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公司產(chǎn)品僅用于科研以下是細(xì)胞的訂購(gòu)信息：

英文簡(jiǎn)稱(chēng)：COLO-680N細(xì)胞    

產(chǎn)品名稱(chēng)：食管鱗狀癌細(xì)胞

規(guī)格：T25

形態(tài)特性：

生長(zhǎng)特性：

特征特性：

培養(yǎng)條件：

傳代方法：

貨號(hào)：CS-X64033
細(xì)胞培養(yǎng)操作規(guī)程：
一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備：
1）準(zhǔn)備RPMI-1640培養(yǎng)基，90%；優(yōu)質(zhì)胎牛血清，10%。
2）培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37℃，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3）凍存液：90%血清，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配，液氮儲(chǔ)存。
二．細(xì)胞處理：
1）復(fù)蘇細(xì)胞：將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于凍存管蓋部）搖晃解凍，移入事先準(zhǔn)備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過(guò)夜。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。
2）細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
對(duì)于懸浮細(xì)胞，傳代可參考以下方法：
方法一：收集細(xì)胞，1000RPM，常溫條件下離心5分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻，將細(xì)胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。

細(xì)胞培養(yǎng)的優(yōu)點(diǎn)：
1.研究的對(duì)象是活細(xì)胞
在實(shí)驗(yàn)過(guò)程中，根據(jù)要求可始終保持細(xì)胞活力，并可長(zhǎng)時(shí)間監(jiān)控、檢測(cè)甚至定量評(píng)估一部分活細(xì)胞的情況，包括活細(xì)胞的形態(tài)、結(jié)構(gòu)、生命活動(dòng)等。
2.研究條件可以人為控制
pH、溫度、氧氣、二氧化碳、張力等物理化學(xué)的條件，可以根據(jù)實(shí)際需要進(jìn)行人為的控制，同時(shí)，可以施加化學(xué)、物理、生物等因素作為條件而進(jìn)行實(shí)驗(yàn)觀察，這些因素同樣可以處于嚴(yán)格控制之下。
3.研究的樣本可以達(dá)到比較均一性
通過(guò)細(xì)胞培養(yǎng)一定代數(shù)后，所得到的細(xì)胞系則可以達(dá)到均一性而屬于同一類(lèi)型的細(xì)胞，需要時(shí)，可采用克隆化等方法使細(xì)胞達(dá)到純化。
4.研究?jī)?nèi)容便于觀察、檢測(cè)和記錄
采用各種研究技術(shù)：如倒置生物顯微鏡、熒光顯微鏡、電子顯微鏡、流式細(xì)胞術(shù)、激光共焦顯微鏡、免疫組織化學(xué)、原位雜交、同位素標(biāo)記等各種儀器設(shè)備。

注意事項(xiàng)：
（1）凍存前細(xì)胞狀態(tài)，細(xì)胞在對(duì)數(shù)生，細(xì)胞密度適合，剛剛發(fā)生細(xì)胞融合，過(guò)密或連成片的細(xì)胞狀態(tài)不好，而且消化時(shí)不容易分散；
（2）凍存的密度不宜過(guò)低，10的6次方-7次方的數(shù)量級(jí)比較好，我凍存的細(xì)胞一般T25培養(yǎng)瓶（5*107），一瓶?jī)鲆还埽?.5ml凍存管），10cm培養(yǎng)皿（大概10的8次方個(gè)細(xì)胞）分成兩管。
（3）消化和吹打，切忌消化過(guò)度，吹打不可太用力，不要吹出好多泡泡。消化后立即加入*培養(yǎng)基吹打哦，不是加入凍存液再吹打。
（4）離心后加入凍存液。凍存液中FBS的用量對(duì)于腫瘤細(xì)胞株而言要求不是很?chē)?yán)格，我從10%-90%都用過(guò)，問(wèn)題不大，個(gè)人認(rèn)為10%-20%可以了，能節(jié)約處就節(jié)約點(diǎn)嘛！另外，凍存液可以在處理細(xì)胞前配置，放在4度冰箱預(yù)冷。細(xì)胞離心后直接用預(yù)冷的凍存液重懸，移入凍存管。
（5）關(guān)于“慢凍"，傳統(tǒng)的方法，LLC細(xì)胞凍存管用棉花包好，4度2h，-20度2h或更長(zhǎng)，-80度過(guò)夜，最后液氮。對(duì)于條件較好的實(shí)驗(yàn)室和細(xì)胞凍存數(shù)量多的實(shí)驗(yàn)室，使用程序降溫盒，內(nèi)裝異丙醇，在-80度并內(nèi)可以逐漸降溫，很方便，省了包棉花、4度、-20度了。
墨蝶呤還原酶(SPR)檢測(cè)試劑盒英文名稱(chēng)：SPR ELISA Kit癌胚抗原單克隆抗體（包被）包裝1g

