大鼠胚胎干細(xì)胞

2.組織來源：囊胚

3.產(chǎn)品規(guī)格：5×105cells/T25細(xì)胞培養(yǎng)瓶

4.細(xì)胞簡介：

大鼠胚胎干細(xì)胞分離自囊胚胚胎組織；胚胎干細(xì)胞（Embryonic stem cell，ESCs，簡稱ES、EK或ESC細(xì)胞）是早期胚胎（原腸胚期之前）或原始性腺中分離出來的一類細(xì)胞，它具有體外培養(yǎng)無限增殖、自我更新和多向分化的特性。無論在體外還是體內(nèi)環(huán)境，ES細(xì)胞都能被誘導(dǎo)分化為機(jī)體幾乎所有的細(xì)胞類型。進(jìn)一步說，胚胎干細(xì)胞（ES細(xì)胞）是一種高度未分化細(xì)胞。它具有發(fā)育的全能性，能分化出成體動物的所有組織和器官，包括生殖細(xì)胞。ES細(xì)胞具有與早期胚胎細(xì)胞相似的形態(tài)結(jié)構(gòu)，細(xì)胞核大，有一個或幾個核仁，胞核中多為常染色質(zhì)，胞質(zhì)胞漿少，結(jié)構(gòu)簡單。體外培養(yǎng)時(shí)，細(xì)胞排列緊密，呈集落狀生長。用堿性磷酸酶染色，ES細(xì)胞呈棕紅色，而周圍的成纖維細(xì)胞呈淡黃色。細(xì)胞克隆和周圍存在明顯界限，形成的克隆細(xì)胞彼此界限不清，細(xì)胞表面有折光較強(qiáng)的脂狀小滴。細(xì)胞克隆形態(tài)多樣，多數(shù)呈島狀或巢狀。小鼠ES細(xì)胞的直徑7 微米～18 微米，豬、牛、羊ES細(xì)胞的顏色較深，直徑12 微米～18 微米。胚胎干細(xì)胞與普通細(xì)胞有顯著差別，有其特定的生長特性和特定的標(biāo)志，例如堿性磷酸酶活性非常高，帶有胚胎階段特異性表面抗原（ Stage- specific embryonic antigens,SSEA），人類胚胎干細(xì)胞還帶有高分子量的糖蛋白TRA1-60、TRA-1-81等標(biāo)志，這些特性和標(biāo)志均可以用于對胚胎干細(xì)胞進(jìn)行鑒定，除此之外，胚胎干細(xì)胞還可以在體外傳代，并保持正常核型。在體外培養(yǎng)體系中加入分化抑制劑如白血病抑制因子（ Leukaemia inhibitory factor,LF）或者在小鼠胚胎成纖維細(xì)胞飼養(yǎng)層（MEF）上培養(yǎng)時(shí)，胚胎干細(xì)胞都能呈克隆性增殖，長期保持核型正常和穩(wěn)定，凍存解凍也不影響不分化的特性。另外，胚胎干細(xì)胞還表現(xiàn)岀高水平端粒酶活性，目前證明端粒酶與細(xì)胞衰老密切相關(guān)，多數(shù)成熟細(xì)胞的端粒酶活性都很低。這些都是胚胎干細(xì)胞與成熟細(xì)胞不同的重要特點(diǎn)，也可能是其復(fù)制生命期限遠(yuǎn)比體細(xì)胞長的原因。

5.方法簡介：

公司實(shí)驗(yàn)室分離的大鼠胚胎干細(xì)胞采用分離囊胚組織，去除胚胎透明帶、使用特制專用培養(yǎng)基篩選培養(yǎng)，yi酶消化傳代純化制備而來，細(xì)胞總量約為5×105cells/瓶。

6.質(zhì)量檢測：

公司實(shí)驗(yàn)室分離的大鼠胚胎干細(xì)胞經(jīng)Oct-4免疫熒光鑒定，純度可達(dá)90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細(xì)菌、酵母和真菌等。

7.培養(yǎng)信息：

包被條件 明膠（0.1%）

培養(yǎng)基 含LIF、BMP、Penicillin、Streptomycin等

換液頻率 每2-3天換液一次；

生長特性 貼壁

細(xì)胞形態(tài) 短梭形、多角形

傳代特性 可傳5-8代左右

消化液 0.025%yi蛋白酶

培養(yǎng)條件 氣相：空氣，95%；CO2，5%

操作步驟：

步驟1：從冰箱拿出無血清非程序凍存液，待用

步驟2：離心收集對數(shù)生長期的細(xì)胞（貼壁細(xì)胞消化下來離心，懸浮細(xì)胞直接離心，轉(zhuǎn)速1200rpm或250g，時(shí)間3min）

步驟3：棄上清，加入適量無血清非程序凍存液，重懸細(xì)胞

步驟4：按照1~1.5mL/管的量分裝到凍存管中，擰緊管蓋，做好標(biāo)記

步驟5：將凍存管直接移入-80℃冰箱中，24h后轉(zhuǎn)移至液氮長期保存

在沒有凍存盒或者非程序凍存液時(shí)，可以選擇手動梯度降溫。但手動梯度降溫不適用于所有細(xì)胞，且效果不穩(wěn)定，同樣需要先做凍存測試。

注意事項(xiàng)：

1、收到細(xì)胞后，若發(fā)現(xiàn)干冰已揮發(fā)干凈、凍存管瓶蓋脫落、破損及細(xì)胞有污染，請立即與我們聯(lián)系。

2、收到細(xì)胞先不開瓶蓋，瓶身擦拭酒精后放在培養(yǎng)箱靜置2-4小時(shí)（視細(xì)胞密度而定）穩(wěn)定細(xì)胞狀態(tài)。接著在倒置顯微鏡下觀察細(xì)胞生長情況，并對細(xì)胞進(jìn)行不同倍數(shù)拍照（建議收細(xì)胞時(shí)就整體外觀拍一張照片，觀察培養(yǎng)基的顏色和是否有漏液情況，隨后在顯微鏡下拍下細(xì)胞狀態(tài)，100*，200*各一張），觀察記錄細(xì)胞在運(yùn)輸過程中是否有污染情況。作為我方進(jìn)行銷售依據(jù)。

