CFSE/PI雙染細(xì)胞毒性檢測(cè)試劑盒細(xì)胞凋亡

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CFSE/PI 雙染細(xì)胞毒性檢測(cè)試劑盒是利用細(xì)胞熒光染料CFSE(CFDA-SE)和PI對(duì)細(xì)胞進(jìn)行染色，利用CFSE標(biāo)記靶細(xì)胞，PI標(biāo)記死的靶細(xì)胞來區(qū)分不同的細(xì)胞，活的靶細(xì)胞成綠色，死的靶細(xì)胞成紅色和綠色，從而檢測(cè)細(xì)胞毒性作用。根據(jù)不同的實(shí)驗(yàn)方案設(shè)計(jì)，可以用來檢測(cè)化合物的細(xì)胞毒性作用。也可以用來檢測(cè)殺傷性T 細(xì)胞或NK 細(xì)胞介導(dǎo)的細(xì)胞毒作用。

CFDA-SE 是一種可對(duì)活細(xì)胞進(jìn)行熒光標(biāo)記的新型染料，可以標(biāo)記活體細(xì)胞。CFDASE是一種帶有琥珀酰亞胺(NHS)的熒光染料，可以結(jié)合細(xì)胞內(nèi)的蛋白質(zhì)。CFDASE在結(jié)構(gòu)上將酚羥基部位改造成AM體，所以自身不發(fā)熒光，熒光背景低，脂溶性高，能夠輕易穿透細(xì)胞膜，進(jìn)入細(xì)胞內(nèi)的CFDASE的AM 部位能被細(xì)胞內(nèi)酯酶水解生成CFSE，通過共價(jià)結(jié)合賴氨酸側(cè)鏈的氨基而摻入細(xì)胞內(nèi)和細(xì)胞表面的蛋白，且結(jié)合后發(fā)出強(qiáng)的綠色熒光。CFSE的琥珀酰亞胺(NHS)和細(xì)胞內(nèi)蛋白質(zhì)的氨基部位結(jié)合，固定在細(xì)胞內(nèi)，不會(huì)漏出細(xì)胞外。CFSE進(jìn)入細(xì)胞后定位于細(xì)胞膜、細(xì)胞質(zhì)和細(xì)胞核，在細(xì)胞核的熒光強(qiáng)。

CFSE毒性小，不影響細(xì)胞的增殖能力。此方法操作簡單，且不用放射性同位素，不存在安全隱患?？梢愿焖?，更準(zhǔn)確和更安全地得到想要的實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)。

CFSE/PI標(biāo)記細(xì)胞后通常用流式細(xì)胞儀進(jìn)行細(xì)胞毒性檢測(cè)。

CFSE標(biāo)記細(xì)胞呈綠色熒光，熒光波長：λex=496 nm,λem=516 nm。流式檢測(cè)時(shí)的激發(fā)波長可以選擇488nm，此時(shí)的發(fā)射波長為516nm，使用流式細(xì)胞儀檢測(cè)時(shí)可以采用FL1 detection channel。PI標(biāo)記細(xì)胞呈紅色熒光，流式檢測(cè)時(shí)的激發(fā)波長可以選擇488nm，此時(shí)的發(fā)射波長為647nm，使用流式細(xì)胞儀檢測(cè)時(shí)可以采用FL2 detection channel。

CFSE標(biāo)記的細(xì)胞除了流式細(xì)胞儀檢測(cè)細(xì)胞毒性外，還可單染后用于細(xì)胞增殖檢測(cè)，或者用熒光酶標(biāo)板定量活細(xì)胞數(shù)目，或者用熒光顯微鏡進(jìn)行均一染色的細(xì)胞示蹤觀察。

儲(chǔ)存條件：CFSE探針-20℃避光保存；溶解液-20℃保存；PI染色液2-8℃避光保存。

有效期：六個(gè)月。

步驟和注意事項(xiàng)：?

準(zhǔn)備實(shí)驗(yàn)環(huán)境：?確保實(shí)驗(yàn)區(qū)域清潔，?使用酒精清潔計(jì)數(shù)板和蓋玻片，?然后用吸水紙輕輕擦干。?

細(xì)胞培養(yǎng)：?

準(zhǔn)備試管或培養(yǎng)皿、?細(xì)胞培養(yǎng)基和待培養(yǎng)的細(xì)胞。?

取出保存于低溫下的細(xì)胞苗，?并加入培養(yǎng)基中，?搖晃混合均勻。?

用移液管將細(xì)胞培養(yǎng)基和細(xì)胞種植在試管或培養(yǎng)皿中。?

將試管或培養(yǎng)皿放置于恒溫培養(yǎng)箱中，?定期更換培養(yǎng)液。?

細(xì)胞凍存與復(fù)蘇：?

細(xì)胞系的凍存是將生長較好的傳代細(xì)胞懸浮在加有冷凍保護(hù)劑的溶液中，?以一定的冷凍速率降至零下某一溫度，?并在此溫度下對(duì)其長期保存的過程。?

復(fù)蘇則是將凍存的細(xì)胞系恢復(fù)到常溫的過程，?原則是“慢凍快融"，?以較大限度地保存細(xì)胞活力。?

細(xì)胞計(jì)數(shù)：?

制備細(xì)胞懸液，?使用消化單層培養(yǎng)細(xì)胞或收集懸浮培養(yǎng)細(xì)胞，?制成單個(gè)細(xì)胞懸液。?

在顯微鏡下，?用10×物鏡觀察計(jì)數(shù)板四角大方格中的細(xì)胞數(shù)，?細(xì)胞壓中線時(shí)，?只計(jì)左側(cè)和上方者，?不計(jì)右側(cè)和下方者。?

熒光顯微鏡使用：?

使用熒光染料對(duì)細(xì)胞進(jìn)行染色，?并觀察細(xì)胞所發(fā)出的熒光信號(hào)，?以研究細(xì)胞結(jié)構(gòu)和功能。?

聚合酶鏈反應(yīng)（?PCR）?：?

準(zhǔn)備PCR反應(yīng)所需的DNA模板、?引物、?聚合酶和核苷酸。?

按照PCR反應(yīng)液配制表制備反應(yīng)液。?

在反應(yīng)器中加入反應(yīng)液，?開始PCR反應(yīng)。?

PCR反應(yīng)的成功與否，?可以通過電泳、?測(cè)序等方法進(jìn)一步確認(rèn)。?

轉(zhuǎn)染：?

準(zhǔn)備轉(zhuǎn)染所需的載體DNA和細(xì)胞。?

制備轉(zhuǎn)染試劑，?將DNA載體溶解于轉(zhuǎn)染試劑中，?與細(xì)胞混合均勻。?

處理轉(zhuǎn)染細(xì)胞，?并進(jìn)行下一步實(shí)驗(yàn)。?

在操作過程中，?應(yīng)注意實(shí)驗(yàn)室安全規(guī)范，?避免隨意丟棄垃圾，?及時(shí)登記購買耗材或試劑，?保持實(shí)驗(yàn)環(huán)境的清潔和安全

下列是公司正在出售的產(chǎn)品：