分離試劑盒編號：ISO-II
分離試劑盒適用：各種人和哺乳動物組織的骨骼肌細胞、平滑肌細胞、心肌細胞、肺組織細胞、軟骨細胞及滑膜細胞的分離。
分離試劑盒規(guī)格：1
分離試劑盒價格：￥1980
分離試劑盒產地：中國，PriCells
分離試劑盒特征：不含有HIV、HBV、HCV、細菌、支原體、真菌、酵母；不含有內毒素；不含有苯；不含有血清。
生物安全級：1級。
運輸條件：4oC。
儲存條件：4oC，避光。
用途范圍：只可用于科研。
原代細胞分離試劑盒II 產品說明書
一、主要適用
骨骼肌細胞、平滑肌細胞、心肌細胞、肺組織細胞、軟骨細胞及滑膜細胞。
二、試劑盒組成
1、Buffer A： 100ml × 2 4℃ 保存
2、Buffer B： 50ml × 2 4℃ 保存
3、Buffer C 50ml × 1 4℃ 保存
4、Buffer D： 20ml × 1 4℃ 保存
5、Buffer E： 20ml × 1 4℃ 保存
6、消化液I： 2ml × 2 4℃ 保存
7、消化液II: 2ml × 1 4℃ 保存
三、使用方法
注意：使用前請認真閱讀說明書，按說明書的要求對試劑進行妥善保存。
本試劑盒供用于5次組織的原代細胞分離，每次分離的組織約1g。
取消化液I 放入50ml Buffer B中，放4℃保存。用完后，再新鮮配制。消化液II放入50ml Buffer C中，放4℃保存。
1、取組織重約1g，放入無菌培養(yǎng)皿中，取1 × PBS（pH7.4）清洗組織，充分去除組織表面的血漬和其它異物。
2、將組織轉入另一無菌的培養(yǎng)皿，切去多余組織如脂肪或壞死組織，用無菌刀 將組織切成1mm3小塊。
3、用無菌彎頭鑷將組織塊轉入50ml的無菌離心管中，讓組織塊沉淀，吸去多余液體，加入10ml Buffer A，充分混勻，300g離心5分鐘，棄上清，如此重復操作3次。
4、用10ml Buffer B重懸組織塊，將組織塊懸液轉移至25cm2無菌培養(yǎng)瓶中， 放置CO2培養(yǎng)箱中，37℃培養(yǎng)24小時。
5用強力吹打使組織分散，將懸液移入15ml無菌離心管，500g離心5分鐘， 棄上清。
6、取10ml Buffer C 懸浮組織塊，置于37℃水浴中30分鐘，每10分鐘搖動一次，讓組織塊沉淀。
7、取上清放入50ml離心管中，加入1ml Buffer D, 終止反應。
8、重復步驟6、7兩次。
9、將吸出全部上清進行離心，500g離心5分鐘，棄上清。
10、取2ml Buffer E懸浮細胞，用血球計數(shù)板或電子記數(shù)儀計數(shù)細胞，并檢測細胞活性。
11、懸浮細胞用相應的原代細胞培養(yǎng)基稀釋，使每毫升培養(yǎng)基中含有1×106個細胞，接種培養(yǎng)瓶中，大約每平方厘米2×105個細胞。
12、每隔2-4天更換一次培養(yǎng)基（以pH變化為標準），觀察細胞生長情況。
