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更新時(shí)間:2024-07-26 16:07:59瀏覽次數(shù):238次
聯(lián)系我時(shí),請(qǐng)告知來(lái)自 環(huán)保在線規(guī)格 | 5×105Cells/T25培養(yǎng)瓶 | 組織來(lái)源 | 囊胚 |
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貨號(hào) | CS-X3408 | 細(xì)胞形態(tài) | 短梭形、多角形 |
產(chǎn)品信息:
貨號(hào) | CS-X3408 | 組織來(lái)源 | 囊胚 |
傳代特性 | 可傳5-8代左右 | 培養(yǎng)基 | 含LIF、BMP、Penicillin、Streptomycin等 |
細(xì)胞形態(tài) | 短梭形、多角形 | 生長(zhǎng)特性 | 貼壁 |
培養(yǎng)條件 | 換液頻率 | 每2-3天換液一次; |
商品介紹:
產(chǎn)品名稱:小鼠胚胎干細(xì)胞 3.產(chǎn)品規(guī)格:5×105cells/T25細(xì)胞培養(yǎng)瓶 4.細(xì)胞簡(jiǎn)介: 小鼠胚胎干細(xì)胞分離自囊胚胚胎組織;胚胎干細(xì)胞(Embryonic stem cell,ESCs,簡(jiǎn)稱ES、EK或ESC細(xì)胞)是早期胚胎(原腸胚期之前)或原始性腺中分離出來(lái)的一類細(xì)胞,它具有體外培養(yǎng)無(wú)限增殖、自我更新和多向分化的特性。無(wú)論在體外還是體內(nèi)環(huán)境,ES細(xì)胞都能被誘導(dǎo)分化為機(jī)體幾乎所有的細(xì)胞類型。進(jìn)一步說(shuō),胚胎干細(xì)胞(ES細(xì)胞)是一種高度未分化細(xì)胞。它具有發(fā)育的全能性,能分化出成體動(dòng)物的所有組織和器官,包括生殖細(xì)胞。ES細(xì)胞具有與早期胚胎細(xì)胞相似的形態(tài)結(jié)構(gòu),細(xì)胞核大,有一個(gè)或幾個(gè)核仁,胞核中多為常染色質(zhì),胞質(zhì)胞漿少,結(jié)構(gòu)簡(jiǎn)單。體外培養(yǎng)時(shí),細(xì)胞排列緊密,呈集落狀生長(zhǎng)。用堿性磷酸酶染色,ES細(xì)胞呈棕紅色,而周圍的成纖維細(xì)胞呈淡黃色。細(xì)胞克隆和周圍存在明顯界限,形成的克隆細(xì)胞彼此界限不清,細(xì)胞表面有折光較強(qiáng)的脂狀小滴。細(xì)胞克隆形態(tài)多樣,多數(shù)呈島狀或巢狀。小鼠ES細(xì)胞的直徑7 微米~18 微米,豬、牛、羊ES細(xì)胞的顏色較深,直徑12 微米~18 微米。胚胎干細(xì)胞與普通細(xì)胞有顯著差別,有其特定的生長(zhǎng)特性和特定的標(biāo)志,例如堿性磷酸酶活性非常高,帶有胚胎階段特異性表面抗原( Stage- specific embryonic antigens,SSEA),人類胚胎干細(xì)胞還帶有高分子量的糖蛋白TRA1-60、TRA-1-81等標(biāo)志,這些特性和標(biāo)志均可以用于對(duì)胚胎干細(xì)胞進(jìn)行鑒定,除此之外,胚胎干細(xì)胞還可以在體外傳代,并保持正常核型。