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當(dāng)前位置:上海莼試生物技術(shù)有限公司>>科研細(xì)胞>>原代細(xì)胞>> 大鼠心臟干細(xì)胞
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更新時(shí)間:2024-07-26 13:23:13瀏覽次數(shù):419次
聯(lián)系我時(shí),請(qǐng)告知來(lái)自 環(huán)保在線貨號(hào) | CS-X3251 | 規(guī)格 | 5×105Cells/T25培養(yǎng)瓶 |
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生長(zhǎng)特性 | 貼壁 | 組織來(lái)源 | 心臟組織 |
細(xì)胞保存方法:
(一)細(xì)胞凍存
1. 配制含10%DMSO或甘油、10~20%小牛血清的凍存培養(yǎng)液;
2. 取對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的細(xì)胞,去除舊培養(yǎng)液,用PBS清洗。
3. 去除PBS,加入適量(覆蓋培養(yǎng)皿表面)把單層生長(zhǎng)的細(xì)胞消化下來(lái);
4. 離心1000rpm,5min;
5. 去除,加入適量配制好的凍存培養(yǎng)液,用吸管輕輕吹打使細(xì)胞均勻,計(jì)數(shù),調(diào)節(jié)凍存液中細(xì)胞的最終密度為5×106/ml~1×107/ml;
6. 將細(xì)胞分裝入凍存管中,每管1~1.5 ml;
7. 在凍存管上標(biāo)明細(xì)胞的名稱,凍存時(shí)間及操作者;
8. 凍存:標(biāo)準(zhǔn)的凍存程序?yàn)榻禍厮俾?1~-2℃/ min;當(dāng)溫度達(dá)-25℃以下時(shí),可增至-5℃~-10℃/min;到-100℃時(shí),則可迅速浸入液氮中。也可將裝有細(xì)胞的凍存管放入-20℃冰箱2h ,然后放入-70℃冰箱中過(guò)夜,取出凍存管,移入液氮容器內(nèi)。
產(chǎn)品信息:
貨號(hào) | CS-X3251 | 組織來(lái)源 | 心臟組織 |
傳代特性 | 可傳3代左右 | 培養(yǎng)基 | 含FBS、生長(zhǎng)添加劑、Penicillin、Streptomycin等 |
細(xì)胞形態(tài) | 長(zhǎng)梭形 | 生長(zhǎng)特性 | 貼壁 |
培養(yǎng)條件 | 換液頻率 | 每2-3天換液一次 |
商品介紹:
產(chǎn)品名稱:大鼠心臟干細(xì)胞 3.產(chǎn)品規(guī)格:5×105cells/T25細(xì)胞培養(yǎng)瓶 4.細(xì)胞簡(jiǎn)介: 大鼠心臟干細(xì)胞分離自心臟組織;心臟是脊椎動(dòng)物身體中重要的一個(gè)器官,主要功能是為血液流動(dòng)提供壓力,把血液運(yùn)行至身體各個(gè)部分。心臟由心肌構(gòu)成,左心房、左心室、右心房、右心室四個(gè)腔組成。左右心房之間和左右心室之間均由間隔隔開(kāi),故互不相通,心房與心室之間有瓣膜(房室瓣),這些瓣膜使血液只能由心房流入心室,而不能倒流。心臟的作用是推動(dòng)血液流動(dòng),向器官、組織提供充足的血流量,以供應(yīng)氧和各種營(yíng)養(yǎng)物質(zhì),并帶走代謝的終產(chǎn)物(如二氧化碳、無(wú)機(jī)鹽、尿素和尿酸等),使細(xì)胞維持正常的代謝和功能。