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操作步驟：

1.編號(hào)：將樣品對(duì)應(yīng)微孔按序編號(hào)，每板應(yīng)設(shè)陰性對(duì)照 2 孔、陽(yáng)性對(duì)照 2 孔、空白對(duì)照 1孔（空白對(duì)照孔不加樣品及酶標(biāo)試劑，其余各步操作相同）

2.加樣：分別在陰、陽(yáng)性對(duì)照孔中加入陰性對(duì)照、陽(yáng)性對(duì)照 50μl。然后在待測(cè)樣品孔先 加樣品稀釋液 40μl，然后再加待測(cè)樣品 10μl。加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動(dòng)混勻，

3.溫育：用封板膜封板后置 37℃溫育 30 分鐘。

4.配液：將 30 倍濃縮洗滌液用蒸餾水 30 倍稀釋后備用。

5.洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿(mǎn)洗滌液，靜置 30 秒后棄去，如此 重復(fù) 5 次，拍干。

6.加酶：每孔加入酶標(biāo)試劑 50μl，空白孔除外。

7.溫育：操作同 3。

8.洗滌：操作同 5。

9.顯色：每孔先加入顯色劑 A50μl，再加入顯色劑 B50μl，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色10 分鐘.

10.終止：每孔加終止液 50μl，終止反應(yīng)（此時(shí)藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色）。

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產(chǎn)品屬性：

產(chǎn)品名稱(chēng)：IHH印度刺猬因子酶聯(lián)免疫試劑盒

英文名稱(chēng)：IHH ELISA Kit

規(guī)格：48T/96

貨號(hào)：CS-2070E

主要成分：酶標(biāo)板,試劑,標(biāo)準(zhǔn)品等。

試劑盒種屬：馬鈴薯、鹿、羊、雞、鴨、魚(yú)、人、大鼠、小鼠、豚鼠、倉(cāng)鼠、裸鼠、兔子、豬、犬、猴、馬、牛等動(dòng)植物。

檢測(cè)目的：用于測(cè)定血清，血漿及相關(guān)液體等樣本。例如適合檢測(cè)包括血清、血漿、尿液、胸腹水、灌洗液、腦脊液、細(xì)胞培養(yǎng)上清、組織勻漿等標(biāo)本..

試劑盒組成及試劑配制：

1. 酶聯(lián)板（Assay plate ）：一塊（96孔）。

2. 標(biāo)準(zhǔn)品（Standard）：2瓶（凍干品）。

3. 樣品稀釋液（Sample Diluent）：1×20ml/瓶。

4. 標(biāo)記抗體稀釋液（Biotin-antibody Diluent）：1×10ml/瓶。

5. 辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記親和素稀釋液 （HRP-avidin Diluent）：1×10ml/瓶。

6. 標(biāo)記抗體（Biotin-antibody）：1×120μl/瓶（1：100）

7. 辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記親和素（HRP-avidin）：1×120μl/瓶（1：100）

8. 底物溶液（TMB Substrate）：1×10ml/瓶。

9. 濃洗滌液（Wash Buffer）：1×20ml/瓶，使用時(shí)每瓶用蒸餾水稀釋25倍。

10. 終止液（Stop Solution）：1×10ml/瓶（2N H2SO4）。

試劑準(zhǔn)備：

1. 使用前將所有的試劑和標(biāo)本緩慢均衡至室溫(18-25oC)，試劑不能直接在37oC溶解。

2. 標(biāo)準(zhǔn)品(凍干品)：每瓶標(biāo)準(zhǔn)品加入標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液1mL，蓋好后室溫靜置大約10分鐘，同時(shí)反復(fù)顛倒/搓動(dòng)以助溶解，其濃度為2000pg/mL。準(zhǔn)備7個(gè)稀釋標(biāo)準(zhǔn)品的EP管，每個(gè)EP管中加入150μL的標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液，如圖所示依次倍比稀釋成不同的梯度， 標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液(0pg/mL)直接作為空白孔。為保證實(shí)驗(yàn)結(jié)果有效性，每次實(shí)驗(yàn)請(qǐng)使用新的標(biāo)準(zhǔn)品溶液。

3. 濃洗滌液：用580mL蒸餾水或去離子水將20mL濃洗滌液稀釋至600mL，進(jìn)行30倍稀釋。

注意事項(xiàng)：

1.試劑盒使用前請(qǐng)保存在2-8℃。復(fù)溶后的標(biāo)準(zhǔn)品若未用完，請(qǐng)廢棄。

2. 微量試劑運(yùn)輸中顛簸和可能的倒置，會(huì)使液體沾到管壁或瓶蓋。因此使用前請(qǐng)1000轉(zhuǎn)/分離心1分鐘，以使附著管壁或瓶蓋的液體沉積到管底。

3. 從冰箱中取出的濃縮洗滌液可能有結(jié)晶,屬于正?，F(xiàn)象，微加熱至40℃使結(jié)晶*溶解后再配制洗滌液。

（加熱溫度不要超過(guò)50℃）使用時(shí)洗滌液應(yīng)為室溫。

4. 不同批號(hào)的試劑盒組份避免混用（洗滌液和反應(yīng)終止液除外）。

5. 充分輕微混勻?qū)Ψ磻?yīng)結(jié)果尤為重要，使用微量振蕩器(使用zui低頻率)，如無(wú)微量振蕩器，可在反應(yīng)孵育前手工輕輕混勻。