在體外培養(yǎng)體系中加入分化抑制劑如白血病抑制因子( Leukaemia inhibitory factor,LF)或者在小鼠胚胎成纖維細(xì)胞飼養(yǎng)層(MEF)上培養(yǎng)時(shí),胚胎干細(xì)胞都能呈克隆性增殖,長(zhǎng)期保持核型正常和穩(wěn)定,凍存解凍也不影響不分化的特性。另外,胚胎干細(xì)胞還表現(xiàn)岀高水平端粒酶活性,目前證明端粒酶與細(xì)胞衰老密切相關(guān),多數(shù)成熟細(xì)胞的端粒酶活性都很低。這些都是胚胎干細(xì)胞與成熟細(xì)胞不同的重要特點(diǎn),也可能是其復(fù)制生命期限遠(yuǎn)比體細(xì)胞長(zhǎng)的原因。 5.方法簡(jiǎn)介: 公司實(shí)驗(yàn)室分離的小鼠胚胎干細(xì)胞采用分離囊胚組織,去除胚胎透明帶、使用特制專用培養(yǎng)基篩選培養(yǎng),yi酶消化傳代純化制備而來(lái),細(xì)胞總量約為5×105cells/瓶。 6.質(zhì)量檢測(cè): 公司實(shí)驗(yàn)室分離的小鼠胚胎干細(xì)胞經(jīng)Oct-4免疫熒光鑒定,純度可達(dá)90%以上,且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細(xì)菌、酵母和真菌等。 7.培養(yǎng)信息: 包被條件 明膠(0.1%) 培養(yǎng)基 含LIF、BMP、Penicillin、Streptomycin等 換液頻率 每2-3天換液一次; 生長(zhǎng)特性 貼壁 細(xì)胞形態(tài) 短梭形、多角形 傳代特性 可傳5-8代左右 消化液 0.025%yi蛋白酶 培養(yǎng)條件 氣相:空氣,95%;CO2,5% |
細(xì)胞保存方法:
(一)細(xì)胞凍存
1. 配制含10%DMSO或甘油、10~20%小牛血清的凍存培養(yǎng)液;
2. 取對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的細(xì)胞,去除舊培養(yǎng)液,用PBS清洗。
3. 去除PBS,加入適量(覆蓋培養(yǎng)皿表面)把單層生長(zhǎng)的細(xì)胞消化下來(lái);
4. 離心1000rpm,5min;
5. 去除,加入適量配制好的凍存培養(yǎng)液,用吸管輕輕吹打使細(xì)胞均勻,計(jì)數(shù),調(diào)節(jié)凍存液中細(xì)胞的最終密度為5×106/ml~1×107/ml;
6. 將細(xì)胞分裝入凍存管中,每管1~1.5 ml;
7. 在凍存管上標(biāo)明細(xì)胞的名稱,凍存時(shí)間及操作者;
8. 凍存:標(biāo)準(zhǔn)的凍存程序?yàn)榻禍厮俾?1~-2℃/ min;當(dāng)溫度達(dá)-25℃以下時(shí),可增至-5℃~-10℃/min;到-100℃時(shí),則可迅速浸入液氮中。也可將裝有細(xì)胞的凍存管放入-20℃冰箱2h ,然后放入-70℃冰箱中過(guò)夜,取出凍存管,移入液氮容器內(nèi)。
注意事項(xiàng):
1)、欲冷凍保存之細(xì)胞應(yīng)在生長(zhǎng)良好且存活率高之狀態(tài),約為80~90%致密度。冷凍前檢測(cè)細(xì)胞是否仍保有其性質(zhì),應(yīng)在冷凍保存前一至二日測(cè)試是否有抗體之產(chǎn)生。
2)、細(xì)胞在液氮中可長(zhǎng)期凍存無(wú),而不會(huì)影響細(xì)胞活力;在-70度可保存數(shù)月。
