細(xì)胞凋亡與壞死檢測試劑盒

商品介紹：

本試劑盒提供了一種經(jīng)典而又快速簡便的細(xì)胞凋亡與細(xì)胞壞死檢測方法。染色快速方便，兩種染料的染色僅需20-30分鐘，一步染色即可完成。使用方便，使用流式細(xì)胞儀檢測時，無需稀釋等配制過程，也無需再準(zhǔn)備其它任何溶液。本試劑盒足夠檢測100個樣品，每個樣品的細(xì)胞數(shù)量可以為10-100萬。

商品屬性：

試劑盒組份：

細(xì)胞染色緩沖液———100ml

Hoechst染色液———0.5ml

PI染色液——————0.5ml

本試劑盒采用Hoechst 33342和碘化丙啶(Propidium Iodide，PI)雙染的方法。細(xì)胞發(fā)生凋亡時，染色質(zhì)會固縮。

Hoechst 33342可以穿透細(xì)胞膜，染色后凋亡細(xì)胞熒光會比正常細(xì)胞明顯增強。碘化丙啶(PI)不能穿透細(xì)胞膜，對于具有完整細(xì)胞膜的正常細(xì)胞或凋亡細(xì)胞不能染色。而對于壞死細(xì)胞，其細(xì)胞膜的完整性喪失，碘化丙啶(PI)可以染色壞死細(xì)胞。上述兩種染料雙染后，使用流式細(xì)胞儀或熒光顯微鏡檢測時，正常細(xì)胞為弱紅色熒光＋弱藍色熒光，凋亡細(xì)胞為弱紅色熒光＋強藍色熒光，壞死細(xì)胞為強紅色熒光＋強藍色熒光。參考下圖，左圖為誘導(dǎo)凋亡前的正常細(xì)胞，右圖為誘導(dǎo)凋亡后的細(xì)胞。

儲存條件：-20℃避光，有效期一年。

步驟和注意事項：?

準(zhǔn)備實驗環(huán)境：?確保實驗區(qū)域清潔，?使用酒精清潔計數(shù)板和蓋玻片，?然后用吸水紙輕輕擦干。?

細(xì)胞培養(yǎng)：?

準(zhǔn)備試管或培養(yǎng)皿、?細(xì)胞培養(yǎng)基和待培養(yǎng)的細(xì)胞。?

取出保存于低溫下的細(xì)胞苗，?并加入培養(yǎng)基中，?搖晃混合均勻。?

用移液管將細(xì)胞培養(yǎng)基和細(xì)胞種植在試管或培養(yǎng)皿中。?

將試管或培養(yǎng)皿放置于恒溫培養(yǎng)箱中，?定期更換培養(yǎng)液。?

細(xì)胞凍存與復(fù)蘇：?

細(xì)胞系的凍存是將生長較好的傳代細(xì)胞懸浮在加有冷凍保護劑的溶液中，?以一定的冷凍速率降至零下某一溫度，?并在此溫度下對其長期保存的過程。?

復(fù)蘇則是將凍存的細(xì)胞系恢復(fù)到常溫的過程，?原則是“慢凍快融"，?以較大限度地保存細(xì)胞活力。?

細(xì)胞計數(shù)：?

制備細(xì)胞懸液，?使用消化單層培養(yǎng)細(xì)胞或收集懸浮培養(yǎng)細(xì)胞，?制成單個細(xì)胞懸液。?

在顯微鏡下，?用10×物鏡觀察計數(shù)板四角大方格中的細(xì)胞數(shù)，?細(xì)胞壓中線時，?只計左側(cè)和上方者，?不計右側(cè)和下方者。?

熒光顯微鏡使用：?

使用熒光染料對細(xì)胞進行染色，?并觀察細(xì)胞所發(fā)出的熒光信號，?以研究細(xì)胞結(jié)構(gòu)和功能。?

聚合酶鏈反應(yīng)（?PCR）?：?

準(zhǔn)備PCR反應(yīng)所需的DNA模板、?引物、?聚合酶和核苷酸。?

按照PCR反應(yīng)液配制表制備反應(yīng)液。?

在反應(yīng)器中加入反應(yīng)液，?開始PCR反應(yīng)。?

PCR反應(yīng)的成功與否，?可以通過電泳、?測序等方法進一步確認(rèn)。?

轉(zhuǎn)染：?

準(zhǔn)備轉(zhuǎn)染所需的載體DNA和細(xì)胞。?

制備轉(zhuǎn)染試劑，?將DNA載體溶解于轉(zhuǎn)染試劑中，?與細(xì)胞混合均勻。?

處理轉(zhuǎn)染細(xì)胞，?并進行下一步實驗。?

在操作過程中，?應(yīng)注意實驗室安全規(guī)范，?避免隨意丟棄垃圾，?及時登記購買耗材或試劑，?保持實驗環(huán)境的清潔和安全

下列是公司正在出售的產(chǎn)品：