人角膜基質細胞

2.組織來源：眼角膜組織

3.產品規(guī)格：5×105cells/T25細胞培養(yǎng)瓶

4.細胞簡介：

人角膜基質細胞分離自眼角膜組織；角膜位于眼球前壁的一層透明膜，約占纖維膜的前1/6，從后面看角膜呈正圓形，從前面看為橫橢圓形。角膜厚度各部分不盡相同，中央部薄。角膜有十分敏感的神經末梢，如有外物接觸角膜，眼瞼便會不由自主地合上以保護眼睛。為了保持透明，角膜并沒有血管，透過外界空氣、淚液及房水獲取養(yǎng)份及氧氣。角膜分為五層，由前向后依次為：上皮細胞層、前彈力層、基質層、后彈力層、內皮細胞層。角膜基質層是角膜的主要組成部分，占據(jù)角膜厚度的90%，由角膜基質細胞、膠原纖維和細胞外基質構成。角膜基質層缺損的修復主要由角膜基質細胞的增殖及分泌細胞外基質完成。角膜基質層具有結構規(guī)整，透明度高的特點，正常情況下角膜基質細胞分泌組成基質層的成分，維持角膜的透明度，此細胞對于角膜損傷的修復具有重要意義。角膜基質細胞，存在于角膜基質層中，在正常情況下，處于靜止狀態(tài)。但當角膜損傷時，不同上皮來源的因子及環(huán)境信號，將影響角膜基質細胞的應答反應，決定著角膜能否被修復。

5.方法簡介：

公司實驗室分離的人角膜基質細胞采用膠原酶消化后組織貼塊法制備而來，細胞總量約為5×10?cells/瓶。

6.質量檢測：

公司實驗室分離的人角膜基質細胞經Vimentin免疫熒光鑒定，純度可達90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細菌、酵母和真菌等。

7.培養(yǎng)信息：

培養(yǎng)基 含FBS、生長添加劑、Penicillin、Streptomycin等

換液頻率 每2-3天換液一次

生長特性 貼壁

細胞形態(tài) 成纖維細胞樣

傳代特性 可傳5代左右；3代以內狀態(tài)佳

消化液 0.25%yi蛋白酶

培養(yǎng)條件 氣相：空氣，95%；CO2，5%

細胞處理：

1）凍存細胞的復蘇：將含有1mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入到含4-6mL培養(yǎng)基的離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心3-5min，棄去上清液，培養(yǎng)基重懸細胞。然后將細胞懸液加入含6-8ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶（或皿）中37℃培養(yǎng)過夜。第二天顯微鏡下觀察細胞生長情況和細胞密度。

2）細胞傳代：如果細胞密度達70%-90%，即可進行傳代培養(yǎng)。該細胞為懸浮和輕微的貼壁細胞，傳代可以參考以下方法：

1、收集：將培養(yǎng)瓶中的懸浮的細胞收集到離心管中。用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。由于細胞貼壁不牢PBS潤洗后細胞會脫落所以PBS也要回收到離心管中。

2、加入0.25％（w / v）0.53 mM EDTA于培養(yǎng)瓶中（T25瓶1-2mL，T75瓶2-3mL）置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘（難消化的細胞可以適當延長消化時間），然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況，若細胞大部分變圓并脫落迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加入3-4ml含10%FBS的培養(yǎng)基來終止消化。

3、將收集到的懸浮細胞、pbs清洗液中的細胞和消化下來的貼壁細胞以1000rpml離心5min，棄去上清，補加1-2mL培養(yǎng)液后重懸混勻后將細胞懸液按1：2的比例分到新T25瓶中，添加6-8ml按照說明書要求配置的新的培養(yǎng)基以保持細胞的生長活力，后續(xù)傳代根據(jù)實際情況按1:2~1:5的比例進行。

3）細胞凍存:收到細胞后建議在培養(yǎng)前3代時凍存一批細胞種子以備后續(xù)實驗使用。下面T25瓶為例：

1、細胞凍存時按照細胞傳代的過程收集消化好的細胞到離心管中，可使用血球計數(shù)板計數(shù)，來決定細胞的凍存密度。一般細胞的推薦凍存密度為1×10?~1×10?個活細胞/ml.

