基本概述編輯
96孔細(xì)胞培養(yǎng) 吸液
96孔細(xì)胞培養(yǎng) 吸液
細(xì)胞的生長需要營養(yǎng)環(huán)境，用于維持細(xì)胞生長的營養(yǎng)基質(zhì)稱為培養(yǎng)基。培養(yǎng)基按其物理狀態(tài)可分為液體培養(yǎng)基和固體培養(yǎng)基。液體培養(yǎng)基用于大規(guī)模的工業(yè)生產(chǎn)以及生理代謝等基本理論的研究工作。液體培養(yǎng)基中加入一定的凝固劑（如瓊脂）或固體培養(yǎng)物（如麩皮、大米等）便成為固體培養(yǎng)基。固體培養(yǎng)基為細(xì)胞的生長提供了一個(gè)營養(yǎng)及通氣的表面，在這樣一個(gè)營養(yǎng)表面上生產(chǎn)的細(xì)胞可形成單個(gè)菌落。因此，固體培養(yǎng)基在細(xì)胞的分離、鑒定、計(jì)數(shù)等方面起著相當(dāng)重要的作用。從多細(xì)胞生物中分離所需要細(xì)胞和擴(kuò)增獲得的細(xì)胞以及對(duì)細(xì)胞進(jìn)行體外改造，觀察，必須解決細(xì)胞離體培養(yǎng)問題，同微生物細(xì)胞培養(yǎng)的難易相比，比較困難的是來自多細(xì)胞生物的單細(xì)胞培養(yǎng)，特別是動(dòng)物細(xì)胞的培養(yǎng)。細(xì)胞培養(yǎng)泛指所有體外培養(yǎng)，其含義是指從動(dòng)物活體體內(nèi)取出組織，于模擬體內(nèi)生理環(huán)境等特定的體內(nèi)條件下，進(jìn)行孵育培養(yǎng)，使之生存并生長。細(xì)胞培養(yǎng)工作現(xiàn)已廣泛應(yīng)用于生物學(xué)、醫(yī)學(xué)、新藥研發(fā)等各個(gè)領(lǐng)域，成為重要的基礎(chǔ)科學(xué)之一。 [1] 
設(shè)施器材編輯
設(shè)施：超凈臺(tái)、恒溫培養(yǎng)箱、倒置顯微鏡、液氮儲(chǔ)存罐、電熱鼓風(fēng)干燥箱、冰柜、電子天平、恒溫水浴槽、離心機(jī)、壓力蒸汽消毒器。
器材：
一、玻璃器材
無菌室
無菌室
培養(yǎng)皿、滴流瓶、刻度吸管、離心管、培養(yǎng)瓶、燒杯、量筒、三角燒瓶
二、塑料器材
多孔培養(yǎng)板、培養(yǎng)皿、培養(yǎng)瓶
三、橡皮器材
橡皮制品（好是硅制品）做各種瓶或試管的塞子、蓋子。
四、金屬器材
剪刀、鑷子、手術(shù)刀、解剖刀、血管鉗、組織鑷、眼科鑷及各種型號(hào)針頭
五、其他物品
紗布、注射器和針頭
培養(yǎng)基編輯
幾種常用細(xì)胞培養(yǎng)基產(chǎn)品
⒈ BME（basal medium eagle）基礎(chǔ)伊格培養(yǎng)基
⒉ MEM
⒊ DMEM
⒋ IMDM
⒌ RPMI-1640
⒍ M199
⒎ Mccoy's 5A
⒏ F10 F12 DMEM混合F12（三）幾種常用細(xì)胞培養(yǎng)配套試劑的配置（緩沖液、平衡鹽溶液等）
1、無鈣、鎂、離子溶液（1000ml)
化鈉（NaCl)8g磷酸二氫鈉、（NaH2PO4H20）0.05g、化鉀（KCl)0.2g、碳酸氫鈉（NaHCO3）1g、檸檬酸三鈉(Na3C6H5O7,H20）1g、葡萄糖1g、加去離子水或雙蒸水至1000mL
2、PBS（Phosphate-Buffered saline）磷酸鹽緩沖液
甲液：0.2mol/L磷酸氫二鈉溶液、磷酸氫二鈉（無水）28.4g、化鈉8.77g加去離子水或雙蒸水至1000mL
乙液：0.2mol/L磷酸二氫鈉溶液、磷酸二氫鈉（無水）2.4g、化鈉8.77g加去離子水或雙蒸水至1000mL
