分離試劑盒編號(hào)：ISO-I
分離試劑盒適用：各種人和哺乳動(dòng)物組織的內(nèi)皮細(xì)胞、上皮細(xì)胞、羊膜細(xì)胞、肝細(xì)胞、腎細(xì)胞、腦和神經(jīng)細(xì)胞、角膜上皮細(xì)胞的分離。
分離試劑盒規(guī)格：1
分離試劑盒價(jià)格：￥1590
分離試劑盒產(chǎn)地：中國(guó)，PriCells
分離試劑盒特征：不含有HIV、HBV、HCV、細(xì)菌、支原體、真菌、酵母；不含有內(nèi)毒素；不含有苯；不含有血清。
生物安全級(jí)：1級(jí)。
運(yùn)輸條件：4oC。
儲(chǔ)存條件：4oC，避光。
用途范圍：只可用于科研。
原代細(xì)胞分離試劑盒I 產(chǎn)品說(shuō)明書(shū)
一、主要適用
內(nèi)皮細(xì)胞、上皮細(xì)胞、羊膜細(xì)胞、肝細(xì)胞、腎細(xì)胞、腦和神經(jīng)細(xì)胞、角膜上皮細(xì)胞。
二、試劑盒組成
1、Buffer A： 100ml × 2 4℃ 保存
2、Buffer B： 50ml × 3 4℃ 保存
3、Buffer C： 20ml × 1 4℃ 保存
4、Buffer D： 20ml × 1 4℃ 保存
5、消化液： 2ml × 3 4℃ 保存
三、使用方法
注意：使用前請(qǐng)認(rèn)真閱讀說(shuō)明書(shū)，按說(shuō)明書(shū)的要求對(duì)試劑進(jìn)行妥善保存。
本試劑盒供用于5次組織的原代細(xì)胞分離，每次分離的組織約1g。
取一小瓶2ml消化液放入50ml Buffer B中，標(biāo)記后，放4℃保存。用完后，再新鮮配制。
1、取組織重約1g，放入無(wú)菌培養(yǎng)皿中，取1 × PBS（pH7.4）清洗組織，充分去除組織表面的血漬和其它異物。
2、將組織轉(zhuǎn)入另一無(wú)菌的培養(yǎng)皿，切去多余組織如脂肪或壞死組織，用無(wú)菌刀將組織切成1mm3小塊。
3、用無(wú)菌彎頭鑷將組織塊轉(zhuǎn)入50ml的無(wú)菌離心管中，讓組織塊沉淀，吸去多余液體，加入10ml Buffer A，充分混勻，300g離心5分鐘，棄上清，如此重復(fù)操作3次。
4、將組織塊轉(zhuǎn)入一無(wú)菌的50ml錐形瓶。
5、取10ml含消化液的Buffer B放入錐形瓶，封住瓶口，置于37℃搖床中，100轉(zhuǎn)/分搖動(dòng)30分鐘。
6、取上清放入50ml離心管中。再加入1ml Buffer C, 終止反應(yīng)。
7、重復(fù)步驟5、6兩次。
8、將吸出全部上清進(jìn)行離心，500g離心5分鐘，棄上清。
9、取2ml Buffer D懸浮細(xì)胞，用血球計(jì)數(shù)板或電子記數(shù)儀計(jì)數(shù)細(xì)胞，并檢測(cè)細(xì)胞活性。
10、懸浮細(xì)胞用相應(yīng)的原代細(xì)胞培養(yǎng)基稀釋?zhuān)姑亢辽囵B(yǎng)基中含有1×106個(gè)細(xì)胞，接種培養(yǎng)瓶中，大約每平方厘米2×105個(gè)細(xì)胞。
11、每隔2-4天更換一次培養(yǎng)基（以pH變化為標(biāo)準(zhǔn)），觀(guān)察細(xì)胞生長(zhǎng)情況。
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