研究發(fā)現(xiàn),心臟干細(xì)胞是一種多潛能細(xì)胞,具有再生和克隆能力,并可分化為心肌細(xì)胞、平滑肌細(xì)胞和血管內(nèi)皮細(xì)胞。體內(nèi)研究顯示,從心臟中分離出的心臟干細(xì)胞,經(jīng)體外簡(jiǎn)單培養(yǎng)、增殖和標(biāo)記后,移植到心肌梗死邊緣區(qū)域,心梗血流動(dòng)力學(xué)和心室壁厚度較對(duì)照組明顯改善,心肌梗死邊緣區(qū)域發(fā)現(xiàn)有標(biāo)記的心肌細(xì)胞、平滑肌細(xì)胞和內(nèi)皮細(xì)胞。盡管其新生心肌細(xì)胞較小,但表達(dá)一些特殊肌蛋白如心臟肌球蛋白重鏈、α-肌動(dòng)蛋白、α-輔肌動(dòng)蛋白、連接蛋白等,證實(shí)了心臟干細(xì)胞對(duì)心肌梗死的修復(fù)作用。干細(xì)胞移植治療是目前心肌梗死和缺血性心臟病細(xì)胞重建的主要方法,成體干細(xì)胞中的c-kit陽(yáng)性心臟干細(xì)胞因其來(lái)源于心臟,有定向心臟細(xì)胞系分化的趨勢(shì),體內(nèi)外可以分化成心肌細(xì)胞、血管內(nèi)皮細(xì)胞和平滑肌細(xì)胞,同時(shí)自體移植不存在免疫排斥反應(yīng)及倫理問(wèn)題已經(jīng)成為目前研究的熱點(diǎn)。短期內(nèi)獲得治療量的自體心臟干細(xì)胞是這一治療應(yīng)用于臨床的關(guān)鍵所在。因此,研究一種新的分離培養(yǎng)方法可在短時(shí)期內(nèi)獲得大量純度較高的自體c-kit陽(yáng)性心臟干細(xì)胞成為目前干細(xì)胞領(lǐng)域研究的熱點(diǎn)問(wèn)題之一。 5.方法簡(jiǎn)介: 公司實(shí)驗(yàn)室分離的大鼠心臟干細(xì)胞采用機(jī)械剪碎組織、膠原酶分次消化法結(jié)合差速貼壁、心臟干細(xì)胞專用培養(yǎng)基培養(yǎng)篩選制備而來(lái),細(xì)胞總量約為5×10?cells/瓶。 6.質(zhì)量檢測(cè): 公司實(shí)驗(yàn)室分離的大鼠心臟干細(xì)胞經(jīng)c-kit免疫熒光鑒定,純度可達(dá)90%以上,且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細(xì)菌、酵母和真菌等。 7.培養(yǎng)信息: 包被條件 PLL(0.1mg/ml) 培養(yǎng)基 含FBS、生長(zhǎng)添加劑、Penicillin、Streptomycin等 換液頻率 每2-3天換液一次 生長(zhǎng)特性 貼壁 細(xì)胞形態(tài) 長(zhǎng)梭形 傳代特性 可傳3代左右 消化液 0.25%yi蛋白酶 培養(yǎng)條件 氣相:空氣,95%;CO2,5% |
操作步驟:
1)、冷凍前24-48小時(shí)更換半量或全量培養(yǎng)基,使細(xì)胞處于指數(shù)生長(zhǎng)期。
2)、配制冷凍保存溶液(使用前配制):另取一離心管,加入培養(yǎng)基、血清,逐滴加入二甲基亞砜 (DMSO)至20%濃度,即制成雙倍的凍存液,置于室溫下待用。
3)、離心收集培養(yǎng)之細(xì)胞,用加血清的培養(yǎng)基重懸起細(xì)胞,取少量細(xì)胞懸浮液(約0. 1 ml)計(jì)數(shù)細(xì)胞濃度及凍前存活率。
4)、取與細(xì)胞懸液等量的凍存液,緩慢逐滴加入細(xì)胞懸液,并晃動(dòng)試管,制成細(xì)胞凍存懸液(DMSO后濃度為5~10%),使細(xì)胞濃度為1~5×106cells/ ml,混合均勻,分裝于已標(biāo)示之冷凍保存管中,1~2 ml/vial,并取少量細(xì)胞懸浮液作污染檢測(cè)。嚴(yán)密封口后,注明細(xì)胞名稱、代數(shù)、日期。然后進(jìn)行凍存。
