細(xì)胞凋亡線粒體膜電位檢測(cè)試劑盒(JC-1)

商品屬性：

商品介紹：

本試劑盒可應(yīng)用于細(xì)胞、組織或純化的線粒體膜電位檢測(cè)。大量的研究表明線粒體與細(xì)胞凋亡密切相關(guān)，其中線粒體跨膜電位（△?）的破壞，被認(rèn)為是細(xì)胞凋亡級(jí)聯(lián)反應(yīng)過(guò)程中早發(fā)生的事件之一，它發(fā)生在細(xì)胞核凋亡特征（染色質(zhì)濃縮、DNA斷裂）出現(xiàn)之前，一旦線粒體跨膜電位崩潰，則細(xì)胞凋亡不可逆轉(zhuǎn)。

本試劑盒采用JC-1(5,5’,6,6’-tetrachloro-1,1’,3,3’-tetraethylbenzimidazolcarbocyanine iodide)一種陽(yáng)離子脂質(zhì)熒光染料作為檢測(cè)線粒體跨膜電位指示劑。JC-1有單體和多聚體兩種存在狀態(tài)，在低濃度時(shí)以單體的形式存在，高濃度時(shí)以多聚體形式存在，兩者的發(fā)射光譜不同，但均可在流式細(xì)胞儀綠色（FL-1）通道檢測(cè)出綠色熒光，JC-1可透過(guò)正常細(xì)胞膜以單體狀態(tài)聚集胞內(nèi)，正常健康線粒體的膜電位（△?）具有極性，JC-1依賴于△?的極性被迅速攝入線粒體內(nèi)，并因濃度增高而在線粒體內(nèi)形成多聚體，多聚體發(fā)射光為紅色熒光；可被流式細(xì)胞儀的紅色（FL-2）通道檢測(cè)到，而細(xì)胞發(fā)生凋亡時(shí)，線粒體跨膜電位被去極化，JC-1從線粒體內(nèi)釋放，紅光強(qiáng)度減弱，以單體的形式存在于胞質(zhì)內(nèi)發(fā)綠色熒光。根椐這一特征檢測(cè)線粒體膜電位的變化。

注意事項(xiàng)

1. 微量試劑取用前請(qǐng)離心集液。

2. JC-1 避光保存及使用。

3. 細(xì)胞培養(yǎng)至匯合度80-90%，收集細(xì)胞量在1×106/Test。

4. 對(duì)PH 變化過(guò)于敏感的細(xì)胞建議用胎牛血清取代Buffer 孵育染色及洗滌，或延長(zhǎng)觀測(cè)時(shí)間。

5. 流式細(xì)胞儀檢測(cè)線粒體膜電位變化受到多種因素的影響，因誘導(dǎo)劑、細(xì)胞株類型，作用時(shí)間的不同而熒光強(qiáng)度比例都有不同，因此沒(méi)有通用標(biāo)準(zhǔn)的補(bǔ)償設(shè)門指南，因此每個(gè)試驗(yàn)需設(shè)陰性及陽(yáng)性對(duì)照組進(jìn)行熒光補(bǔ)償及設(shè)門。

6. 組織需先制備單細(xì)胞懸液或提取純化線粒體后方可進(jìn)行檢測(cè)，可選用我司細(xì)胞懸液制備試劑盒或線粒體提取試劑盒。

步驟和注意事項(xiàng)：?

準(zhǔn)備實(shí)驗(yàn)環(huán)境：?確保實(shí)驗(yàn)區(qū)域清潔，?使用酒精清潔計(jì)數(shù)板和蓋玻片，?然后用吸水紙輕輕擦干。?

細(xì)胞培養(yǎng)：?

準(zhǔn)備試管或培養(yǎng)皿、?細(xì)胞培養(yǎng)基和待培養(yǎng)的細(xì)胞。?

取出保存于低溫下的細(xì)胞苗，?并加入培養(yǎng)基中，?搖晃混合均勻。?

用移液管將細(xì)胞培養(yǎng)基和細(xì)胞種植在試管或培養(yǎng)皿中。?

將試管或培養(yǎng)皿放置于恒溫培養(yǎng)箱中，?定期更換培養(yǎng)液。?

細(xì)胞凍存與復(fù)蘇：?

細(xì)胞系的凍存是將生長(zhǎng)較好的傳代細(xì)胞懸浮在加有冷凍保護(hù)劑的溶液中，?以一定的冷凍速率降至零下某一溫度，?并在此溫度下對(duì)其長(zhǎng)期保存的過(guò)程。?

復(fù)蘇則是將凍存的細(xì)胞系恢復(fù)到常溫的過(guò)程，?原則是“慢凍快融"，?以較大限度地保存細(xì)胞活力。?

細(xì)胞計(jì)數(shù)：?

制備細(xì)胞懸液，?使用消化單層培養(yǎng)細(xì)胞或收集懸浮培養(yǎng)細(xì)胞，?制成單個(gè)細(xì)胞懸液。?

在顯微鏡下，?用10×物鏡觀察計(jì)數(shù)板四角大方格中的細(xì)胞數(shù)，?細(xì)胞壓中線時(shí)，?只計(jì)左側(cè)和上方者，?不計(jì)右側(cè)和下方者。?

熒光顯微鏡使用：?

使用熒光染料對(duì)細(xì)胞進(jìn)行染色，?并觀察細(xì)胞所發(fā)出的熒光信號(hào)，?以研究細(xì)胞結(jié)構(gòu)和功能。?

聚合酶鏈反應(yīng)（?PCR）?：?

準(zhǔn)備PCR反應(yīng)所需的DNA模板、?引物、?聚合酶和核苷酸。?

按照PCR反應(yīng)液配制表制備反應(yīng)液。?

在反應(yīng)器中加入反應(yīng)液，?開(kāi)始PCR反應(yīng)。?

PCR反應(yīng)的成功與否，?可以通過(guò)電泳、?測(cè)序等方法進(jìn)一步確認(rèn)。?

轉(zhuǎn)染：?

準(zhǔn)備轉(zhuǎn)染所需的載體DNA和細(xì)胞。?

制備轉(zhuǎn)染試劑，?將DNA載體溶解于轉(zhuǎn)染試劑中，?與細(xì)胞混合均勻。?

處理轉(zhuǎn)染細(xì)胞，?并進(jìn)行下一步實(shí)驗(yàn)。?

在操作過(guò)程中，?應(yīng)注意實(shí)驗(yàn)室安全規(guī)范，?避免隨意丟棄垃圾，?及時(shí)登記購(gòu)買耗材或試劑，?保持實(shí)驗(yàn)環(huán)境的清潔和安全

下列是公司正在出售的產(chǎn)品：