3、由于細(xì)胞狀態(tài)受環(huán)境、操作和運(yùn)輸?shù)榷喾矫嬉蛩赜绊?，故本公司只保證客戶收到細(xì)胞后一周內(nèi)的細(xì)胞狀態(tài)，故客戶需要售后時(shí)需出示收到細(xì)胞的時(shí)間證明及客戶提供收貨時(shí)間和發(fā)現(xiàn)問題后客服人員溝通的時(shí)間證明，期間間隔時(shí)間不能大于7天。

4、所有動物細(xì)胞均視為有潛在的生物危害性，必須在二級生物安全臺內(nèi)操作，并請注意防護(hù)，所有廢液及接觸過此細(xì)胞的器皿需要滅菌后方能丟棄。

細(xì)胞處理：

1）凍存細(xì)胞的復(fù)蘇：將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入到含4-6mL培養(yǎng)基的離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心3-5min，棄去上清液，培養(yǎng)基重懸細(xì)胞。然后將細(xì)胞懸液加入含6-8ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶（或皿）中37℃培養(yǎng)過夜。第二天顯微鏡下觀察細(xì)胞生長情況和細(xì)胞密度。

2）細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá)70%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。該細(xì)胞為懸浮和輕微的貼壁細(xì)胞，傳代可以參考以下方法：

1、收集：將培養(yǎng)瓶中的懸浮的細(xì)胞收集到離心管中。用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細(xì)胞1-2次。由于細(xì)胞貼壁不牢PBS潤洗后細(xì)胞會脫落所以PBS也要回收到離心管中。

2、加入0.25％（w / v）0.53 mM EDTA于培養(yǎng)瓶中（T25瓶1-2mL，T75瓶2-3mL）置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘（難消化的細(xì)胞可以適當(dāng)延長消化時(shí)間），然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況，若細(xì)胞大部分變圓并脫落迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加入3-4ml含10%FBS的培養(yǎng)基來終止消化。

3、將收集到的懸浮細(xì)胞、pbs清洗液中的細(xì)胞和消化下來的貼壁細(xì)胞以1000rpml離心5min，棄去上清，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后重懸混勻后將細(xì)胞懸液按1：2的比例分到新T25瓶中，添加6-8ml按照說明書要求配置的新的培養(yǎng)基以保持細(xì)胞的生長活力，后續(xù)傳代根據(jù)實(shí)際情況按1:2~1:5的比例進(jìn)行。

3）細(xì)胞凍存:收到細(xì)胞后建議在培養(yǎng)前3代時(shí)凍存一批細(xì)胞種子以備后續(xù)實(shí)驗(yàn)使用。下面T25瓶為例：

1、細(xì)胞凍存時(shí)按照細(xì)胞傳代的過程收集消化好的細(xì)胞到離心管中，可使用血球計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)，來決定細(xì)胞的凍存密度。一般細(xì)胞的推薦凍存密度為1×10?~1×10?個活細(xì)胞/ml.

2、1000rpm離心3-5min，去掉上清。用配制好的細(xì)胞凍存液重懸細(xì)胞 ，按每1ml凍存液含1×10?~1×10?個活細(xì)胞/ml分配到一個凍存管中將細(xì)胞分配到凍存管中，標(biāo)注好名稱、代數(shù)、日期等信息。

3、將要凍存的細(xì)胞置于程序降溫盒中，-80度冰箱中過夜，之后轉(zhuǎn)入液氮容器中儲存。同時(shí)記錄好凍存管在液氮容器中的位置以便后續(xù)查閱和使用。

公司正在出售的產(chǎn)品：

Acc-3 (人涎腺腺樣囊性癌細(xì)胞)

小鼠肌腱干細(xì)胞

小鼠肌源性干細(xì)胞

小鼠脊髓成纖維細(xì)胞

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小鼠精原干細(xì)胞

人表皮細(xì)胞活化肽因子(CAPF)檢測試劑盒

人嗜suan性粒細(xì)胞陽離子蛋白(ECP)檢測試劑盒

人β淀粉樣多肽42(Aβ 42)試劑盒ELISA

人白介su1β (IL-1β)ELISA Kit

馬皰疹病毒2型PCR試劑盒

流行性出血熱病毒PCR檢測試劑盒

豬瘟病毒/豬藍(lán)耳病病毒通用型/高致病性豬藍(lán)耳病病毒(CSFV/PRRSV-U/PRRSV-M)核suan檢測試劑盒

禽白血病病毒PCR檢測試劑盒

綿羊夏伯特線蟲PCR試劑盒

牛腎盂腎炎棒桿菌PCR試劑盒

牛諾如病毒PCR檢測試劑盒

大鼠胚胎干細(xì)胞牡蠣皰疹病毒(OsHV)核suan檢測試劑盒

滅鮭氣單胞菌PCR檢測試劑盒

牛皰疹病毒1型PCR檢測試劑盒

甲型流感病毒H3亞型(IAV-H3)PCR檢測試劑盒(熒光-PCR法)