注意事項(xiàng):
1)、欲冷凍保存之細(xì)胞應(yīng)在生長(zhǎng)良好且存活率高之狀態(tài),約為80~90%致密度。冷凍前檢測(cè)細(xì)胞是否仍保有其性質(zhì),應(yīng)在冷凍保存前一至二日測(cè)試是否有抗體之產(chǎn)生。
2)、細(xì)胞在液氮中可長(zhǎng)期凍存無(wú),而不會(huì)影響細(xì)胞活力;在-70度可保存數(shù)月。
3)、注意冷凍保護(hù)劑之品質(zhì)。DMSO應(yīng)為試劑級(jí)等級(jí),無(wú)菌且無(wú)色(以0. 22micron FGLP Telflon過(guò)濾或是直接購(gòu)買(mǎi)無(wú)菌產(chǎn)品,如Sigma D-2650),以5~10 ml小體積分裝,4 ℃避光保存,勿作多次解凍。Glycerol亦應(yīng)為試劑級(jí)等級(jí),以高壓蒸汽滅菌后避光保存。在開(kāi)啟后一年內(nèi)使用,因長(zhǎng)期儲(chǔ)存后對(duì)細(xì)胞會(huì)有毒性。本方法中先制備雙倍凍存液,可避免DMSO直接加入時(shí)釋放的熱量對(duì)細(xì)胞的損傷。緩慢逐滴加入細(xì)胞懸液是使細(xì)胞逐步適應(yīng)高滲,可降低細(xì)胞受損。DMSO可能引起部分白血病細(xì)胞株的分化,可換用10%甘油凍存。
公司正在出售的產(chǎn)品:
大鼠多巴胺神經(jīng)元細(xì)胞 | 人富α2糖蛋白1(LRG1)檢測(cè)試劑盒 |
M14 (人黑色素瘤細(xì)胞) | 人假定蛋白LOC677168ELISA檢測(cè)試劑盒 |
MA-891 (小鼠乳腺癌高轉(zhuǎn)移細(xì)胞) | 人7α-羥化mei(CYP7A)檢測(cè)試劑盒 |
MDA-MB-435 (人乳腺癌高轉(zhuǎn)移細(xì)胞) | 人TU3A蛋白(TU3A)ELISA Kit |
MDA-MB-468 (人乳腺癌細(xì)胞) | 小腸結(jié)腸炎耶爾森菌PCR試劑盒 |
MKN-28 (人胃癌高轉(zhuǎn)移細(xì)胞) | 基孔肯尼雅病毒PCR檢測(cè)試劑盒 |
MKN-45 (人胃癌細(xì)胞) | 豬圓環(huán)病毒Ⅱ型PCR檢測(cè)試劑盒 |
MuM-2B (人侵襲性脈絡(luò)膜黑色素瘤細(xì)胞) | 凋亡抑制蛋白Livin基因PCR檢測(cè)試劑盒 |
MuM-2C (人侵襲性脈絡(luò)膜黑色素瘤細(xì)胞) | 馬勃探針?lè)?/span>PCR鑒定試劑盒 |
MV3 (人黑色素瘤細(xì)胞) | 禽呼腸孤病毒RT-PCR試劑盒 |
MX-1 (人乳腺癌細(xì)胞) | 病毒H5/H9亞型(AIV-H5/H9)核suan檢測(cè)試劑盒 (雙重?zé)晒釶CR法) |
NCI-H1975 (人肺腺癌細(xì)胞) | 馬可尼小囊蟲(chóng)PCR試劑盒 |
Y3-Ag 1.2.3 (大鼠骨髓瘤細(xì)胞) | 大鼠心臟干細(xì)胞馬鼻疽桿菌PCR檢測(cè)試劑盒 |
NCI-H661 (人大細(xì)胞肺癌細(xì)胞) | 禽副粘病毒2型RT-PCR試劑盒 |
M-NFS-60 [NFS-60] (小鼠髓性白血病淋巴細(xì)胞/小鼠白血病G-CSF依賴性細(xì)胞) | 偽狂犬病毒通用型(PRV-gB)核suan檢測(cè)試劑盒 |
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