人食道上皮細(xì)胞細(xì)胞培養(yǎng),就像養(yǎng)孩子,甚至比養(yǎng)孩子還難。細(xì)胞膜與癌變的關(guān)系為:1、細(xì)胞惡性轉(zhuǎn)化過程中,參與糖脂合成的糖基轉(zhuǎn)移酶活性降低,糖鏈末端合成反應(yīng)受阻,使糖鏈短缺不全,膜上復(fù)雜糖脂量(如GM3)減少,而一些簡(jiǎn)單的糖脂(如GD3)堆積。細(xì)胞膜糖鏈不能接觸延伸,黏著力下降,失去接觸抑制。
2、腫瘤細(xì)胞膜上某些糖蛋白消失,如纖連蛋白的缺失失去了原來細(xì)胞之間的黏著作用。腫瘤細(xì)胞易于脫落,浸潤(rùn)病灶周圍組織,并能通過血液、淋巴液轉(zhuǎn)移支其他部位。同時(shí)含唾液酸殘基的糖蛋白明顯增加,使機(jī)體免疫活性細(xì)胞不能識(shí)別與攻擊它,使腫瘤細(xì)胞逃避宿主的免疫監(jiān)視。
3、腫瘤能合成一些新的低分子量腫瘤特異性抗原,如肝細(xì)胞中的甲胎蛋白(AFP),消化道腫瘤細(xì)胞的癌胚抗原(CEA)。
4、離體的細(xì)胞培養(yǎng)時(shí),正常細(xì)胞生長(zhǎng)到彼此相互接觸的密度時(shí)鋪滿成層后便停止生長(zhǎng)分裂,稱為接觸抑制。癌細(xì)胞卻可無限生長(zhǎng),不斷增殖、重疊成堆,出現(xiàn)失去抑制和失去控制,造成惡性增殖。
5、腫瘤細(xì)胞在凝集素——伴刀豆球蛋白A(ConA)作用下能產(chǎn)生凝集現(xiàn)象,而正常細(xì)胞卻不發(fā)生凝集。由于腫瘤細(xì)胞在加入伴刀豆球蛋白A后,其細(xì)胞表面受體會(huì)很快移動(dòng)集中,與ConA結(jié)合,因?yàn)槠涫荏w密度高,會(huì)發(fā)生凝集現(xiàn)象。
6、腫瘤細(xì)胞的細(xì)胞膜通透性增強(qiáng),受體介導(dǎo)的胞吞作用增強(qiáng),腫瘤細(xì)胞對(duì)氨基酸的轉(zhuǎn)運(yùn)活性比正常細(xì)胞增高達(dá)10倍左右,這就保證了腫瘤細(xì)胞惡性增殖的需要。
7、腫瘤細(xì)胞膜表面出現(xiàn)微絨毛、皺褶,也常出現(xiàn)變形足或突起等。
拜力人食道上皮細(xì)胞提醒進(jìn)行細(xì)胞培養(yǎng)須注意:體外培養(yǎng)的細(xì)胞常遵循一種標(biāo)準(zhǔn)的方式生長(zhǎng)。接種后經(jīng)過一段潛伏期進(jìn)入指數(shù)生,這一期被稱作對(duì)數(shù)期。當(dāng)細(xì)胞密度達(dá)到鋪滿整個(gè)瓶底的有效基質(zhì)時(shí),或者當(dāng)細(xì)胞濃度超出培養(yǎng)基的能力時(shí),細(xì)胞生長(zhǎng)停止或生長(zhǎng)速度大大放緩。這時(shí)就需要更頻繁地更換培養(yǎng)基或者進(jìn)行分瓶培養(yǎng)。對(duì)于貼壁細(xì)胞系,分瓶培養(yǎng)也就是傳代,通常包括去除舊培養(yǎng)基,用消化單層細(xì)胞(一些貼壁能力弱的細(xì)胞,如HeLa-S3細(xì)胞可通過搖晃培養(yǎng)瓶來傳代),在培養(yǎng)基中收集細(xì)胞,以新培養(yǎng)基稀釋細(xì)胞并以適當(dāng)深度重新接種于新培養(yǎng)瓶中等步驟。
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