Caspase 3熒光法檢測(cè)試劑盒(AFC)細(xì)胞凋亡

商品屬性：

商品介紹：

本試劑盒適用于培養(yǎng)細(xì)胞及新鮮組織caspase-3 檢測(cè)。Caspase 家族在介導(dǎo)細(xì)胞凋亡的過(guò)程中起著非常重要的作用，其中caspase-3 為關(guān)鍵的執(zhí)行分子，與DNA 斷裂、染色質(zhì)凝聚和凋亡小體形成有關(guān)。Caspase-3 在正常狀態(tài)下以酶原的形式存在于胞漿中，沒(méi)有活性；但在細(xì)胞發(fā)生凋亡階段，它被激活，活化的Caspase-3 由兩個(gè)大亞基和兩個(gè)小亞基組成，裂解相應(yīng)的胞漿胞核底物，最終導(dǎo)致細(xì)胞凋亡。Caspase-3 熒光檢測(cè)試劑盒就是將caspase-3 序列特異性的多肽偶聯(lián)至發(fā)色基團(tuán)。當(dāng)?shù)孜锉籆aspase-3 剪切后，發(fā)色基團(tuán)即游離出來(lái)，可通過(guò)熒光酶標(biāo)儀測(cè)定其熒光強(qiáng)度（激發(fā)波長(zhǎng)=485nm,發(fā)射波長(zhǎng)=535nm）。

注意事項(xiàng)

1. Caspase-3 Substrate 避光保存及使用。

2. 對(duì)某些凋亡誘導(dǎo)劑引起的細(xì)胞凋亡可能存在非依賴(lài)于Caspase-3 活化的機(jī)制，這種情況時(shí)利用本試劑盒檢測(cè)Caspase-3 活性無(wú)明顯改變，需要考慮凋亡機(jī)制中的其他信號(hào)通路。

3. 細(xì)胞數(shù)量需達(dá)到3~5×106 個(gè)或新鮮組織50~100mg，以便能達(dá)到測(cè)定需要的100~200μg 蛋白的要求，因?yàn)镃aspase-3 的活性與細(xì)胞裂解液的蛋白含量有關(guān)，如測(cè)定的RFU 值偏低，可以通過(guò)適當(dāng)延長(zhǎng)反應(yīng)的時(shí)間，如果值還是不高，可通過(guò)增加細(xì)胞數(shù)量或組織量的方法來(lái)提高蛋白量。

步驟和注意事項(xiàng)：?

準(zhǔn)備實(shí)驗(yàn)環(huán)境：?確保實(shí)驗(yàn)區(qū)域清潔，?使用酒精清潔計(jì)數(shù)板和蓋玻片，?然后用吸水紙輕輕擦干。?

細(xì)胞培養(yǎng)：?

準(zhǔn)備試管或培養(yǎng)皿、?細(xì)胞培養(yǎng)基和待培養(yǎng)的細(xì)胞。?

取出保存于低溫下的細(xì)胞苗，?并加入培養(yǎng)基中，?搖晃混合均勻。?

用移液管將細(xì)胞培養(yǎng)基和細(xì)胞種植在試管或培養(yǎng)皿中。?

將試管或培養(yǎng)皿放置于恒溫培養(yǎng)箱中，?定期更換培養(yǎng)液。?

細(xì)胞凍存與復(fù)蘇：?

細(xì)胞系的凍存是將生長(zhǎng)較好的傳代細(xì)胞懸浮在加有冷凍保護(hù)劑的溶液中，?以一定的冷凍速率降至零下某一溫度，?并在此溫度下對(duì)其長(zhǎng)期保存的過(guò)程。?

復(fù)蘇則是將凍存的細(xì)胞系恢復(fù)到常溫的過(guò)程，?原則是“慢凍快融"，?以較大限度地保存細(xì)胞活力。?

細(xì)胞計(jì)數(shù)：?

制備細(xì)胞懸液，?使用消化單層培養(yǎng)細(xì)胞或收集懸浮培養(yǎng)細(xì)胞，?制成單個(gè)細(xì)胞懸液。?

在顯微鏡下，?用10×物鏡觀察計(jì)數(shù)板四角大方格中的細(xì)胞數(shù)，?細(xì)胞壓中線時(shí)，?只計(jì)左側(cè)和上方者，?不計(jì)右側(cè)和下方者。?

熒光顯微鏡使用：?

使用熒光染料對(duì)細(xì)胞進(jìn)行染色，?并觀察細(xì)胞所發(fā)出的熒光信號(hào)，?以研究細(xì)胞結(jié)構(gòu)和功能。?

聚合酶鏈反應(yīng)（?PCR）?：?

準(zhǔn)備PCR反應(yīng)所需的DNA模板、?引物、?聚合酶和核苷酸。?

按照PCR反應(yīng)液配制表制備反應(yīng)液。?

在反應(yīng)器中加入反應(yīng)液，?開(kāi)始PCR反應(yīng)。?

PCR反應(yīng)的成功與否，?可以通過(guò)電泳、?測(cè)序等方法進(jìn)一步確認(rèn)。?

轉(zhuǎn)染：?

準(zhǔn)備轉(zhuǎn)染所需的載體DNA和細(xì)胞。?

制備轉(zhuǎn)染試劑，?將DNA載體溶解于轉(zhuǎn)染試劑中，?與細(xì)胞混合均勻。?

處理轉(zhuǎn)染細(xì)胞，?并進(jìn)行下一步實(shí)驗(yàn)。?

在操作過(guò)程中，?應(yīng)注意實(shí)驗(yàn)室安全規(guī)范，?避免隨意丟棄垃圾，?及時(shí)登記購(gòu)買(mǎi)耗材或試劑，?保持實(shí)驗(yàn)環(huán)境的清潔和安全

下列是公司正在出售的產(chǎn)品：