MTT細胞增值與毒性檢測試劑盒

商品屬性：

商品介紹：

MTT可以被線粒體內(nèi)的一些脫氫酶還原生成結(jié)晶狀的深紫色產(chǎn)物formazan，在特定溶劑存在的情況下，可以被溶解，然后通過酶標儀可以測定490nm波長附近的吸光度。細胞增殖越多越快，則吸光度越高;細胞毒性越大，則吸光度越低。

使用說明：

1.收集對數(shù)期細胞，調(diào)整細胞懸液濃度，分于96孔板，每孔180μL，3000-10000個細胞/孔。

2.置37℃、5%CO2溫箱培養(yǎng)使細胞貼壁，培養(yǎng)6-24小時。

3.加入適當濃度的受試化合物，繼續(xù)培養(yǎng)適當時間。

4.小心吸去上清，加入90μL新鮮培養(yǎng)液，再加入10μL MTT溶液，繼續(xù)培養(yǎng)4 h。

5.然后吸掉上清，每孔加入110μL Formazan溶解液，置搖床上低速振蕩10 min，使結(jié)晶物充分溶解。在酶聯(lián)免疫檢測儀490 nm處測量各孔的吸光值。

6.同時設(shè)置調(diào)零孔(培養(yǎng)基、MTT、 Formazan溶解液)，對照孔(細胞、相同濃度的藥物溶解介質(zhì)、培養(yǎng)液、MTT、 Formazan溶解液)，每組設(shè)定3復(fù)孔。

儲存條件：-20℃

步驟和注意事項：?

準備實驗環(huán)境：?確保實驗區(qū)域清潔，?使用酒精清潔計數(shù)板和蓋玻片，?然后用吸水紙輕輕擦干。?

細胞培養(yǎng)：?

準備試管或培養(yǎng)皿、?細胞培養(yǎng)基和待培養(yǎng)的細胞。?

取出保存于低溫下的細胞苗，?并加入培養(yǎng)基中，?搖晃混合均勻。?

用移液管將細胞培養(yǎng)基和細胞種植在試管或培養(yǎng)皿中。?

將試管或培養(yǎng)皿放置于恒溫培養(yǎng)箱中，?定期更換培養(yǎng)液。?

細胞凍存與復(fù)蘇：?

細胞系的凍存是將生長較好的傳代細胞懸浮在加有冷凍保護劑的溶液中，?以一定的冷凍速率降至零下某一溫度，?并在此溫度下對其長期保存的過程。?

復(fù)蘇則是將凍存的細胞系恢復(fù)到常溫的過程，?原則是“慢凍快融"，?以較大限度地保存細胞活力。?

細胞計數(shù)：?

制備細胞懸液，?使用消化單層培養(yǎng)細胞或收集懸浮培養(yǎng)細胞，?制成單個細胞懸液。?

在顯微鏡下，?用10×物鏡觀察計數(shù)板四角大方格中的細胞數(shù)，?細胞壓中線時，?只計左側(cè)和上方者，?不計右側(cè)和下方者。?

熒光顯微鏡使用：?

使用熒光染料對細胞進行染色，?并觀察細胞所發(fā)出的熒光信號，?以研究細胞結(jié)構(gòu)和功能。?

聚合酶鏈反應(yīng)（?PCR）?：?

準備PCR反應(yīng)所需的DNA模板、?引物、?聚合酶和核苷酸。?

按照PCR反應(yīng)液配制表制備反應(yīng)液。?

在反應(yīng)器中加入反應(yīng)液，?開始PCR反應(yīng)。?

PCR反應(yīng)的成功與否，?可以通過電泳、?測序等方法進一步確認。?

轉(zhuǎn)染：?

準備轉(zhuǎn)染所需的載體DNA和細胞。?

制備轉(zhuǎn)染試劑，?將DNA載體溶解于轉(zhuǎn)染試劑中，?與細胞混合均勻。?

處理轉(zhuǎn)染細胞，?并進行下一步實驗。?

在操作過程中，?應(yīng)注意實驗室安全規(guī)范，?避免隨意丟棄垃圾，?及時登記購買耗材或試劑，?保持實驗環(huán)境的清潔和安全

下列是公司正在出售的產(chǎn)品：