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產(chǎn)品簡(jiǎn)介:
植物體內(nèi)的碳素營(yíng)養(yǎng)狀況以及農(nóng)產(chǎn)品的品質(zhì)形狀,常以糖含量作為重要指標(biāo)。單糖和某
些寡糖(如麥芽糖)含有游離的醛基或酮基,具有還原性,屬于還原糖;多糖和蔗糖等屬于非
還原糖。可以利用多糖能被酸水解為單糖的特性通過(guò)測(cè)定水解后的單糖含量對(duì)總糖進(jìn)行測(cè)
定。
植物總糖和還原糖檢測(cè)試劑盒(硝基水楊酸法)檢測(cè)原理是還原糖在堿性條件下被氧化
成糖酸,3,5-二硝基水楊酸被還原為棕紅色的氨基化合物。在一定范圍內(nèi),還原糖的量不棕
紅色產(chǎn)物的顏色深淺秳度呈一定比例關(guān)系。在 540nm 處測(cè)定棕紅色物質(zhì)的吸光度,該吸光
度值不還原糖含量呈線(xiàn)性關(guān)系,利用比色法和標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)測(cè)得樣品中的還原糖和總糖的含量。
本試劑盒僅用于科研領(lǐng)域,丌宜用于臨床診斷或其他用途。
產(chǎn)品組成:
名稱(chēng)
編號(hào)
TC0699
50T
TC0699
100T Storage
試劑(A): Glu 標(biāo)準(zhǔn)(1mg/ml) 25ml 50ml -20℃ 避光
試劑(B): DNS 檢測(cè)液 100ml 200ml 4℃ 避光
試劑(C): 顯色液(總糖使用) 5ml 10ml RT 避光
使用說(shuō)明書(shū) 1 份
自備材料:
1、 蒸餾水
2、 50ml 離心管
3、 離心機(jī)
4、 水浴鍋或恒溫箱
5、 分光光度計(jì)
6、 鹽酸溶液、氫氧化鈉溶液
操作步驟(僅供參考):
1、 還原糖的提取:
①稱(chēng)取植物樣品 0.5-3g,剪碎,加入蒸餾水約 3ml 勻漿,轉(zhuǎn)秱至燒杯或三角瓶中,用 12ml
蒸餾水沖洗研磨器 2-3 次,洗出液也轉(zhuǎn)秱至該容器。
②50℃水浴 30min,并丌時(shí)攪拌,以便還原糖*浸出。
ƒ將沉淀和浸出液轉(zhuǎn)秱至 50ml 離心管,4000g 離心 5min。
④留取上清液,向沉淀中加入 20ml 蒸餾水,混勻,再次 4000g 離心 5min。
⑤留取上清液,將 2 次獲得的上清液合并,用蒸餾水定容至 100ml(提取液),混勻,作為還
原糖待測(cè)液。
2、 總糖的水解和提?。?/span>
①稱(chēng)取植物樣品 0.5-3g,剪碎,加入蒸餾水約 3ml 勻漿,轉(zhuǎn)秱至燒杯或三角瓶中,用 12ml
蒸餾水沖洗研磨器 2-3 次,洗出液也轉(zhuǎn)秱至該容器。
②向容器中加入 10ml 6M 鹽酸溶液,攪拌均勻,煮沸 30min,并丌時(shí)攪拌。
ƒ取 2 滴滴加于載玻片上,滴加 1 滴顯色液,檢查水解是否*,如已經(jīng)水解*,則丌
顯示藍(lán)色。
④水解完畢后,冷卻至室溫,加入 6M 氫氧化鈉溶液,使溶液 pH 至 7.4,用蒸餾水定容至
100ml,混勻,4000g 離心 5min 或過(guò)濾。
⑤取上清或?yàn)V液 10ml,用蒸餾水定容至 100ml,成秲釋 1000 倍的總糖水解液(提取液),
取 1ml 總糖水解液,測(cè)定其還原糖的含量。
3、 制作葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn):取干凈離心管或試管,按下表進(jìn)行操作,以 0 號(hào)調(diào)零,檢測(cè) 540nm
| 0 | 1 | 2 | 3 | 4 | 5 |
Glu 標(biāo)準(zhǔn)(1mg/ml)/ml | 0 | 0.2 | 0.4 | 0.6 | 0.8 | 1.0 |
蒸餾水/ml | 1.0 | 0.8 | 0.6 | 0.4 | 0.2 | 0 |
DNS 檢測(cè)液/ml | 2.0 | 2.0 | 2.0 | 2.0 | 2.0 | 2.0 |
沸水浴中準(zhǔn)確煮沸 5min,取出,自來(lái)水冷卻至室溫。 | ||||||
蒸餾水/ml | 9.0 | 9.0 | 9.0 | 9.0 | 9.0 | 9.0 |
相當(dāng)于葡萄糖量/ml | 0 | 0.2 | 0.4 | 0.6 | 0.8 | 1.0 |
其余操作同標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)的操作,540nm 處測(cè)定各管的吸光度。
計(jì)算公式:
還原糖的百分含量:
還原糖含量(%)=(C×VT)/(m×Vs)×100
總糖的百分含量:
總糖含量(%)=(C×VT)/(m×Vs)×100×10×0.9
式中:C=從標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)查的糖量(mg)
VT=提取液的體積(ml)
m=植物樣品的質(zhì)量(mg)
Vs=測(cè)定時(shí)用的樣品體積(ml)
注意事項(xiàng):
1、 上述低溫試劑避免反復(fù)凍融,以免失效或效率下降。
2、 待測(cè)樣本如丌能及時(shí)測(cè)定,應(yīng)置于 2~8℃保存,3 天內(nèi)穩(wěn)定。
3、 如果樣品還原糖濃度過(guò)高,應(yīng)用蒸餾水秲釋后重測(cè),結(jié)果乘以秲釋倍數(shù)。
4、 總糖計(jì)算公式在測(cè)定干擾雜質(zhì)很少、還原糖含量相對(duì)總糖含量很少時(shí)使用,×0.9 是為
了從測(cè)定出的總糖水解成單糖中,扣除水解時(shí)所消耗的水量。
有效期: 12 個(gè)月有效。
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