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江蘇菲亞生物科技有限公司
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腺病毒包裝服務(wù)的簡(jiǎn)要流程
2018-3-21 閱讀(963)
腺病毒(adenovirus)是一種無(wú)包膜的線(xiàn)狀雙鏈DNA病毒。它的宿主范圍很廣，既可感染分裂細(xì)胞，又可感染非分裂細(xì)胞。腺病毒包裝服務(wù)通過(guò)Cre/loxP 獲得重組病毒，這個(gè)過(guò)程發(fā)生在HEK293細(xì)胞中，從而避免在細(xì)菌中重組。在腺病毒的包裝系統(tǒng)中，腺病毒基因組質(zhì)粒負(fù)責(zé)攜帶腺病毒的大部分骨架元件，穿梭質(zhì)粒負(fù)責(zé)攜帶外源基因表達(dá)盒。兩者共轉(zhuǎn)染包裝細(xì)胞后發(fā)生同源重組，攜帶外源基因的病毒基因組被包裝，產(chǎn)生重組的腺病毒顆粒。腺病毒包裝服務(wù)的簡(jiǎn)要流程：
1、構(gòu)建表達(dá) siRNA/miRNA 的腺病毒載體
2、采用 PacI 消化純化的質(zhì)粒。
3、消化好的腺病毒表達(dá)載體轉(zhuǎn)染 293A 細(xì)胞，收獲細(xì)胞以制備病毒粗提液。
4、將病毒粗提液感染 293A 細(xì)胞以擴(kuò)增病毒。
5、分裝，-80℃保存。
