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HEL細胞；人紅白細胞白血病細胞培養(yǎng)方法

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更新時間：2017-11-03 10:36:36瀏覽次數(shù)：373次

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上海研盟生物科技有限公司

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產(chǎn)品簡介

上海研盟生物提供美國ATCC傳代細胞株“HEL細胞；人紅白細胞白血病細胞培養(yǎng)方法"，進口來源，國內(nèi)保種，活性保證，咨詢：.

詳細介紹

【友情提示】：產(chǎn)品價格與說明書請?zhí)砑涌头騺黼娫儍r，索要說明書；

產(chǎn)品名稱：HEL細胞；人紅白細胞白血病細胞培養(yǎng)方法

細胞特性

組織來源：外周血
培養(yǎng)條件：RPMI-1640 +10% FBS
形態(tài)：懸浮；淋巴母細胞樣
背景：這株淋巴母細胞樣細胞株，源自一位30歲白人男性一，患有惡性紅細胞白血病，能夠自然產(chǎn)生并能誘導(dǎo)球蛋白合成。細胞的EB病毒核抗原陰性，沒有表面免疫球蛋白與細胞質(zhì)免疫球蛋白。 HEL細胞表達HLA抗原(HLA-A3, AW32, BW35), β-2 小球蛋白，一定比例的細胞還表達Ia抗原。這個細胞株提供了一種用于研究紅細胞分化和球蛋白基因表達的模型。它類似于小鼠中的血友病。

含量：>1x10的6次方個/mL
污染：支原體、細菌、酵母和真菌檢測為陰性
規(guī)格：T25瓶或者1mL凍存管包裝

基本特性：
描述：（1）所有細胞株購自ATCC；
（2）公司可提供新鮮或凍存細胞株；
（3）細胞株數(shù)量約 1000000個/瓶；
（4）不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細菌、酵母和真菌

密度超過90%,并且細胞狀態(tài)很好時,則復(fù)溫后2個小時需要立即傳代，提供復(fù)蘇好的細胞株，貼壁及懸浮細胞形式，細胞狀態(tài)良好，飽滿、光澤度好，*，并提供細胞報價、所需培養(yǎng)基、種屬來源、組織來源、形態(tài)、背景資料等。

客戶在收到細胞時，請首先觀察培養(yǎng)瓶是否完好，培養(yǎng)液是否外滲，培養(yǎng)液是否混濁。如發(fā)現(xiàn)有瓶破、滲漏、培養(yǎng)液混濁等問題，請在收到細胞后立即與我們，

由于運輸過程中的問題，我們公司一般采用胎牛血清保存的方式進行運輸。我們公司細胞生產(chǎn)部門會將培養(yǎng)好的10的6次方個細胞加1.5ML血清，放入2ML凍存管內(nèi)。你在收到細胞后。請用培養(yǎng)基重懸放入培養(yǎng)瓶，置于二氧化碳培養(yǎng)箱內(nèi)過夜。并于次日在顯微鏡下觀察。此時多數(shù)細胞會重新貼附于瓶壁。如細胞仍不能貼壁，請用臺盼藍染色法鑒定細胞活力，如臺盼藍染色證實細胞活力正常請按本注意事項第3項下懸浮細胞的方法處理；如臺盼藍染色證實細胞無活力，請在收到細胞48小時內(nèi)并將細胞狀態(tài)照片及臺盼藍染色后的照片發(fā)至我們。我們將盡快幫你解決。

細胞用途：僅供科研使用。

HEL細胞；人紅白細胞白血病細胞培養(yǎng)方法復(fù)蘇方法

1．從液氮罐中取出安剖；有時因安剖未封嚴(yán)，浸入了液氮，取出后因安剖內(nèi)液氮迅速氣化而發(fā)生爆炸，因此應(yīng)帶有防護眼睛和手套。

2．迅速放入盛有36℃～37℃水的搪瓷罐中，扣上蓋并不時搖動，盡快解凍。

3．剪開紗布口袋，取出安剖，用70％酒精擦拭消毒后，凈化臺上打開蓋，用吸管吸出細胞懸液，裝入離心管中，再補加10ml培養(yǎng)液，吹打使細胞懸浮。

4．低速離心（500～1000轉(zhuǎn)/分）5分鐘，取上清后再重復(fù)用培養(yǎng)液漂洗、離心。

5．加入培養(yǎng)液適當(dāng)稀釋后，再移裝入培養(yǎng)瓶中，置溫箱培養(yǎng)，次日更換一次培養(yǎng)液后再繼續(xù)培養(yǎng)。

我公司認(rèn)為購買細胞的客戶有培養(yǎng)細胞的經(jīng)驗，客戶收到細胞，原瓶里的培養(yǎng)液可以收集繼續(xù)使用，在*次消化傳瓶時，我們要求客戶留一瓶細胞繼續(xù)使用我們的培養(yǎng)液，其它瓶的細胞客戶可使用自己的培養(yǎng)液，這樣可減少由于細胞不適應(yīng)培養(yǎng)液導(dǎo)致的細胞問題。

