豬瘟病毒抗體ELISA試劑盒子科生物研發(fā)生產(chǎn),深圳子科生物ELISA試劑盒優(yōu)質(zhì)供應(yīng)商,擁有10年的研發(fā)和生產(chǎn)經(jīng)驗,擁有*的儀器設(shè)備,專業(yè)的技術(shù)人員和*的實驗技術(shù),目前已經(jīng)建立強大的實驗技術(shù)服務(wù)平臺,品牌設(shè)立為:ZIKER 。
豬瘟病毒抗體ELISA試劑盒?產(chǎn)品規(guī)格:96T(人份)/48T(人份)(單孔檢測分別可以檢測90份樣本,42分樣本,一般都需要留6個孔做標準曲線)。?檢測方法:酶聯(lián)免疫分析ELISA方法?有效期: 4 個月(4℃);8 個月(-20℃)。 ?保存方法: 2-8℃(頻繁使用時); -20℃(長時間不用時)
樣本的采集及保存
一般的生物標本包括有:
血液、體液、內(nèi)臟器官、糞便、胃液、活檢組織、組織提取液、天然孔分泌物及各種表達系統(tǒng)的表達產(chǎn)物等,一般為無菌操作,低溫保存(-80℃、液氮)
一.如果采集的實質(zhì)器官則要求:
1、 器官實質(zhì)不能太小
2、 以采集實質(zhì)性病灶區(qū)為佳:如淋巴結(jié)、心臟、非、肺、脾以及腸管等病毒、病菌聚集的地方為佳
3、 同一病例裝入同一容器,并做好標記
4、 應(yīng)在0-8℃的低溫儲存和運輸
5、 實質(zhì)性器官的處理:
5.1、取實質(zhì)性器官約0.5mg左右,充分剪碎或研磨
5.2、加入約500ul的/生鹽水,充分混勻
5.3、離心5000rmp x10min,去上清
5.4、-20℃保存,作為待檢標本(切勿反復(fù)凍融)
二.體液(常見的包括血清、血漿、唾液以及尿液等)的處理方式
1、血液包括血漿和血清,它們的主要區(qū)別就是:血清凝血而血漿不凝血,所以它們的處理方式也就不一樣
1.1、采集血漿時一般不加抗凝劑(主要為枸櫞酸鹽和檸檬酸鹽),采集后立即離心800-1000rmp x 5min分離,取上清,-20℃或4℃保存?zhèn)溆茫?br />1.2、如要采集血清,一般要加入總體積1%的抗凝劑,采集后先室溫或4℃靜置半小時后,800-1000rmp x 5min分離,取上清,-20℃或4℃保存?zhèn)溆茫?br />2、胃液和唾液的采集方式一般現(xiàn)采現(xiàn)用,但是一般飯后半小時內(nèi)不易采集,因為剛進食的唾液中富含豐富的唾液淀粉酶,的采集的時間時空腹采集;
3、尿液的采集方式基本和唾液一樣的,即現(xiàn)采現(xiàn)用,但是一般隔夜尿不采集;
4、組織提取液如肺泡灌洗液等,采集后離心分離,800-1000rmp x 5min,取上清,-20℃或4℃保存?zhèn)溆茫?br />豬瘟病毒抗體ELISA試劑盒三、糞便以及天然孔排泄物:采集后一般現(xiàn)用/生鹽水溶解,充分混勻,800-1000rmp x 5min分離,取上清,-20℃或4℃保存?zhèn)溆茫?br />四、活檢組織一般進行穿刺檢測,zui常見的就是肝活檢,像病毒性肝炎、脂肪肝、各種類型的肝硬化等進行活檢簡單方便、準確。
五、表達產(chǎn)物的檢測
(一)真核表達產(chǎn)物
1、 細胞上清(分泌性蛋白)
1.2、貼壁細胞或半貼壁,直接將細胞培養(yǎng)上清吸出,10000rmp x10min, 取上清,-20℃或4℃保存,作為標本進行檢測,如有需要可進行透析或純化處理;
