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人抗絲集蛋白抗體（AFA）ELISA試劑盒說明書

閱讀：806發(fā)布時間：2011-4-15

人抗絲集蛋白抗體（AFA）ELISA試劑盒說明書

本試劑盒僅供研究使用。

藥品名稱：

通用名：人抗絲集蛋白抗體（AFA）酶聯(lián)免疫分析試劑盒

使用目的：

本試劑盒用于定性測定人血清，血漿及相關液體樣本中抗絲集蛋白抗體（AFA）。

實驗原理

本試劑盒采用間接法測定標本中人抗絲集蛋白抗體（AFA）。用純化的絲集蛋白（AFA）抗原包被微孔板，制成固相抗原，與樣品中抗絲集蛋白抗體（AFA）溫育后，加入*標記的抗IgG抗體，再與鏈霉親和素-HRP結合，形成免疫復合物，經過*洗滌后加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉化成藍色，并在酸的作用下轉化成zui終的黃色。用酶標儀在450nm波長下測定吸光度（OD值），與CUTOFF值相比較，從而判定標本中人抗絲集蛋白抗體（AFA）的存在與否。，

試劑盒組成

1	20倍濃縮洗滌液	50ml×1瓶	8	樣品稀釋液	6ml×1瓶
2	鏈霉親和素-HRP	6ml×1瓶	9	陰性對照	0.5ml×1瓶
3	酶標包被板	12孔×8條	10	陽性對照	0.5ml×1瓶
4	*標記的抗-IgG抗體	6ml×1瓶	11	密封袋	1個
5	顯色劑A液	6ml×1瓶	12	封板膜	3張
6	顯色劑B液	6ml×1/瓶	13	說明書	1份
7	終止液	6ml×1瓶

標本要求

1．不能檢測含NaN3的樣品，因NaN3抑制辣根過氧化物酶的（HRP）活性。

2．標本采集后盡早進行提取，提取按相關文獻進行，提取后應盡快進行實驗。若不能馬上進行試驗，可將標本放于-20℃保存，但應避免反復凍融

操作步驟

1. 編號：將樣品對應微孔按序編號，每板應設陰性對照2孔、陽性對照2孔、空白對照1孔

2. 加樣：分別在陰、陽性對照孔中加入陰性對照、陽性對照50μl。然后在待測樣品孔先加樣品稀釋液40μl，然后再加待測樣品10μl。加樣將樣品加于酶標板孔底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動混勻，37℃溫育45分鐘。

3. 配液：將20倍濃縮洗滌液用蒸餾水20倍稀釋后備用

4. 洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿洗滌液，靜置30秒后棄去，如此重復4次，拍干。

5. 加*標記的抗-IgG抗體：每孔加入*標記的抗-IgG抗體50μl。37℃溫育30分鐘

6. 洗滌：操作同4。

7. 加鏈霉親和素-HRP：每孔加入50μl的鏈酶親和素-HRP，輕輕振蕩混勻，37℃溫育30分鐘。

8. 洗滌：操作同4。

9. 顯色：每孔先加入顯色劑A 50μl，再加入顯色劑B 50μl，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色15分鐘.

10. 終止：每孔加終止液50μl，終止反應（此時藍色立轉黃色）。

11. 測定：以空白空調零，450nm波長依序測量各孔的吸光度（OD值）。測定應在加終止液后15分鐘以內進行。

結果判定：

試驗有效性：陽性對照孔平均值≥1.00; 陰性對照平均值≤0.10

臨界值（CUT OFF）計算：臨界值=陰性對照孔平均值+0.15

陰性判定：樣品OD值< 臨界值（CUT OFF）者為人絲集蛋白抗體（AFA）陰性

陽性判定：樣品OD值≥ 臨界值（CUT OFF）者為人絲集蛋白抗體（AFA）陽性

注意事項

1．操作嚴格按照說明書進行，本試劑不同批號組分不得混用。

2．試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應在室溫平衡15-30分鐘后方可使用，酶標包被板開封后如未用完，板條應裝入密封袋中保存。

3．濃洗滌液可能會有結晶析出，稀釋時可在水浴中加溫助溶，洗滌時不影響結果。

4．封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。

5．底物請避光保存。

6．試驗結果判定必須以酶標儀讀數(shù)為準，使用雙波長檢測時，參考波長為630nm

7．所有樣品，洗滌液和各種廢棄物都應按傳染物處理。終止液為2M的硫酸，使用時必須注意安全。

規(guī)格：

96人份/盒

保存條件及有效期

1．試劑盒保存：；2-8℃。

2．有效期：6個月

廈門康研生物技術有限公司致力于各種生物試劑、抗體、ELISA試劑盒、細胞因子、耗材的銷售推廣及服務工作。
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