甲、乙液于4℃保存，使用時(shí)按表3-2所示比例，配制成所需pH濃度，高壓滅菌后室溫保存。
3、Hanks液（HBSSHank‘s Balanced salt solution)
⑴母液甲（20x）配法
①NaCl(A.R)160g、KCl(A.R)8g、MgSO4.7H2O（A.R)2g、MgCl.6H2O(A.R)2g依次溶于800mL雙蒸水中，前一物質(zhì)溶后再加后一種。
②CaCl2(A.R)2.8g溶于100mL雙蒸水中，溶時(shí)不斷攪拌（此液應(yīng)單配，單溶）。
待上述兩溶液中的“溶質(zhì)”全溶后，將它們混合，再用雙蒸水補(bǔ)至1000mL，向其中加2mL仿作為防腐劑，置4℃保存。
⑵母液乙（20×）配法
①Na2HPO4.12H2O(A.R)3.04g、KH2PO4(A.R)1.20g、葡萄糖（A.R)20.0g溶于800ml雙蒸水中。
②0.4%酚紅液0.4g酚紅放在玻璃研缽后加0.01N、NaOH11.28mL，直到全部溶解，移入100mL容量瓶中，加水至100mL，過濾，pH為7.4，4℃保存。
待上述各“溶質(zhì)”*溶解后，用雙蒸水補(bǔ)至1000mL,其中加仿2mL作防腐劑，置40℃保存。
3）使用液（1×）配法
取母液甲和母液乙各一份，加雙蒸水18份，分裝后，塞好瓶塞，掛上標(biāo)志。以115℃高壓滅菌25分鐘（以免葡萄糖破壞），置室溫后4℃保存，可使用幾個(gè)月。臨用前，用7.5%NaHCO3調(diào)至所需pH。
4、Eagle's液（EBSSEagle's Balanced salt solution)
是一種在二氧化碳（CO2）環(huán)境中短期維持細(xì)胞活性的平衡鹽溶液，可用于細(xì)胞解離前的清洗、細(xì)胞或組織的運(yùn)輸、細(xì)胞計(jì)數(shù)時(shí)稀釋、溶液的配置等。
5、HEPES液
生物緩沖液，化學(xué)性質(zhì)穩(wěn)定，在PH7.2~7.6范圍內(nèi)，比NaHCO3緩沖液的緩沖能力更強(qiáng)。
6、NaHCO3緩沖液
常規(guī)緩沖體系的一部分，但是不穩(wěn)定，易受空氣中CO2的含量而改變PH值，影響緩沖效果。
具體步驟編輯
一、復(fù)蘇 [1] 
1.把凍存管從液氮中取出來，立即投入37℃水浴鍋中，輕微搖動(dòng)（注意防止蓋子不緊致使液體進(jìn)入凍存管）。液體都融化后(大概1-1.5分鐘)，拿出來噴點(diǎn)酒精放到超凈工作臺(tái)里。
2.把上述細(xì)胞懸液吸到裝10ml培養(yǎng)基的15ml的離心管中(用培養(yǎng)基把凍存管洗一遍，把粘在壁上的細(xì)胞都洗下來)，1000轉(zhuǎn)離心5分鐘。
3.把上清液倒掉，加1ml培養(yǎng)基把細(xì)胞懸浮起來。吸到裝有10ml培養(yǎng)基的10cm培養(yǎng)皿中前后左右輕輕搖動(dòng)，使培養(yǎng)皿中的細(xì)胞均勻分布。
4.標(biāo)好細(xì)胞種類和日期、培養(yǎng)人名字等，放到37℃的5%CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，細(xì)胞貼壁后換培養(yǎng)基。
5.根據(jù)細(xì)胞增長速度2-3天換一次培養(yǎng)基。
二、傳代
1.培養(yǎng)皿中的細(xì)胞覆蓋率達(dá)到80%-90%時(shí)要傳代。
2.把原有培養(yǎng)基吸掉。
3.加適當(dāng)?shù)囊鹊鞍酌?能覆蓋細(xì)胞就行)，消化1-2分鐘。
4.細(xì)胞都變圓后加入等體積的含血清的培養(yǎng)基終止消化。
