產(chǎn)品名稱:Anti-JIP3抗體,絲裂原活化蛋白激酶相互作用蛋白3抗體
產(chǎn)品編號(hào):BYK-13648R
英文名稱:Anti-JIP3
中文名稱:絲裂原活化蛋白激酶相互作用蛋白3抗體
英文別名:C-jun-amino-terminal kinase-interacting protein 3; FLJ00027; Homolog of Drosophila Sunday driver 2; JIP-3; JIP3_HUMAN; JNK / Stress Activated Protein Kinase Associated Protein 1; JNK Interacting Protein 3; JNK MAP kinase scaffold protein 3; JNK-interacting protein 3; KIAA1066; MAPK8IP3; Mitogen Activated Protein kinase 8 Interacting Protein 3; Mitogen-activated protein kinase 8-interacting protein 3.
英文介紹:The JNK-interacting proteins (JIPs) are a family of scaffold proteins that mediate JNK signaling by organizing specific components of the MAPK cascade together to form a functional JNK signaling molecule. JIP-3 (JNK-interacting protein 3), also known as JSAP1 or MAPK8IP3 (Mitogen-activated protein kinase 8-interacting protein 3), is a 1,336 amino acid protein that localizes to the cytoplasm and belongs to the JIP family. Expressed in a variety of tissues, including brain and heart, JIP-3 forms homo- or heterooligomeric complexes that can interact with several components of the JNK signaling pathway, thereby functioning as a regulator of kinesin-dependent axonal transport that may also play a role in scaffold formation within neuronal cells. Human JIP-3, which may be phosphorylated upon DNA damage, shares 69% similarity with its mouse counterpart, suggesting a conserved role between species. Multiple isoforms of JIP-3 exist due to alternative splicing events.
產(chǎn)品規(guī)格:0.1ml/0.2ml
注意事項(xiàng):This product as supplied is intended for research use only, not for use in human, therapeutic or diagnostic applications.
此抗體本公司有單抗和多抗,可用于免疫組化(IHC),免疫印跡(WB),酶聯(lián)免疫(ELISA),IF、IP、流式細(xì)胞術(shù)等實(shí)驗(yàn)(可來(lái)電索取說(shuō)明)
此產(chǎn)品本公司有標(biāo)記的一抗出售,相關(guān)標(biāo)記有:Alexa Fluor 350 標(biāo)記、Alexa Fluor 488 標(biāo)記、Alexa Fluor 555 標(biāo)記、Alexa Fluor 647 標(biāo)記、AP標(biāo)記、APC標(biāo)記、Biotin標(biāo)記、Cy3標(biāo)記、Cy5標(biāo)記、Cy5.5標(biāo)記、Cy7標(biāo)記、FITC標(biāo)記、Gold標(biāo)記、HRP標(biāo)記、PE標(biāo)記、PE-Cy3標(biāo)記、PE-CY5標(biāo)記、PE-CY5.5標(biāo)記、PE-CY7標(biāo)記、RBITC標(biāo)記
保存條件:Store at -20 °C for one year. Avoid repeated freeze/thaw cycles. The lyophilized antibody is stable at room temperature for at least one month and for greater than a year when kept at -20°C. When reconstituted in sterile pH 7.4 0.01M PBS or diluent of antibody the antibody is stable for at least two weeks at 2-4 °C.
