細胞凋亡DNA Ladder檢測試劑盒

商品屬性：

商品介紹：

本試劑盒可應(yīng)用于培養(yǎng)細胞凋亡檢測（不推薦用于檢測組織樣本）。細胞核染色質(zhì)DNA 斷裂是細胞凋亡的標(biāo)志特征。在細胞發(fā)生凋亡時，核酸內(nèi)切酶被激活，選擇性降解染色質(zhì)DNA，形成50-300 kb 的大片段，并進而在核小體連接處斷裂，形成180-200 bp 或其整倍數(shù)的DNA片段，這些DNA 片段可從細胞中提取出來，通過瓊脂糖凝膠電泳，溴化乙啶染色呈現(xiàn)為梯狀條帶（DNALadder），并據(jù)此判斷細胞凋亡產(chǎn)生。我司細胞凋亡DNA Ladder 檢測試劑盒提供了一種簡便、快速地提取染色質(zhì)DNA 的方法，并增加對小片段DNA 的回收，從而增強了檢測的敏感性。

注意事項

1. DNA Ladder 出現(xiàn)在細胞凋亡晚期，觀察細胞形態(tài)已發(fā)生皺縮出芽，染色質(zhì)凝聚，細胞核已固縮斷裂的凋亡晚期形態(tài)，建議該種形態(tài)的凋亡細胞比例在30%以上時進行DNA Ladder 檢測或先進行Tunel檢測.

2. DNA Ladder 出現(xiàn)在一個較短的時間段，在凋亡早期取樣，則無DNA 降解的條帶，而在凋亡末期取樣則產(chǎn)生與細胞壞死相似的DNA 彌散條芾。因此取樣時間需根椐不同種類的細胞和誘導(dǎo)劑而摸索確定。

3. 貼壁細胞好不用消化而用細胞刮收集。

4. 某些細胞不產(chǎn)生這種核小體間的DNA 斷裂，而是產(chǎn)生50-300kb 的大片段斷裂。

步驟和注意事項：?

準(zhǔn)備實驗環(huán)境：?確保實驗區(qū)域清潔，?使用酒精清潔計數(shù)板和蓋玻片，?然后用吸水紙輕輕擦干。?

細胞培養(yǎng)：?

準(zhǔn)備試管或培養(yǎng)皿、?細胞培養(yǎng)基和待培養(yǎng)的細胞。?

取出保存于低溫下的細胞苗，?并加入培養(yǎng)基中，?搖晃混合均勻。?

用移液管將細胞培養(yǎng)基和細胞種植在試管或培養(yǎng)皿中。?

將試管或培養(yǎng)皿放置于恒溫培養(yǎng)箱中，?定期更換培養(yǎng)液。?

細胞凍存與復(fù)蘇：?

細胞系的凍存是將生長較好的傳代細胞懸浮在加有冷凍保護劑的溶液中，?以一定的冷凍速率降至零下某一溫度，?并在此溫度下對其長期保存的過程。?

復(fù)蘇則是將凍存的細胞系恢復(fù)到常溫的過程，?原則是“慢凍快融"，?以較大限度地保存細胞活力。?

細胞計數(shù)：?

制備細胞懸液，?使用消化單層培養(yǎng)細胞或收集懸浮培養(yǎng)細胞，?制成單個細胞懸液。?

在顯微鏡下，?用10×物鏡觀察計數(shù)板四角大方格中的細胞數(shù)，?細胞壓中線時，?只計左側(cè)和上方者，?不計右側(cè)和下方者。?

熒光顯微鏡使用：?

使用熒光染料對細胞進行染色，?并觀察細胞所發(fā)出的熒光信號，?以研究細胞結(jié)構(gòu)和功能。?

聚合酶鏈反應(yīng)（?PCR）?：?

準(zhǔn)備PCR反應(yīng)所需的DNA模板、?引物、?聚合酶和核苷酸。?

按照PCR反應(yīng)液配制表制備反應(yīng)液。?

在反應(yīng)器中加入反應(yīng)液，?開始PCR反應(yīng)。?

PCR反應(yīng)的成功與否，?可以通過電泳、?測序等方法進一步確認(rèn)。?

轉(zhuǎn)染：?

準(zhǔn)備轉(zhuǎn)染所需的載體DNA和細胞。?

制備轉(zhuǎn)染試劑，?將DNA載體溶解于轉(zhuǎn)染試劑中，?與細胞混合均勻。?

處理轉(zhuǎn)染細胞，?并進行下一步實驗。?

在操作過程中，?應(yīng)注意實驗室安全規(guī)范，?避免隨意丟棄垃圾，?及時登記購買耗材或試劑，?保持實驗環(huán)境的清潔和安全

下列是公司正在出售的產(chǎn)品：