末端補(bǔ)體復(fù)合體C5b-9(C5b-9)檢測(cè)試劑盒英文名稱(chēng)：C5b-9 ELISA Kit癌胚抗原單克隆抗體（檢測(cè)）包裝5g

膜鐵轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白(FPN)檢測(cè)試劑盒英文名稱(chēng)：FPN ELISA Kit癌基因c-Raf抗體包裝1g

膜聯(lián)蛋白A5(ANXA5)檢測(cè)試劑盒英文名稱(chēng)：ANXA5 ELISA KitⅢ型膠原蛋白/膠原蛋白3/3型膠原蛋白抗體包裝5g

膜聯(lián)蛋白A2(ANXA2)檢測(cè)試劑盒英文名稱(chēng)：ANXA2 ELISA Kit黑色素瘤相關(guān)抗原抗體包裝1g

膜聯(lián)蛋白A1(ANXA1)檢測(cè)試劑盒英文名稱(chēng)：ANXA1 ELISA KitCD33抗體包裝25g

球蛋白樣EGF樣域激酶1(Tie1)檢測(cè)試劑盒英文名稱(chēng)：Tie1 ELISA Kit睫狀神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子受體α抗體包裝5g

球蛋白G3(IgG3)檢測(cè)試劑盒英文名稱(chēng)：IgG3 ELISA KitCD7抗體包裝100g

球蛋白G2α(IgG2α)檢測(cè)試劑盒英文名稱(chēng)：IgG2α ELISA Kit尾型同源盒轉(zhuǎn)錄因子2抗體包裝1g

密封蛋白(OCLN)檢測(cè)試劑盒英文名稱(chēng)：OCLN ELISA KitCD68抗體包裝25g

錨定蛋白重復(fù)域蛋白1(ANKRD1)檢測(cè)試劑盒英文名稱(chēng)：ANKRD1 ELISA Kit緊密連接蛋白1抗體包裝5g

絡(luò)絲蛋白(RL)檢測(cè)試劑盒英文名稱(chēng)：RL ELISA Kit膜輔蛋白抗體包裝25g

卵泡抑素樣蛋白3(FSTL3)檢測(cè)試劑盒英文名稱(chēng)：FSTL3 ELISA KitCXC趨化因子16抗體包裝5g

脂酰轉(zhuǎn)移酶(LCAT)檢測(cè)試劑盒英文名稱(chēng)：LCAT ELISA Kit色素c氧化酶IV亞型1抗體包裝1g

卵白蛋白(OVA)檢測(cè)試劑盒英文名稱(chēng)：OVA ELISA Kit1號(hào)染色體開(kāi)放閱讀框227抗體包裝250mg
COLO-680N細(xì)胞抗促狀腺素受體抗體(TRAb)檢測(cè)試劑盒英文名稱(chēng)：TRAb ELISA Kit腺相關(guān)病5 VP1抗體包裝5MG

抗α-胞襯蛋白抗體IgG/IgA(α-Fodrin IgG/IgA)檢測(cè)試劑盒英文名稱(chēng)：α-Fodrin IgG/IgA ELISA Kit脂肪脫氫酶抗體包裝100g