3)、注意冷凍保護(hù)劑之品質(zhì)。DMSO應(yīng)為試劑級(jí)等級(jí),無(wú)菌且無(wú)色(以0. 22micron FGLP Telflon過(guò)濾或是直接購(gòu)買無(wú)菌產(chǎn)品,如Sigma D-2650),以5~10 ml小體積分裝,4 ℃避光保存,勿作多次解凍。Glycerol亦應(yīng)為試劑級(jí)等級(jí),以高壓蒸汽滅菌后避光保存。在開(kāi)啟后一年內(nèi)使用,因長(zhǎng)期儲(chǔ)存后對(duì)細(xì)胞會(huì)有毒性。本方法中先制備雙倍凍存液,可避免DMSO直接加入時(shí)釋放的熱量對(duì)細(xì)胞的損傷。緩慢逐滴加入細(xì)胞懸液是使細(xì)胞逐步適應(yīng)高滲,可降低細(xì)胞受損。DMSO可能引起部分白血病細(xì)胞株的分化,可換用10%甘油凍存。
公司正在出售的產(chǎn)品:
A-204 [A204] (人橫紋肌肉瘤細(xì)胞) | 人補(bǔ)體1抑制物抗體-IgM(C1INH-IgM)ELISA檢測(cè)試劑盒 |
人胎盤絨毛膜細(xì)胞 | 小鼠胰島su樣生長(zhǎng)因子2(IGF-2)檢測(cè)試劑盒 |
人胎盤絨毛膜滋養(yǎng)層細(xì)胞 | 人β萘酚(β-naphthol)檢測(cè)試劑盒 |
人胎盤羊膜細(xì)胞 | 人白介su-12受體(IL-12R)檢測(cè)試劑盒 |
人退行性椎間盤髓核細(xì)胞 | 滴蟲(chóng)(毛滴蟲(chóng))通用PCR試劑盒 |
人外周血白細(xì)胞 | 陰溝腸桿菌PCR檢測(cè)試劑盒 |
人外周血單個(gè)核細(xì)胞 | 人乳鐵蛋白(hLTF)轉(zhuǎn)基因成分核suan檢測(cè)試劑盒 |
人外周血單核細(xì)胞 | 牛特定基因序列PCR檢測(cè)試劑盒 |
人外周血來(lái)源內(nèi)皮祖細(xì)胞 | 綿羊布魯氏菌PCR試劑盒 |
人外周血淋巴細(xì)胞 | 牛源性成分PCR試劑盒 |
人外周血樹(shù)突狀細(xì)胞(DC細(xì)胞) | 牛乳頭瘤病毒PCR檢測(cè)試劑盒 |
人胃癌組織成纖維細(xì)胞 | 摩氏摩根菌PCR試劑盒 |
人微血管周細(xì)胞 | 小鼠胚胎干細(xì)胞綿羊附紅細(xì)胞體PCR試劑盒 |
人胃癌組織源成纖維細(xì)胞 | 牛皮蠅蛆PCR試劑盒 |
人胃癌組織源細(xì)胞 | 病毒HN(AIV-HN)核suan檢測(cè)試劑盒 |
操作步驟:
1)、冷凍前24-48小時(shí)更換半量或全量培養(yǎng)基,使細(xì)胞處于指數(shù)生長(zhǎng)期。
2)、配制冷凍保存溶液(使用前配制):另取一離心管,加入培養(yǎng)基、血清,逐滴加入二甲基亞砜 (DMSO)至20%濃度,即制成雙倍的凍存液,置于室溫下待用。
3)、離心收集培養(yǎng)之細(xì)胞,用加血清的培養(yǎng)基重懸起細(xì)胞,取少量細(xì)胞懸浮液(約0. 1 ml)計(jì)數(shù)細(xì)胞濃度及凍前存活率。
4)、取與細(xì)胞懸液等量的凍存液,緩慢逐滴加入細(xì)胞懸液,并晃動(dòng)試管,制成細(xì)胞凍存懸液(DMSO后濃度為5~10%),使細(xì)胞濃度為1~5×106cells/ ml,混合均勻,分裝于已標(biāo)示之冷凍保存管中,1~2 ml/vial,并取少量細(xì)胞懸浮液作污染檢測(cè)。嚴(yán)密封口后,注明細(xì)胞名稱、代數(shù)、日期。然后進(jìn)行凍存。
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