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人中性粒細(xì)胞防御素1-3（HNP1-3）elisa試劑盒

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更新時間：2017-09-04 16:24:24瀏覽次數(shù)：665次

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產(chǎn)品簡介

人中性粒細(xì)胞防御素1-3（HNP1-3）elisa試劑盒樣本處理及要求：
血清：室溫血液自然凝固 10-20 分鐘，離心 20 分鐘左右（2000-3000 轉(zhuǎn)/分）。仔細(xì)收集上
清，保存過程中如出現(xiàn)沉淀，應(yīng)再次離心。

詳細(xì)介紹

HE044
人中性粒細(xì)胞防御素1-3(HNP1-3)elisa試劑盒
Human neutrophil peptide 1-3(HNP1-3)ELISA Kit

試劑盒性能：
1.樣品線性回歸與預(yù)期濃度相關(guān)系數(shù) R 值為 0.92 以上。
2.批內(nèi)與批間應(yīng)分別小于 9%和 15%
檢測范圍：
0.15 ng/ml -10ng/ml
保存條件及有效期：
1.試劑盒保存：2-8℃。
2．有效期：6 個月

人中性粒細(xì)胞防御素1-3(HNP1-3)elisa試劑盒實(shí)驗(yàn)原理：本試劑盒用于測定人血清，血漿及相關(guān)液體樣本中中性粒細(xì)胞防御素 1-3(HNP1-3)的含量。應(yīng)用雙抗體夾心法測定標(biāo)本中人中性粒細(xì)胞防御素 1-3(HNP1-3)水平。用純化的人中性粒細(xì)胞防御素 1-3(HNP1-3)抗體包被微孔板，制成固相抗體，往包被單抗的微孔中依次加入中性粒細(xì)胞防御素 1-3(HNP1-3)，再與 HRP 標(biāo)記的中性粒細(xì)胞防御素 1-3(HNP1-3)抗體結(jié)合，形成抗體-抗原-酶標(biāo)抗體復(fù)合物，經(jīng)過*洗滌后加底物 TMB 顯色。TMB 在 HRP酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成zui終的黃色。顏色的深淺和樣品中的中性粒細(xì)胞防御素 1-3(HNP1-3)呈正相關(guān)。用酶標(biāo)儀在 450nm 波長下測定吸光度（OD 值），通過標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算樣品中人中性粒細(xì)胞防御素 1-3(HNP1-3)濃度。

操作步驟：
1. 標(biāo)準(zhǔn)品的稀釋與加樣：在酶標(biāo)包被板上設(shè)標(biāo)準(zhǔn)品孔 10 孔，在*、第二孔中分別加標(biāo)
準(zhǔn)品 100μl，然后在*、第二孔中加標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液 50μl，混勻；然后從*孔、第二
孔中各取 100μl 分別加到第三孔和第四孔，再在第三、第四孔分別加標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液 50μl，
混勻；然后在第三孔和第四孔中先各取 50μl 棄掉，再各取 50μl 分別加到第五、第六孔
中，再在第五、第六孔中分別加標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液 50ul，混勻；混勻后從第五、第六孔中各
取 50μl 分別加到第七、第八孔中，再在第七、第八孔中分別加標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液 50μl，混
勻后從第七、第八孔中分別取 50μl 加到第九、第十孔中，再在第九第十孔分別加標(biāo)準(zhǔn)
品稀釋液 50μl，混勻后從第九第十孔中各取 50μl 棄掉。（稀釋后各孔加樣量都為 50μl，
濃度分別為 9ng/ml，6ng/ml ，3ng/ml，1.5 ng/ml，0.75 ng/ml）。
2. 加樣：分別設(shè)空白孔（空白對照孔不加樣品及酶標(biāo)試劑，其余各步操作相同）、待測樣
品孔。在酶標(biāo)包被板上待測樣品孔中先加樣品稀釋液 40μl，然后再加待測樣品 10μl（樣
品zui終稀釋度為 5 倍）。加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動混
勻。
3. 加酶：每孔加入酶標(biāo)試劑 50μl，空白孔除外。
4. 溫育：用封板膜封板后置 37℃溫育 30 分鐘。
5. 配液：將 30（48T 的 20 倍）倍濃縮洗滌液用蒸餾水 30（48T 的 20 倍）倍稀釋后備用。
6. 洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿洗滌液，靜置 30 秒后棄去，如此
重復(fù) 5 次，拍干。
7. 顯色：每孔先加入顯色劑 A50μl，再加入顯色劑 B50μl，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯
色 10 分鐘.
8. 終止：每孔加終止液 50μl，終止反應(yīng)（此時藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色）。
9. 測定：以空白空調(diào)零，450nm 波長依序測量各孔的吸光度（OD 值）。測定應(yīng)在加終止
液后 15 分鐘以內(nèi)進(jìn)行。
人中性粒細(xì)胞防御素1-3(HNP1-3)elisa試劑盒供應(yīng)商：上海華壹生物科技有限公司