5.用移液槍吹打細(xì)胞，讓細(xì)胞懸浮起來。
6.把細(xì)胞吸到10ml或15ml的離心管中，1000轉(zhuǎn)離心5分鐘。
7.倒掉上清液，加1-2ml培養(yǎng)基，把細(xì)胞都吹起來。
8.根據(jù)細(xì)胞種類把細(xì)胞傳到幾個(gè)培養(yǎng)皿中。一般，癌細(xì)胞分5個(gè)，正常細(xì)胞傳3個(gè)。繼續(xù)培養(yǎng)。
三、凍存
把細(xì)胞消化下來并離心(同上)。用配好的凍存液把細(xì)胞懸浮起來，分裝到滅菌的凍存管中，靜止幾分鐘，寫明細(xì)胞種類，凍存日期。4℃30min，-20℃30min，-80℃過夜，然后放到液氮灌中保存。
凍存液的配制：70%的*培養(yǎng)基+20%FBS+10%DMSO.DMSO要慢慢滴加，邊滴邊搖。
一般過程編輯
一、準(zhǔn)備工作
準(zhǔn)備工作對(duì)開展細(xì)胞培養(yǎng)異常重要，工作量也較大，應(yīng)給予足夠的重視，準(zhǔn)備工作中某一環(huán)節(jié)的疏忽可導(dǎo)致實(shí)驗(yàn)失敗或無法進(jìn)行。準(zhǔn)備工作的內(nèi)容包括器皿的清洗、干燥與消毒，培養(yǎng)基與其他試劑的配制、分裝及滅菌，無菌室或超凈臺(tái)的清潔與消毒，培養(yǎng)箱及其他儀器的檢查與調(diào)試，具體內(nèi)容可參閱有關(guān)文獻(xiàn)。
二、取材
在無菌環(huán)境下從機(jī)體取出某種組織細(xì)胞（視實(shí)驗(yàn)?zāi)康亩ǎ?jīng)過一定的處理（如消化分散細(xì)胞、分離等）后接入培養(yǎng)器皿中，這一過程稱為取材。如是細(xì)胞株的擴(kuò)大培養(yǎng)則無取材這一過程。機(jī)體取出的組織細(xì)胞的*培養(yǎng)稱為原代培養(yǎng)。理論上講各種動(dòng)物和人體內(nèi)的所有組織都可以用于培養(yǎng)，實(shí)際上幼體組織（尤其是胚胎組織）比成年個(gè)體的組織容易培養(yǎng)，分化程度低的組織比分化高的容易培養(yǎng)，腫瘤組織比正常組織容易培養(yǎng)。取材后應(yīng)立即處理，盡快培養(yǎng)，因故不能馬上培養(yǎng)時(shí)，可將組織塊切成黃豆般大的小塊，置4℃的培養(yǎng)液中保存。取組織時(shí)應(yīng)嚴(yán)格保持無菌，同時(shí)也要避免接觸其他的有害物質(zhì)。取病理組織和皮膚及消化道上皮細(xì)胞時(shí)容易帶菌，為減少污染可用抗菌素處理。由組織并分離分散細(xì)胞的方法可參閱有關(guān)文獻(xiàn)。
三、培養(yǎng)
將取得的組織細(xì)胞接入培養(yǎng)瓶或培養(yǎng)板中的過程稱為培養(yǎng)。如系組織塊培養(yǎng)，則直接將組織塊接入培養(yǎng)器皿底部，幾個(gè)小時(shí)后組織塊可貼牢在底部，再加入培養(yǎng)基。如系細(xì)胞培養(yǎng)，一般應(yīng)在接入培養(yǎng)器皿之前進(jìn)行細(xì)胞計(jì)數(shù)，按要求以一定的量（以每毫升細(xì)胞數(shù)表示）接入培養(yǎng)器皿并直接加入培養(yǎng)基。細(xì)胞進(jìn)入培養(yǎng)器皿后，立即放入培養(yǎng)箱中，使細(xì)胞盡早進(jìn)入生長狀態(tài)。正在培養(yǎng)中的細(xì)胞應(yīng)每隔一定時(shí)間觀察一次，觀察的內(nèi)容包括細(xì)胞是否生長良好，形態(tài)是否正常，有無污染，培養(yǎng)基的PH是否太酸或太堿（由酚紅指示劑指示），此外對(duì)培養(yǎng)溫度和CO2濃度也要定時(shí)檢查。