1.2、不貼壁細胞,將培養(yǎng)基和細胞轉(zhuǎn)移至10ml離心管,500-800rmp x10min,吸取上清至另一10ml離心管中,10000rmp x10min, -20℃或4℃保存,作為標本進行檢測,如有需要可進行透析或純化處理;
2、 細胞裂解物(非分泌性蛋白)
2.1、貼壁細胞或半貼壁,直接將細胞培養(yǎng)上清吸出,然后用001M (pH 7.4)將細胞吹下至10ml離心管,500-800rmp x10min,棄上清,沉淀轉(zhuǎn)移至1.5ml離心管中, DDW重懸,置冰水浴中用超聲波裂解儀進行裂解,10000rmp x10min,取上清,-20℃或4℃保存,作為標本進行檢測,如有需要可進行透析或純化處理;
2.2、不貼壁細胞,將培養(yǎng)基和細胞轉(zhuǎn)移至10ml離心管,500-800rmp x10min,棄上清,沉淀移至另一10ml離心管中,0.01M (pH 7.4)重懸,500-800rmp x10min,棄上清,沉淀移至1.5ml離心管中, DDW重懸,置冰水浴中用超聲波裂解儀進行裂解,10000rmp x10min,取上清, -20℃或4℃保存,作為標本進行檢測,如有需要可進行透析或純化處理;
(二)原核(大腸桿菌表達系統(tǒng))表達產(chǎn)物
1、表達上清(非融合性蛋白)
直接將培養(yǎng)物和上清吸出,10000rmp x10min, 取上清,-20℃或4℃保存,作為標本進行檢測,如有需要可進行透析或純化處理;
2、菌體裂解物(融合性蛋白)
直接將培養(yǎng)物和上清吸出,10000rmp x10min,棄上清,沉淀用洗一遍,500-800rmp x10min,棄上清,DDW重懸沉淀,冰水浴中用超聲波裂解儀進行裂解,10000rmp x10min,取上清,-20℃或4℃保存,作為標本進行檢測,如有需要可進行透析或純化處理;
注意事項
1.試劑準備:所有試劑都必須在使用前達到室溫,使用后請立即按照說明書要求保存。實驗操作中必須使用一次性吸頭,避免交叉污染。
2.加樣:加樣時,要控制加樣速度,避免*孔與zui后一孔之見的時間間隔過大,否則將會導(dǎo)致不同的預(yù)孵育時間,從而影響實驗的準確性以及重復(fù)性;一般加樣時間控制在10分鐘內(nèi),如果樣本數(shù)量過多,可使用多道移液器。
3.孵育:樣品要在密閉的容器內(nèi)進行孵育,嚴格按照說明書上規(guī)定的孵育時間和溫度進行。
4.洗滌:洗滌過程中反應(yīng)孔中的殘留的洗滌液應(yīng)在濾紙上充分拍干,同時要消除板底殘留的液體和手指痕跡,避免影響zui后的酶標儀讀數(shù)。
5.反應(yīng)時間的控制:加入底物后請定時觀察反應(yīng)孔的顏色變化(比如,10分鐘左右),如果顏色較深,請?zhí)崆凹尤虢K止液終止反應(yīng)。
6.建議實驗前預(yù)測樣品含量,如樣品濃度過高,應(yīng)對樣品進行稀釋,計算結(jié)果時乘以相應(yīng)的稀釋倍數(shù)。
7.建議使用本試劑盒時先做預(yù)實驗(即先做標準曲線,試用幾個標本),如果對本試劑盒有任何疑問,可和所購經(jīng)銷商,如果因運輸過程導(dǎo)致試劑盒失效,可要求調(diào)換,但概不承擔(dān)產(chǎn)品本身以外的任何損失。
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