)

1．操作嚴(yán)格按照說明書進(jìn)行，本試劑不同批號(hào)組分不得混用。

2．試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應(yīng)在室溫平衡15-30分鐘后方可使用，酶標(biāo)包被板開封后如未用完，板條應(yīng)裝入密封袋中保存。

3．濃洗滌液可能會(huì)有結(jié)晶析出，稀釋時(shí)可在水浴中加溫助溶，洗滌時(shí)不影響結(jié)果。

4．封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。

5．底物請(qǐng)避光保存。

6．試驗(yàn)結(jié)果判定必須以酶標(biāo)儀讀數(shù)為準(zhǔn)，使用雙波長檢測(cè)時(shí)，參考波長為630nm

7．所有樣品，洗滌液和各種廢棄物都應(yīng)按傳染物處理。終止液為2M的硫酸，使用時(shí)必須注意安全。

保存條件及有效期

1．試劑盒保存：；2-8℃。

2．有效期：6個(gè)月

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