一般原代培養(yǎng)進(jìn)入培養(yǎng)后有一段潛伏期（數(shù)小時(shí)到數(shù)十天不等），在潛伏期細(xì)胞一般不分裂，但可貼壁和游走。過了潛伏期后細(xì)胞進(jìn)入旺盛的分裂生。細(xì)胞長滿瓶底后要進(jìn)行傳代培養(yǎng)，將一瓶中的細(xì)胞消化懸浮后分至兩到三瓶繼續(xù)培養(yǎng)。每傳代一次稱為“一代”。二倍體細(xì)胞一般只能傳幾十代，而轉(zhuǎn)化細(xì)胞系或細(xì)胞株則可無限地傳代下去。轉(zhuǎn)化細(xì)胞可能具有惡性性質(zhì)，也可能僅有不死性（Immortality）而無惡性。培養(yǎng)正在生長中的細(xì)胞是進(jìn)行各種生物醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)的良好材料。
四、凍存及復(fù)蘇
為了保存細(xì)胞，特別是不易獲得的突變型細(xì)胞或細(xì)胞株，要將細(xì)胞凍存。凍存的溫度一般用液氮的溫度—－196℃，將細(xì)胞收集至凍存管中加入含保護(hù)劑（一般為二甲亞砜或甘油）的培養(yǎng)基，以一定的冷卻速度凍存，終保存于液氮中。在極低的溫度下，細(xì)胞保存的時(shí)間幾乎是無限的。復(fù)蘇一般采用快融方法，即從液氮中取出凍存管后，立即放入37℃水中，使之在一分鐘內(nèi)迅速融解。然后將細(xì)胞轉(zhuǎn)入培養(yǎng)器皿中進(jìn)行培養(yǎng)。凍存過程中保護(hù)劑的選用、細(xì)胞密度、降溫速度及復(fù)蘇時(shí)溫度、融化速度等都對(duì)細(xì)胞活力有影響。 [2] 
一般條件編輯
簡言之，即細(xì)胞需要什么就提供什么，道理是如此，真正能做到這點(diǎn)尚需時(shí)日，人們至今對(duì)細(xì)胞的生命周期控制機(jī)理認(rèn)識(shí)不足，癌細(xì)胞雖然也來自正常細(xì)胞，但至今不知道究竟為什么癌細(xì)胞很難停止已經(jīng)啟動(dòng)的有害分裂，盡管如此，人們的研究結(jié)果表明，離體細(xì)胞培養(yǎng)需要的基本條件就是下列細(xì)胞生理?xiàng)l件。
⑴溫度
溫度過低時(shí)細(xì)胞生長緩慢甚至不生長。利用冷凍保藏細(xì)胞可保持細(xì)胞的原有分裂分化能力。溫度過高導(dǎo)致細(xì)胞死亡。這主要是由酶和蛋白質(zhì)所需要的適溫度決定的。多數(shù)生物大分子遇到高溫后容易導(dǎo)致空間結(jié)構(gòu)改變或者喪失（變性）。細(xì)胞膜遇到高溫后容易態(tài)。在自然界，既有耐高溫的
恒溫培養(yǎng)箱
恒溫培養(yǎng)箱
細(xì)胞，也有耐低溫的細(xì)胞。在情況下生長的生物對(duì)付環(huán)境的機(jī)制研究在生物進(jìn)化和農(nóng)業(yè)、環(huán)保、發(fā)酵工業(yè)中意義重大。
⑵pH
過酸或過堿可導(dǎo)致細(xì)胞死亡。這主要與蛋白質(zhì)的變性和細(xì)胞膜的結(jié)構(gòu)受損有關(guān)。
⑶滲透壓
細(xì)胞內(nèi)外可溶于水的物質(zhì)比例和種類決定細(xì)胞的膨脹與收縮程度，因?yàn)榧?xì)胞膜是半透膜，只允許對(duì)自己有利的物質(zhì)通過。同一物質(zhì)在細(xì)胞內(nèi)外的分布的數(shù)量不同，當(dāng)某一種極溶于水的物質(zhì)在細(xì)胞外濃度過大時(shí)，有可能導(dǎo)致細(xì)胞干癟死亡，這些物質(zhì)在細(xì)胞內(nèi)過多時(shí)導(dǎo)致細(xì)胞過量吸水膨脹。細(xì)胞膜調(diào)節(jié)滲透壓的能力是有限的。
