基本概述編輯
慢病毒瘤內注射服務慢病毒屬是反轉錄病毒科下的一個屬，包括8種能夠感染人和脊椎動物的病毒，原發(fā)感染的細胞以淋巴細胞和巨噬細胞為主，感染個體終發(fā)病。慢病毒感染的顯著特點是感染個體在出現(xiàn)典型的臨床癥狀之前，大多經(jīng)歷長達數(shù)年的潛伏期，之后緩慢發(fā)病，因此這些病原體被稱為慢病毒。例如人類免疫缺陷病毒(HIV)、猴免疫缺陷病毒(SIV)、馬傳染性貧血(EIA)、貓免疫缺陷病毒(FIV)都是慢病毒屬，慢病毒屬的原文是Lentivirus，其中Lenti-在拉丁文中有慢的意思。
慢病毒載體的研究發(fā)展得很快，研究的也非常深入。該載體可以將外源基因有效地整合到宿主染色體上，從而達到持久性表達。在感染能力方面可有效地感染神經(jīng)元細胞、肝細胞、心肌細胞、腫瘤細胞、內皮細胞、干細胞等多種類型的細胞，從而達到良好的的基因治療效果，在美國已經(jīng)開展了臨床研究，效果非常理想，因此具有廣闊的應用前景。 [1] 
應用編輯慢病毒瘤內注射服務
慢病毒也被廣泛地應用于表達RNAi的研究中。由于有些類型細胞脂質體轉染效果差，轉移到細胞內的siRNA半衰期短，體外合成siRNA對基因表達的抑制作用通常是短暫的，因而使其應用受到較大的限制。采用事先在體外構建能夠表達siRNA的載體，然后轉移到細胞內轉錄siRNA的策略，不但使脂質體有效轉染的細胞種類增加，而且對基因表達抑制效果也不遜色于體外合成siRNA，在穩(wěn)定表達載體的細胞中，甚至可以發(fā)揮阻斷基因表達的作用。在所構建的siRNA中，是由RNA聚合酶Ⅲ啟動子來指導RNA合成的，這是因為RNA聚合酶Ⅲ有明確的起始和終止序列，而且合成的RNA不會帶poly A尾。當RNA聚合酶Ⅲ遇到連續(xù)4個或5個T時，它指導的轉錄就會停止，在轉錄產物3’端形成1~4個U。U6和H1 RNA啟動子是兩種RNA聚合酶Ⅲ依賴的啟動子，其特點是啟動子自身元素均位于轉錄區(qū)的上游，適合于表達～21ntRNA和～50ntRNA莖環(huán)結構（stem loop）。在siRNA表達載體中，構成siRNA的正義與反義鏈，可由各自的啟動子分別轉錄，然后兩條鏈互補結合形成siRNA；也可由載體直接表達小發(fā)卡狀RNA(small hairpin RNA,shRNA），載體包含位于RNA聚合酶Ⅲ啟動子和4～5T轉錄終止位點之間的莖環(huán)結構序列，轉錄后即可折疊成具有1~4 個U 3 ’ 突出端的莖環(huán)結構，在細胞內進一步加工成siRNA。構建載體前通常要通過合成siRNA的方法，尋找高效的siRNA，然后從中挑選符合載體要求的序列，將其引入siRNA表達載體。 [2] 
載體
慢病毒載體（Lentiviral vector）較逆轉錄病毒載體有更廣的宿主范圍，慢病毒能夠有效感染非周期性和有絲分裂后的細胞。慢病毒載體能夠產生表達shRNA的高滴度的慢病毒，在周期性和非周期性細胞、干細胞、受精卵以及分化的后代細胞中表達shRNA，實現(xiàn)在多種類型的細胞和轉基因小鼠中特異而穩(wěn)定的基因表達的功能性沉默，為在原代的人和動物細胞組織中快速而高效地研究基因功能，以及產生特定基因表達降低的動物提供了可能性。慢病毒作為siRNA的攜帶者，不但具備特異性地使基因表達沉默的能力，而且充分發(fā)揮了慢病毒載體自身所具備的優(yōu)勢，為基因功能的研究提供了更強有力的工具。慢病毒載體可以將外源基因或外源的shRNA有效地整合到宿主染色體上，從而達到持久性表達目的序列的效果。對于一些較難轉染的細胞， 如原代細胞、干細胞、不分化的細胞等，使用慢病毒載體，能大大提高目的基因或目的shRNA的轉導效率，且目的基因或目的shRNA整合到宿主細胞基因組的幾率大大增加，能夠比較方便快捷地實現(xiàn)目的基因或目的shRNA的、穩(wěn)定表達。 [3] 
表達載體
慢病毒表達載體，即通常所說的穿梭載體，包含了包裝、轉染、穩(wěn)定整合所需要的遺傳信息。慢病毒包裝質粒可提供所有的轉錄并包裝RNA 到重組的假病毒載體所需要的所有輔助蛋白。為產生高滴度的病毒顆粒，需要利用表達載體和包裝質粒同時共轉染細胞，在細胞中進行病毒的包裝，包裝好的假病毒顆粒分泌到細胞外的培養(yǎng)基中，離心取得上清液后，可以直接用于宿主細胞的感染，目的基因進入到宿主細胞之后，經(jīng)過反轉錄，整合到基因組，從而高水平的表達效應分子。
特征比較編輯
常用的病毒載體有腺病毒、逆轉錄病毒和慢病毒。逆轉錄病毒載體只能感染分裂期細胞，而且容量有限，腺病毒一般不能整合到染色體上，只能進行瞬時感染。與其它逆轉錄病毒相比，慢病毒（LV）具有可以感染非分裂期細胞、容納外源性基因片段大，可以表達等顯著優(yōu)點。慢病毒不產生任何有效的細胞免疫應答，可作為一種體外基因運輸?shù)墓ぞ摺Ｂ《据d體介導的轉基因表達能持續(xù)數(shù)月，且無可觀察到的病理學現(xiàn)象。 [4] 
慢病毒包裝系統(tǒng)一般由慢病毒表達載體和慢病毒包裝載體組成。
而慢病毒包裝質粒可提供所有的轉錄并包裝RNA到重組的假病毒載體所需要的所有輔助蛋白。為產生高滴度的病毒顆粒，需要利用表達載體和包裝質粒同時共轉染細胞，在細胞中進行病毒的包裝， 包裝好的假病毒顆粒分泌到細胞外的培養(yǎng)基中，離心取得上清液后，可以直接用于宿主細胞的感染。
慢病毒包裝系統(tǒng)一般都是三質粒或四質粒包裝系統(tǒng)。其中四質粒系統(tǒng)比三質粒系統(tǒng)在生物安全性上更好一些，所以應用較多。 [3]