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更新時(shí)間:2024-07-15 17:19:17瀏覽次數(shù):143次
聯(lián)系我時(shí),請(qǐng)告知來自 環(huán)保在線規(guī)格 | 1×106cells/T25培養(yǎng)瓶 | 種屬 | 大鼠 |
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貨號(hào) | CS-X2338 | 細(xì)胞形態(tài) | 上皮細(xì)胞樣 |
產(chǎn)品信息:
貨號(hào) | CS-X2338 | 種屬 | 大鼠 |
生長(zhǎng)特性 | 半貼半懸 | 細(xì)胞形態(tài) | 上皮細(xì)胞樣 |
溫度 | 液氮 | 培養(yǎng)條件: | 氣相:空氣,95%;CO2,5% |
鑒定 | STR鑒定正確 | 生長(zhǎng)培養(yǎng)基 | Ham's F-12K+15% HS+2.5% FBS+1% P/S |
商品介紹:
產(chǎn)品名稱:GH3 (大鼠垂體瘤細(xì)胞) 種屬 大鼠 年齡(性別) 7月齡 組織來源 垂體 生長(zhǎng)特性 半貼半懸 細(xì)胞形態(tài) 上皮細(xì)胞樣 背景描述 GH3細(xì)胞是由Tashjian·A·H等人于1965年7月從一只7月齡的雌性Wistar-Furth大鼠的垂體腫瘤中分離建立的。GH3細(xì)胞不是直接來源于GH1細(xì)胞的克隆,而是從原代培養(yǎng)的GH1細(xì)胞在大鼠身上傳代兩次形成的腫瘤中建立的。上皮細(xì)胞樣的GH3細(xì)胞比GH1細(xì)胞分泌更高水平的生長(zhǎng)激su,也可產(chǎn)生催乳su。對(duì)調(diào)控GH3細(xì)胞分泌蛋白類激su的研究表明,氫化可的song可以刺激GH3細(xì)胞生長(zhǎng)激su的分泌、抑制催乳su的產(chǎn)生。 生物安全等級(jí) 1 生長(zhǎng)培養(yǎng)基 Ham's F-12K+15% HS+2.5% FBS+1% P/S 推薦傳代比例 1:2-1:4 推薦換液頻率 2~3次/周 倍增時(shí)間 ~60-90小時(shí) 凍存條件 凍存液:55% 基礎(chǔ)培養(yǎng)基+40%FBS+5%DMSO 溫度:液氮 培養(yǎng)條件 氣相:空氣,95%;CO2,5% 溫度:37℃ 基因表達(dá)情況 prolactin; growth hormone (somatotrophin) 保藏機(jī)構(gòu) ATCC; CCL-82.1 DSMZ; ACC-469 ECACC; 87012603 |
細(xì)胞保存方法:
(一)細(xì)胞凍存
1. 配制含10%DMSO或甘油、10~20%小牛血清的凍存培養(yǎng)液;
2. 取對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的細(xì)胞,去除舊培養(yǎng)液,用PBS清洗。
3. 去除PBS,加入適量(覆蓋培養(yǎng)皿表面)把單層生長(zhǎng)的細(xì)胞消化下來;
4. 離心1000rpm,5min;
5. 去除,加入適量配制好的凍存培養(yǎng)液,用吸管輕輕吹打使細(xì)胞均勻,計(jì)數(shù),調(diào)節(jié)凍存液中細(xì)胞的最終密度為5×106/ml~1×107/ml;
6. 將細(xì)胞分裝入凍存管中,每管1~1.5 ml;
7. 在凍存管上標(biāo)明細(xì)胞的名稱,凍存時(shí)間及操作者;
8. 凍存:標(biāo)準(zhǔn)的凍存程序?yàn)榻禍厮俾?1~-2℃/ min;當(dāng)溫度達(dá)-25℃以下時(shí),可增至-5℃~-10℃/min;到-100℃時(shí),則可迅速浸入液氮中。也可將裝有細(xì)胞的凍存管放入-20℃冰箱2h ,然后放入-70℃冰箱中過夜,取出凍存管,移入液氮容器內(nèi)。
注意事項(xiàng):
1)、欲冷凍保存之細(xì)胞應(yīng)在生長(zhǎng)良好且存活率高之狀態(tài),約為80~90%致密度。冷凍前檢測(cè)細(xì)胞是否仍保有其性質(zhì),應(yīng)在冷凍保存前一至二日測(cè)試是否有抗體之產(chǎn)生。
2)、細(xì)胞在液氮中可長(zhǎng)期凍存無,而不會(huì)影響細(xì)胞活力;在-70度可保存數(shù)月。
3)、注意冷凍保護(hù)劑之品質(zhì)。DMSO應(yīng)為試劑級(jí)等級(jí),無菌且無色(以0. 22micron FGLP Telflon過濾或是直接購(gòu)買無菌產(chǎn)品,如Sigma D-2650),以5~10 ml小體積分裝,4 ℃避光保存,勿作多次解凍。Glycerol亦應(yīng)為試劑級(jí)等級(jí),以高壓蒸汽滅菌后避光保存。在開啟后一年內(nèi)使用,因長(zhǎng)期儲(chǔ)存后對(duì)細(xì)胞會(huì)有毒性。本方法中先制備雙倍凍存液,可避免DMSO直接加入時(shí)釋放的熱量對(duì)細(xì)胞的損傷。緩慢逐滴加入細(xì)胞懸液是使細(xì)胞逐步適應(yīng)高滲,可降低細(xì)胞受損。DMSO可能引起部分白血病細(xì)胞株的分化,可換用10%甘油凍存。
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操作步驟:
1)、冷凍前24-48小時(shí)更換半量或全量培養(yǎng)基,使細(xì)胞處于指數(shù)生長(zhǎng)期。
2)、配制冷凍保存溶液(使用前配制):另取一離心管,加入培養(yǎng)基、血清,逐滴加入二甲基亞砜 (DMSO)至20%濃度,即制成雙倍的凍存液,置于室溫下待用。
3)、離心收集培養(yǎng)之細(xì)胞,用加血清的培養(yǎng)基重懸起細(xì)胞,取少量細(xì)胞懸浮液(約0. 1 ml)計(jì)數(shù)細(xì)胞濃度及凍前存活率。
4)、取與細(xì)胞懸液等量的凍存液,緩慢逐滴加入細(xì)胞懸液,并晃動(dòng)試管,制成細(xì)胞凍存懸液(DMSO后濃度為5~10%),使細(xì)胞濃度為1~5×106cells/ ml,混合均勻,分裝于已標(biāo)示之冷凍保存管中,1~2 ml/vial,并取少量細(xì)胞懸浮液作污染檢測(cè)。嚴(yán)密封口后,注明細(xì)胞名稱、代數(shù)、日期。然后進(jìn)行凍存。
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