⑷營養(yǎng)物
營養(yǎng)物和水一起，又叫細(xì)胞培養(yǎng)液，培養(yǎng)液中含有細(xì)胞增殖和生長所需要的各種物質(zhì)。營養(yǎng)物包括：N 源、C源，這些物質(zhì)與提供能量有關(guān)；無機(jī)鹽、維生素、激素，這些物質(zhì)與代謝調(diào)節(jié)控制有關(guān)。細(xì)胞培養(yǎng)液的設(shè)計(jì)一直是細(xì)胞離體培養(yǎng)技術(shù)的關(guān)鍵。理想的細(xì)胞培養(yǎng)液可以同時(shí)解決細(xì)胞離體培養(yǎng)所需要的pH、滲透壓、營養(yǎng)物、調(diào)節(jié)物質(zhì)的全部需要。在干細(xì)胞分化研究與應(yīng)用中，關(guān)鍵是找到一種使干細(xì)胞分化成為所需細(xì)胞和組織的營養(yǎng)液。相同的人干細(xì)胞，放在不同的營養(yǎng)液中分化培養(yǎng)出人的各種臟器，這個(gè)昔日的夢(mèng)想已經(jīng)開始成為現(xiàn)實(shí)。植物細(xì)胞的組織培養(yǎng)技術(shù)已經(jīng)基本完善配套。名貴花卉、中草藥、脫毒馬鈴薯、組織培養(yǎng)蓮菜苗等植物細(xì)胞與組織培養(yǎng)技術(shù)的不斷完善，特別是由于組織培養(yǎng)液的商品化已經(jīng)被廣大農(nóng)民普遍接受。
⑸水
水是細(xì)胞需要數(shù)量大的物質(zhì)，不同的物種、不同部位、不同生的細(xì)胞含水量差別相當(dāng)大。干旱植物細(xì)胞的含水量高達(dá)90%。水的需求量一般隨同細(xì)胞培養(yǎng)液一起考慮。
⑹無菌條件
體外細(xì)胞培養(yǎng)僅僅是對(duì)所需的細(xì)胞進(jìn)行培養(yǎng)，但環(huán)境中（如空氣）有各種其他微生物，必須對(duì)所需細(xì)胞進(jìn)行無雜菌的隔離培養(yǎng)。無菌條件是細(xì)胞離體培養(yǎng)基本的條件。
⑺光
植物細(xì)胞和少數(shù)細(xì)菌需要利用光進(jìn)行光合作用。
⑻氣體
動(dòng)物細(xì)胞需要不斷供給氧氣和排除二氧化碳，植物細(xì)胞與此相反。
二氧化碳的作用：調(diào)節(jié)pH，有緩沖作用，沒有刺激動(dòng)物細(xì)胞呼吸的功能 [2] 
培養(yǎng)條件編輯
動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)
在所有的細(xì)胞離體培養(yǎng)中，困難的是動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)。下面是它所需要的特殊條件。
⑴血清：動(dòng)物細(xì)胞離體培養(yǎng)常常需要血清。常用的是小牛血清。血清提供生長必需因子，如激素、微量元素、礦物質(zhì)和脂肪。有一天人們真正學(xué)會(huì)了配制和血清一樣的培養(yǎng)液，那時(shí)血清才可被取代。在這里，血清等于是動(dòng)物細(xì)胞離體培養(yǎng)的天然營養(yǎng)液。
⑵支持物：大多數(shù)動(dòng)物細(xì)胞有貼壁生長的習(xí)慣。離體培養(yǎng)常用玻璃，
高速冷凍離心機(jī)
高速冷凍離心機(jī)
塑料等作為支持物。