2、1000rpm離心3-5min，去掉上清。用配制好的細胞凍存液重懸細胞 ，按每1ml凍存液含1×10?~1×10?個活細胞/ml分配到一個凍存管中將細胞分配到凍存管中，標注好名稱、代數(shù)、日期等信息。

3、將要凍存的細胞置于程序降溫盒中，-80度冰箱中過夜，之后轉入液氮容器中儲存。同時記錄好凍存管在液氮容器中的位置以便后續(xù)查閱和使用。

注意事項：

1、收到細胞后，若發(fā)現(xiàn)干冰已揮發(fā)干凈、凍存管瓶蓋脫落、破損及細胞有污染，請立即與我們聯(lián)系。

2、收到細胞先不開瓶蓋，瓶身擦拭酒精后放在培養(yǎng)箱靜置2-4小時（視細胞密度而定）穩(wěn)定細胞狀態(tài)。接著在倒置顯微鏡下觀察細胞生長情況，并對細胞進行不同倍數(shù)拍照（建議收細胞時就整體外觀拍一張照片，觀察培養(yǎng)基的顏色和是否有漏液情況，隨后在顯微鏡下拍下細胞狀態(tài)，100*，200*各一張），觀察記錄細胞在運輸過程中是否有污染情況。作為我方進行銷售依據(jù)。

3、由于細胞狀態(tài)受環(huán)境、操作和運輸?shù)榷喾矫嬉蛩赜绊?，故本公司只保證客戶收到細胞后一周內的細胞狀態(tài)，故客戶需要售后時需出示收到細胞的時間證明及客戶提供收貨時間和發(fā)現(xiàn)問題后客服人員溝通的時間證明，期間間隔時間不能大于7天。

4、所有動物細胞均視為有潛在的生物危害性，必須在二級生物安全臺內操作，并請注意防護，所有廢液及接觸過此細胞的器皿需要滅菌后方能丟棄。

操作步驟：

步驟1：從冰箱拿出無血清非程序凍存液，待用

步驟2：離心收集對數(shù)生長期的細胞（貼壁細胞消化下來離心，懸浮細胞直接離心，轉速1200rpm或250g，時間3min）

步驟3：棄上清，加入適量無血清非程序凍存液，重懸細胞

步驟4：按照1~1.5mL/管的量分裝到凍存管中，擰緊管蓋，做好標記

步驟5：將凍存管直接移入-80℃冰箱中，24h后轉移至液氮長期保存

在沒有凍存盒或者非程序凍存液時，可以選擇手動梯度降溫。但手動梯度降溫不適用于所有細胞，且效果不穩(wěn)定，同樣需要先做凍存測試。

公司正在出售的產品：

小鼠外周血淋巴細胞

PA319 (人大腸癌細胞)

PATU8988 (人胰腺癌細胞)

PC-3M (人前列腺癌細胞)

SF-295 (人XG惡性膠質瘤細胞)

SMC-1 (人胸膜瘤細胞)

SW1116 (人結腸腺癌細胞)

TE-13 (人食管癌細胞)

TG-905 (人腦膠質母細胞瘤細胞)

VE (人血管內皮細胞)

293E (人胚腎細胞(EBNA1基因修飾))

293ET (人胚腎細胞(SV40T和EBNA1基因修飾細胞))

293FT (人胚腎細胞)

2V6.11 (人胚腎細胞)

Jurkat clone A3[A3] (人T淋巴細胞白血病細胞)

人富含半蛋白61(Cyr61/CCN1)檢測試劑盒

人淋巴細胞抗原6復合物基因座A(Ly6a)檢測試劑盒

人單絲氨suan蛋白激mei1(LIMK1)試劑盒ELISA

人T淋巴細胞白血病病毒Ⅰ/II(HTLV-Ⅰ/II)抗體ELISA檢測試劑盒

耶爾森菌通用PCR試劑盒

河蟹顫抖病病毒PCR檢測試劑盒

豬圓環(huán)病毒PCR檢測試劑盒

凋亡抑制蛋白Survivin基因PCR檢測試劑盒

馬齒莧探針法PCR鑒定試劑盒

禽副粘病毒通用RT-PCR試劑盒（暫停）

病毒H5/H7亞型(AIV-H5/H7)核suan檢測試劑盒

人角膜基質細胞馬克洛菌PCR檢測試劑盒

馬鼻疽桿菌PCR試劑盒

禽副粘病毒2型PCR檢測試劑盒

豬圓環(huán)病毒通用型(PCV-U)核suan檢測試劑盒