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Anti-JIP3抗體,絲裂原活化蛋白激酶相互作用蛋白3抗體免疫組化染色:
Western Blotting 具體實(shí)驗(yàn)步驟
Western,也稱Western blot、Western blotting、Western 印跡,是用抗體檢測(cè)蛋白的重要方法之一。
Western可以參考如下步驟進(jìn)行操作:
1、收集蛋白樣品(Protein sample preparation)
可以使用適當(dāng)?shù)牧呀庖毫呀赓N壁細(xì)胞、懸浮細(xì)胞或組織樣品。對(duì)于某些特定的亞細(xì)胞組份蛋白,例如細(xì)胞核蛋白、細(xì)胞漿蛋白、線粒體蛋白等,可以參考相關(guān)文獻(xiàn)提取這些亞細(xì)胞組份蛋白,也可以使用試劑盒進(jìn)行抽提。
收集完蛋白樣品后,為確保每個(gè)蛋白樣品的上樣量*,需要測(cè)定每個(gè)蛋白樣品的蛋白濃度。根據(jù)所使用的裂解液的不同,需要采用適當(dāng)?shù)牡鞍诐舛葴y(cè)定方法。因?yàn)椴煌牡鞍诐舛葴y(cè)定方法對(duì)于一些去垢劑和還原劑等的兼容性差別很大。
2、電泳(Electrophoresis)
(1)、SDS-PAGE凝膠配制
SDS-PAGE凝膠可以參考一些文獻(xiàn)資料進(jìn)行配制,也可以使用博研生物生產(chǎn)的SDS-PAGE凝膠配制試劑盒。該試劑盒提供了除水和配膠器具外的所有試劑以及配制各種濃度SDS-PAGE的配方。
(2)、樣品處理
在收集的蛋白樣品中加入適量濃縮的SDS-PAGE蛋白上樣緩沖液。例如2X或5X的SDS-PAGE蛋白上樣緩沖液。使用5X的SDS-PAGE蛋白上樣緩沖液可以減小上樣體積,在相同體積的上樣孔內(nèi)可以上樣更多的蛋白樣品。5X的SDS-PAGE蛋白上樣緩沖液可以參考相關(guān)文獻(xiàn)資料配制,也可以使用我公司生產(chǎn)的SDS-PAGE蛋白上樣緩沖液(5X) 。100℃或沸水浴加熱3-5分鐘,以充分變性蛋白。
(3)、上樣與電泳
冷卻到室溫后,把蛋白樣品直接上樣到SDS-PAGE膠加樣孔內(nèi)即可。為了便于觀察電泳效果和轉(zhuǎn)膜效果,以及判斷蛋白分子量大小,使用預(yù)染蛋白質(zhì)分子量標(biāo)準(zhǔn)。
電泳時(shí)通常*在上層膠時(shí)使用低電壓恒壓電泳,而在溴酚藍(lán)進(jìn)入下層膠時(shí)使用高電壓恒壓電泳。對(duì)于Bio-Rad的標(biāo)準(zhǔn)電泳裝置或類似電泳裝置,低電壓可以設(shè)置在80-100V,高電壓可以設(shè)置在120V左右。SDS-PAGE可以采用普通的電泳儀就可以滿足要求。為了電泳方便起見,也可以采用整個(gè)SDS-PAGE過(guò)程恒壓的方式,通常把電壓設(shè)置在100V,然后設(shè)定定時(shí)時(shí)間為90-120分鐘。設(shè)置定時(shí)可以避免經(jīng)常發(fā)生的電泳過(guò)頭。
通常電泳時(shí)溴酚藍(lán)到達(dá)膠的底端處附近即可停止電泳,或者可以根據(jù)預(yù)染蛋白質(zhì)分子量標(biāo)準(zhǔn)的電泳情況,預(yù)計(jì)目的蛋白已經(jīng)被適當(dāng)分離后即可停止電泳。
3、轉(zhuǎn)膜(Transfer)
我們*在Western實(shí)驗(yàn)中選用PVDF膜。硝酸纖維素膜(NC膜)或PVDF膜(二氟化樹脂膜膜孔徑:0.45um)也可以使用,但硝酸纖維素膜比較脆,在操作過(guò)程中特別是用鑷子夾取等過(guò)程中容易裂開。膜的使用請(qǐng)參考生產(chǎn)商的*使用步驟。
通常如果使用Bio-Rad的標(biāo)準(zhǔn)濕式轉(zhuǎn)膜裝置,可以設(shè)定轉(zhuǎn)膜電壓120V,轉(zhuǎn)膜時(shí)間為30-60分鐘。具體的轉(zhuǎn)膜時(shí)間要根據(jù)目的蛋白的大小而定,目的蛋白的分子量越大,需要的轉(zhuǎn)膜時(shí)間越長(zhǎng),目的蛋白的分子量越小,需要的轉(zhuǎn)膜時(shí)間越短。
在轉(zhuǎn)膜過(guò)程中,特別是高電流快速轉(zhuǎn)膜時(shí),通常會(huì)有非常嚴(yán)重的發(fā)熱現(xiàn)象,把轉(zhuǎn)膜槽放置在冰浴中進(jìn)行轉(zhuǎn)膜。轉(zhuǎn)膜的效果可以觀察所使用的預(yù)染蛋白質(zhì)分子量標(biāo)準(zhǔn),通常分子量zui大的1-2條帶較難全部轉(zhuǎn)到膜上。轉(zhuǎn)膜的效果也可以用麗春紅染色液對(duì)膜進(jìn)行染色,以觀察實(shí)際的轉(zhuǎn)膜效果。也可以用考馬斯亮藍(lán)快速染色液對(duì)完成轉(zhuǎn)膜的SDS-PAGE膠進(jìn)行染色,以觀察蛋白的殘留情況。
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