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江蘇菲亞生物科技有限公司

miRNA的特征、功能及識別方法等詳解

時間:2016-12-15閱讀:241
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什么是miRNA
    MicroRNAs (miRNAs)是一種大小約21—23個堿基的單鏈小分子RNA,是由具有發(fā)夾結(jié)構(gòu)的約70-90個堿基大小的單鏈RNA前體經(jīng)過Dicer酶加工后生成,不同于siRNA(雙鏈)但是和siRNA密切相關(guān)。據(jù)推測,這些非編碼小分子RNA(miRNAs)參與調(diào)控基因表達,但其機制區(qū)別于siRNA介導的mRNA降解。*個被確認的miRNA是在線蟲中發(fā)現(xiàn)的lin-4 和let-7,隨后多個研究小組在包括人類、果蠅、植物等多種生物物種中鑒別出數(shù)百個miRNAs。
 
miRNA 的特征
    已經(jīng)被鑒定的miRNAs據(jù)推測大都是由具有發(fā)夾結(jié)構(gòu)、約70個堿基大小形成發(fā)夾結(jié)構(gòu)的單鏈RNA前體經(jīng)過Dicer酶加工后生成的,有5’端磷酸基和3’羥基,大小約21—25nt的小分子RNA片斷,定位于RNA前體的3’端或者5’端。
    zui近3個研究小組分別從線蟲、果蠅和Hela細胞中鑒定的100個新miRNAs中,有15%跨越線蟲、果蠅和哺乳動物基因組具有高度的保守性(只有有1—2個堿基的區(qū)別),Lau 和Bar 實驗室的同事更加認為:所有的miRNAs可能在其他物種中具有直向同源物(Ortholog,指那些起源于同一祖先,在不同生物體中行使同一功能的基因群就可比作為一個門類,這些類似的基因被稱為“直向同源物”)。
    Bantam zui早被認為是果蠅中參與細胞增殖的一個基因位點。已知幾個包含增強子的轉(zhuǎn)座子插入跨越這個位點的一段12.3kb區(qū)域會導致果蠅的眼和翅重復生長,而由轉(zhuǎn)座子介導的一段跨越該位點的23kb片斷缺失則導致突變果蠅個體小于野生型果蠅。Cohen和同事用一段3.85kb的片斷導入21kb片斷缺失的果蠅中使其恢復原來的大小。但是奇怪的是表達這個3.85kb片斷中的EST卻沒有同樣的效果。Cohen將這個片斷和瘧蚊Anopheles gambiae的同源序列進行比較,發(fā)現(xiàn)一段90bp的高度保守區(qū),經(jīng)過RNA folding program (mfold)發(fā)現(xiàn)這個保守序列可以形成發(fā)夾結(jié)構(gòu),使得這個區(qū)段很象是一個miRNA的前體。這個結(jié)果經(jīng)過Northern blot證實突變果蠅的幼體缺少一個21bp的bantam miRNA ,用這個90bp的mRNA前體經(jīng)過一系列的“功能缺失”—“功能恢復”實驗,證實 bantam miRNA在細胞增殖中的作用。研究人員用計算機程序檢索在hid mRNA的3’非編碼區(qū)找到了bantam的3個潛在的結(jié)合位點( hid是果蠅中一個誘導凋亡的基因),并證實 bantam miRNA抑制hid 的翻譯而非轉(zhuǎn)錄。
    miRNAs的表達方式各不相同。部分線蟲和果蠅的miRNA在各個發(fā)育階段的全部細胞中都有表達,而其他的miRNA則依據(jù)某種更為嚴謹?shù)奈幌嗪蜁r相的表達模式(a more restricted spatial and temporal expression pattern)——在不同組織、不同發(fā)育階段中miRNA的水平有顯著差異。
 
miRNA的功能
    對microRNAs (miRNAs)的研究正在不斷增加,原因是科學家開始認識到這些普遍存在的小分子在真核基因表達調(diào)控中有著廣泛的作用。在線蟲,果蠅,小鼠和人等物種中已經(jīng)發(fā)現(xiàn)的數(shù)百個miRNAs中的多數(shù)具有和其他參與調(diào)控基因表達的分子一樣的特征——在不同組織、不同發(fā)育階段中miRNA的水平有顯著差異,這種miRNAs表達模式具有分化的位相性和時序性( differential spatial and temporal expression patterns),提示miRNAs有可能作為參與調(diào)控基因表達的分子,因而具有重要意義。
    *個被確認的miRNA——在線蟲中發(fā)現(xiàn)的lin-4 和let-7,可以通過部分互補結(jié)合到目的mRNA靶的3’非編碼區(qū)(3’UTRs),以一種未知方式誘發(fā)蛋白質(zhì)翻譯抑制,進而抑制蛋白質(zhì)合成,通過調(diào)控一組關(guān)鍵mRNAs的翻譯從而調(diào)控線蟲發(fā)育進程(reviewed in Pasquinelli 2002)。
    bantam miRNA是*個被發(fā)現(xiàn)有原癌基因作用的miRNA。除了lin-4、let-7,已知還有一些miRNAs可能參與在細胞分化和組織發(fā)育過程中起重要作用的基因的轉(zhuǎn)錄后調(diào)控,例如mir-14、mir-23 等。
    在植物miRNAs的研究中有兩條線索提示miRNAs可能參與植物的發(fā)育過程。一是在carpel factory (car) 突變株中3個miRNAs的表達水平顯著下降。CARPEL FACTORY 是一個類似Dicer的酶,參與植物的發(fā)育,其缺失突變株表現(xiàn)為胚胎和葉片發(fā)育的缺陷。實驗結(jié)果提示這種缺陷是由于缺少miRNAs加工而造成的。多數(shù)的植物miRNAs在某些特定組織中高水平表達也提示他們可能參與了植物組織的發(fā)育。
    對一部分miRNAs的研究分析提示:miRNAs參與生命過程中一系列的重要進程,包括早期發(fā)育(Reinhart 2000),細胞增殖,細胞凋亡,細胞死亡(Brennecke 2003),脂肪代謝(Xu 2003)和細胞分化(Kawasaki 2003)。此外,一個研究表明,2個miRNAs水平的下降和慢性淋巴細胞白血病之間的顯著相關(guān),提示miRNAs和癌癥之間可能有潛在的關(guān)系(Calin 2002)。
    由于miRNAs存在的廣泛性和多樣性,提示miRNAs可能有非常廣泛多樣的生物功能。盡管對miRNA的研究還處于初級階段,據(jù)推測miRNAs在真核生物體內(nèi)對基因表達的調(diào)控作用可能和轉(zhuǎn)錄因子一樣重要。有一種看法是:miRNAs可能代表在一個新發(fā)現(xiàn)的層次上的基因表達調(diào)控方式。
   

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