⑶氣體交換：二氧化碳和氧氣的比例要在細(xì)胞培養(yǎng)過程中不斷進(jìn)行調(diào)節(jié)，不斷維持所需要的氣體條件，每一次開箱操作后的快速恢復(fù)對(duì)設(shè)備的要求可想而知有多難？由此決定了動(dòng)物細(xì)胞離體培養(yǎng)設(shè)備要求高、投資大。
植物細(xì)胞培養(yǎng)
⑴光照：離體培養(yǎng)的植物細(xì)胞對(duì)光照條件不甚嚴(yán)格，因?yàn)榧?xì)胞生長所需要的物質(zhì)主要是靠培養(yǎng)基供給的。但光照不但與光合作用有關(guān)，而且與細(xì)胞分化有關(guān)，例如光周期可對(duì)性細(xì)胞分化和開花調(diào)控作用，所以以獲得植株為目的的早期植物細(xì)胞培養(yǎng)過程中，光照條件特別重要。以植物細(xì)胞離體培養(yǎng)方式獲得重要物質(zhì)，如藥物的過程，植物細(xì)胞大多是在反應(yīng)器中懸浮培養(yǎng)。
⑵激素：植物細(xì)胞的分裂和生長特別需要植物激素的調(diào)節(jié)，促進(jìn)生長的生長素和促進(jìn)細(xì)胞分裂的分裂素是基本的激素。植物細(xì)胞的分裂，生長，分化和個(gè)體生長周期都有相應(yīng)的激素參與調(diào)節(jié)。和動(dòng)物細(xì)胞相比，植物細(xì)胞離體培養(yǎng)對(duì)激素要求的原理已經(jīng)了解，其應(yīng)用技術(shù)也已相當(dāng)成熟，已經(jīng)有一套廣泛作為商品使用的培養(yǎng)液。同時(shí)解決了植物細(xì)胞對(duì)水、營養(yǎng)物、激素、滲透壓、酸堿度、微量元素等的需求。
微生物細(xì)胞培養(yǎng)
微生物多為單細(xì)胞生物，野生生存條件比較簡單。所以微生物人工培養(yǎng)的條件比動(dòng)植物細(xì)胞簡單得多。其中厭氧微生物培養(yǎng)比好氧微生物復(fù)雜，因?yàn)閲?yán)格厭氧需要維持二氧化碳等非氧的惰性氣體濃度，而好氧微生物則只需要通過不斷攪拌提供無菌氧氣。微生物對(duì)培養(yǎng)條件要求不如動(dòng)植物細(xì)胞那樣苛刻，玉米漿、蛋白胨、麥芽汁、酵母膏等成為良好的微生物天然培養(yǎng)基。對(duì)于一些特殊微生物的營養(yǎng)條件要求，可以在這些天然培養(yǎng)基的基礎(chǔ)上額外添加。
注意事項(xiàng)編輯
1、實(shí)驗(yàn)進(jìn)行前，無菌室及無菌操作臺(tái)（laminarflow）以紫外燈照射30-60分鐘滅菌，以70%乙醇擦拭無菌操作臺(tái)面，并開啟無菌操作臺(tái)風(fēng)扇運(yùn)轉(zhuǎn)10分鐘后，才開始實(shí)驗(yàn)操作。每次操作只處理一株細(xì)胞株，且即使培養(yǎng)基相同亦不共享培養(yǎng)基，以避免失誤混淆或細(xì)胞間污染。實(shí)驗(yàn)完畢后，將實(shí)驗(yàn)物品帶出工作臺(tái)，以70%ethanol擦拭無菌操作臺(tái)面。操作間隔應(yīng)讓無菌操作臺(tái)運(yùn)轉(zhuǎn)10分鐘以上后，再進(jìn)行下一個(gè)細(xì)胞株的操作。
2、無菌操作工作區(qū)域應(yīng)保持清潔及寬敞，必要物品，例如試管架、吸管吸取器或吸管盒等可以暫時(shí)放置，其它實(shí)驗(yàn)用品用完即應(yīng)移出，以利于氣流之流通。實(shí)驗(yàn)用品以70%ethanol擦拭后才帶入無菌操作臺(tái)內(nèi)。實(shí)驗(yàn)操作應(yīng)在臺(tái)面之中央無菌區(qū)域，勿在邊緣之非無菌區(qū)域操作。