來源有保障（世界*品牌），狀態(tài)且傳代次數(shù)好，經(jīng)測試不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細菌、酵母和真菌。每管含有細胞數(shù)>1000000個，具有高品質(zhì)、高純度、高穩(wěn)定性等特點，純化技術(shù)保證產(chǎn)品性能。
運輸方式：活細胞運輸（T-25 flasks）。
細胞純度：95%。
細胞來源：ATCC等。
包裝：內(nèi)層無菌自封袋，防壓泡沫盒，外層防壓保溫氣泡袋，說明書。

用途：本產(chǎn)品只提供給進一步的科研使用，不可應(yīng)用于治療等其他方面。

細胞凍存
１．將細胞消化下來，移入離心管離心，棄上清
２．準(zhǔn)備凍存液比例：５０％ＦＢＳ＋４０％培養(yǎng)基＋１０％ＤＭＳＯ（現(xiàn)用現(xiàn)配）
３．加１．５凍存液在離心管中，將細胞吹打均勻，移入凍存管內(nèi)．
放入－２０度冰箱２－４小時后．再放入－８０度冰箱過夜，第二天放入液氮罐保存.

，體內(nèi)、外細胞的差異和分化：

1、差異：細胞離體后，失去了神經(jīng)體液的調(diào)節(jié)和細胞間的相互影響，生活在缺乏動態(tài)平衡相對穩(wěn)定環(huán)境，日久天長，易發(fā)生如下變化：分化現(xiàn)象減弱；形態(tài)功能趨于單一化或生存一定時間后衰退死亡；或發(fā)生轉(zhuǎn)化獲得不死性，變成可無限生長的連續(xù)細胞系或惡性細胞系。因此，培養(yǎng)中的細胞可視為一種在特定的條件下的細胞群體，它們既保持著與體內(nèi)細胞相同的基本結(jié)構(gòu)和功能，也有一些不同于體內(nèi)細胞的性狀。實際上從細胞一旦被置于體外培養(yǎng)后，這種差異就開始發(fā)生了。

2、分化：體外培養(yǎng)的細胞分化能力并未*喪失，只是環(huán)境的改變，細胞分化的表現(xiàn)和在體內(nèi)不同。細胞是否表現(xiàn)分化,關(guān)鍵在于是否存在使細胞分化的條件，如Friend細胞（小鼠紅白血病細胞）在一定的因素作用下可以合成血紅蛋白，血管內(nèi)皮細胞在類似基膜物質(zhì)底物上培養(yǎng)時能長成血管狀結(jié)構(gòu)，雜交瘤細胞能產(chǎn)生特異的單克隆抗體，這些均屬于細胞分化行為。

注意事項

1. 收到細胞后，若發(fā)現(xiàn)干冰已揮發(fā)干凈、凍存管瓶蓋脫落、破損及細胞有污染，請立即與我們。

2. 所有動物細胞均視為有潛在的生物危害性，必須在二級生物安全臺內(nèi)操作，并請注意防護，所有廢液及接觸過此細胞的器皿需要滅菌后方能丟棄。

本公司的細胞培養(yǎng)操作規(guī)程，供參考
一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備：
1）準(zhǔn)備DMEM培養(yǎng)基(DMEM，GIBCO，貨號11965-092)，90%；胎牛血清，10%。
2）培養(yǎng)條件：氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。溫度：37℃，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3）凍存液：90%血清，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配。液氮儲存。
二．細胞處理：
1）復(fù)蘇細胞：將含有1mL細胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于凍存管蓋部）搖晃解凍，移入事先準(zhǔn)備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜。第二天換液并檢查細胞密度。
2）細胞傳代：如果細胞密度達80%-90%，即可進行傳代培養(yǎng)。
對于貼壁細胞，傳代可參考以下方法：
1.棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。
2.加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘，然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況，若細胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加入3ml此細胞的培養(yǎng)基終止消化。
3.輕輕吹打后吸出，移入15ml離心管中，在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，加入1mL培養(yǎng)液后吹勻。
4.移入到事先準(zhǔn)備好的含有5ml培養(yǎng)基的T-25培養(yǎng)瓶中或含有14ml培養(yǎng)基的T-75培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)。
3）細胞凍存：待細胞生長狀態(tài)良好時，可進行細胞凍存。貼壁細胞凍存時，先要消化處理并進行細胞計數(shù)。消化方法按照細胞傳代方法的1-3步驟進行，zui后的重懸液使用血清。懸浮細胞直接計數(shù)后離心，用血清重懸浮，加DMSO至zui終濃度為10%。加入DMSO后迅速混勻，按每1ml的數(shù)量分配到凍存管中。本公司按每個凍存管細胞數(shù)目大于1X106個細胞凍存。

傳代時間：2-3天 3-5天

傳代比例：1:2~1:3 1:1~1:2

細胞活力：95％（Viability by Trypan Blue Exclusion）

細胞實驗安全性：所有細胞均視為有潛在的生物危害性，必須在二級生物安全臺內(nèi)操作，并請注意防護，所有廢液及接觸過此細胞的器皿需高壓滅菌后方能丟棄。收到細胞后，在倒置鏡下(是在4X物鏡)觀察整個細胞生長情況。

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