抗Smith抗體(Sm)檢測(cè)試劑盒英文名稱(chēng)：Sm ELISA Kit抗利尿1A抗體包裝25g

卷曲螺旋域結(jié)合蛋白80(CCDC80)檢測(cè)試劑盒英文名稱(chēng)：CCDC80 ELISA Kit抗利尿受體1B抗體包裝5g

巨噬細(xì)胞移動(dòng)因子(MIF)檢測(cè)試劑盒英文名稱(chēng)：MIF ELISA Kit二磷酸腺苷核糖基化因子核苷酸交換因子2抗體包裝1g

巨噬細(xì)胞移動(dòng)抑制因子(MIF)檢測(cè)試劑盒英文名稱(chēng)：MIF ELISA Kitα增強(qiáng)子結(jié)合蛋白1抗體包裝5g

巨噬細(xì)胞炎性蛋白5(MIP-5)檢測(cè)試劑盒英文名稱(chēng)：MIP-5 ELISA Kit脊髓小腦共濟(jì)失調(diào)10抗體包裝250mg

巨噬細(xì)胞炎性蛋白3β(MIP-3β/ELC/CCL19)檢測(cè)試劑盒英文名稱(chēng)：MIP-3β/ELC/CCL19 ELISA Kit蛋白激酶A錨定蛋白7抗體包裝1g

巨噬細(xì)胞炎性蛋白3α(MIP-3α/CCL20)檢測(cè)試劑盒英文名稱(chēng)：MIP-3α/CCL20 ELISA Kit腺苷三磷酸結(jié)合盒轉(zhuǎn)運(yùn)體12抗體包裝5g

巨噬細(xì)胞炎性蛋白2(MIP-2)檢測(cè)試劑盒英文名稱(chēng)：MIP-2 ELISA Kit腺苷三磷酸結(jié)合盒轉(zhuǎn)運(yùn)體9抗體包裝25g

巨噬細(xì)胞炎性蛋白1δ(MIP-1δ/CCL15)檢測(cè)試劑盒英文名稱(chēng)：MIP-1δ/CCL15 ELISA Kit三磷酸腺苷結(jié)合盒轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白4抗體包裝5g

巨噬細(xì)胞炎性蛋白1β(MIP-1β/CCL4)檢測(cè)試劑盒英文名稱(chēng)：MIP-1β/CCL4 ELISA Kit肌動(dòng)蛋白結(jié)合蛋白LIM3抗體包裝100g

巨噬細(xì)胞炎性蛋白1α(MIP1α)檢測(cè)試劑盒英文名稱(chēng)：MIP1α ELISA Kit高爾基復(fù)合體相關(guān)蛋白1抗體包裝25g

巨噬細(xì)胞來(lái)源的趨化因子(MDC/CCL22)檢測(cè)試劑盒英文名稱(chēng)：MDC/CCL22 ELISA Kit乙酰羧化酶1ACCα抗體包裝100mg

巨噬細(xì)胞集落刺激因子(M-CSF)檢測(cè)試劑盒英文名稱(chēng)：M-CSF ELISA Kit腺嘌呤核苷酸轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白1、2、3、4抗體包裝1g
實(shí)驗(yàn)報(bào)告
一、產(chǎn)分離與培養(yǎng)：
   1、無(wú)菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，最后將成1mm3左右大?。?/span>
   2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置；
   3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復(fù)此步驟2-3次，直至組織*被消化；
   4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過(guò)濾細(xì)胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細(xì)胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸，接種于25cm2培養(yǎng)瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；
   5、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基，按實(shí)驗(yàn)需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)；
二、免疫熒光鑒定：
   1、待心房肌細(xì)胞生長(zhǎng)至80%融合時(shí)，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min；
   2、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；
   3、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細(xì)胞30min；
   4、按1: 100的比例稀釋?duì)?actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過(guò)夜；
   5、PBS沖洗細(xì)胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；
   6、用PBS沖洗3次，每次10min，最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。