3、小心取用無菌之實(shí)驗(yàn)物品，避免造成污染。勿碰觸吸管尖頭部或是容器瓶口，亦不要在打開的容器正上方操作實(shí)驗(yàn)。容器打開后，以手夾住瓶蓋并握住瓶身，傾斜約45°角取用，盡量勿將瓶蓋蓋口朝上放置桌面。
4、工作人員應(yīng)注意自身之安全，須穿戴實(shí)驗(yàn)衣及手套后才進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。對(duì)于來自人類或是病毒感染之細(xì)胞株應(yīng)特別小心操作，并選擇適當(dāng)?shù)燃?jí)之無菌操作臺(tái)（至少ClassⅡ）。操作過程中，應(yīng)避免引起aerosol之產(chǎn)生，小心毒性藥品，例如DMSO及TPA等，并避免尖銳針頭之傷害等。
5、定期檢測下列項(xiàng)目：5.1CO2鋼瓶之CO2壓力5.2CO2培養(yǎng)箱之CO2濃度、溫度、及水盤是否有污染（水盤的水用無菌水，每周更換）。5.3.無菌操作臺(tái)內(nèi)之a(chǎn)irflow壓力，定期更換紫外線燈管及HEPA過濾膜，預(yù)濾網(wǎng)（300小時(shí)/預(yù)濾網(wǎng)，3000小時(shí)/HEPA）。6.水槽可添加消毒劑(Zephrin1:750），定期更換水槽的水
6、粉末培養(yǎng)基配制好后（加了血清），一般在4度盡量不要超過1個(gè)月，如在-20度存放時(shí)間可長一些，但好也不要超過3-4個(gè)月，可能對(duì)于永生化細(xì)胞株來說要求不是太高，細(xì)胞嬌弱，放置時(shí)間不宜過長。
7、開紫外線照射臺(tái)的時(shí)候，就將培養(yǎng)基、酶、DHANKS液那到室外讓它自然升溫。這樣40分鐘后，溫度也升上來了。有很多人將其放到37度水浴鍋里加熱。一定要注意水浴鍋的衛(wèi)生，有的常年不清洗，里面很臟，容易在外面瓶身上吸附大量細(xì)菌。因此用時(shí)也一定要勤換水。從水浴鍋拿出后，好找個(gè)毛巾擦干上面的水。
意義編輯
⒈可以進(jìn)行植物體外受精及 植物胚胎發(fā)育過程研究。
⒉可以進(jìn)行植物生長發(fā)育有關(guān)的重要基因或影響因素的研究。
⒊可以方便地通過實(shí)驗(yàn)手段培育植物新品種。
方式編輯
群體培養(yǎng)
大量細(xì)胞置于同一培養(yǎng)瓶中進(jìn)行貼壁或懸浮培養(yǎng)。
克隆培養(yǎng)
挑選單個(gè)細(xì)胞或單一集落（克隆）于體外進(jìn)行培養(yǎng)。常用于細(xì)胞克隆化（純化），建立細(xì)胞株，傳代。
優(yōu)點(diǎn)編輯
1、能傳代，保持活性，便于監(jiān)控檢測結(jié)構(gòu)功能和生命活動(dòng)。
2、培養(yǎng)條件可以人為的控制便于研究細(xì)胞代謝、物理、化學(xué)、生物因素的影響
3、可用于各種觀察和檢測手段研究活細(xì)胞的變化（變異、分化）?？蓮募?xì)胞水平開展亞細(xì)胞結(jié)構(gòu)和代謝分子的表達(dá)。
4、研究范圍和細(xì)胞來源廣泛，選擇性廣。
5、不同代次細(xì)胞可保存，既可開展同代次不同條件和方法研究，又可觀察不同代次的動(dòng)態(tài)變化。
6、耗資少、經(jīng)濟(jì)、成本低、可大量培養(yǎng)，利于生物制品的生產(chǎn)。
不足編輯
細(xì)胞或組織生長在人工環(huán)境中，與體內(nèi)環(huán)境存在差異，細(xì)胞或組織的形態(tài)或功能會(huì)發(fā)生不同程度的改變。