6. 在試驗(yàn)中標(biāo)準(zhǔn)品和樣本檢測(cè)時(shí)建議作雙孔檢測(cè)。

7. 試驗(yàn)中所用的試管和吸頭均為一次性使用，嚴(yán)禁在不同的液體之間混用！否則將影響試驗(yàn)結(jié)果。

8. 試驗(yàn)中請(qǐng)穿著試驗(yàn)服并帶乳膠手套做好防護(hù)工作。特別是檢測(cè)血液或者其他體液標(biāo)本時(shí)，請(qǐng)按國(guó)家生物試驗(yàn)室安全防護(hù)條列執(zhí)行。

1-萘乙酸 分析標(biāo)準(zhǔn)品過(guò)氧乙酸 21-25%sTNF Alpha－RI(humen)  人可溶性腫瘤壞死因子-受體1

1-萘乙酸（NAA)  for plant cell culture, ≥96%過(guò)氧乙酸 26-30%cAMP Human  人環(huán)腺苷

反-玉米素 98%過(guò)氧乙酸 31-35%sCD 40L Human  人可溶性表面分化抗原40配體

溴苯 99.5%過(guò)氧乙酸 36-40%cGMP Human  人環(huán)鳥(niǎo)苷

對(duì)溴甲苯 CP過(guò)氧乙酸 41-45%6Ckine /CCL21/SLC Human  人組織趨化性因子

苯 CP, ≥99%二氧化錳 AR,85%ENA human  人上皮誘導(dǎo)中型粘活化因子

AR，99.5%二氧化錳 CP,72%ENA-78 human  人趨化因子 ENA-78

環(huán)己烷 AR，99.5%二氧化錳 SPeNOS human  人內(nèi)皮型一氧化氮合成

IHH印度刺猬因子酶聯(lián)免疫試劑盒1,2:3,5-雙-O-異亞-alpha-D-呋喃木糖 98%Anti-Phospho-Smad1/5 (Ser463/465)/FITC  熒光素標(biāo)記化信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)分子Smad-1/5抗體IgG豬嗅素4(OLFM4)聯(lián)免疫吸附測(cè)定試劑盒

雙酮-D-甘露糖 97%Anti-Smad2/3 /FITC  熒光素標(biāo)記Smad 2/3抗體IgG豬XIV型膠原 (COL14)聯(lián)免疫吸附測(cè)定試劑盒

(R)-2，5-二氫-3，6-二氧-2-異吡 97%Anti-phospho-Smad2(p-Ser465) /FITC  熒光素標(biāo)記兔抗人、大、小鼠、牛，馬，犬，雞化Smad2抗體IgG豬因子受體樣因子1(CRLF1)聯(lián)免疫吸附測(cè)定試劑盒

(S)-2，5-二氫-3，6-二氧-2-異吡 97%Anti-Phospho-Smad2 (Ser465/467)/FITC  熒光素標(biāo)記化信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)分子SMAD2抗體IgG豬血型糖蛋白E(GYPE)聯(lián)免疫吸附測(cè)定試劑盒

2'-脫氧胸苷-5'-三三鈉,二水 96%Anti-Phospho-Smad2 (Ser245/250/255)/FITC  熒光素標(biāo)記化信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)分子SMAD2抗體IgG豬接觸蛋白相關(guān)蛋白樣蛋白4(CNTNAP4)聯(lián)免疫吸附測(cè)定試劑盒

N-癸酰-N-葡糖 高純級(jí)Anti-Phospho-Smad3 (Ser423/425) /FITC   熒光素標(biāo)記化信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)分子SMAD3抗體IgG豬著絲粒蛋白E(CENPE)聯(lián)免疫吸附測(cè)定試劑盒

D-(+)-塔羅糖 99%Anti-Smad4/FITC  熒光素標(biāo)記Smad4抗體IgG豬別孕烯酮 (AP)聯(lián)免疫吸附測(cè)定試劑盒

D-塔格糖  99%Anti-Smad7/FITC  熒光素標(biāo)記Smad 7抗體IgG豬酮脫氫α(PDHα)聯(lián)免疫吸附測(cè)定試劑盒

D-山梨糖 98%Anti-SMC1/FITC  熒光素標(biāo)記染色體結(jié)構(gòu)維持蛋白質(zhì)１抗體IgG豬纖α(FGα)聯(lián)免疫吸附測(cè)定試劑盒

D-半糖 97%Anti-Phospho-SMC1 (Ser360) /FITC  熒光素標(biāo)記化染色體結(jié)構(gòu)維持蛋白質(zhì)１抗體IgG豬生長(zhǎng)分化因子1(GDF1)聯(lián)免疫吸附測(cè)定試劑盒

1-甘露糖野尻霉素鹽鹽 98%Anti-Phospho-SMC1 (Ser957)/FITC  熒光素標(biāo)記化染色體結(jié)構(gòu)維持蛋白質(zhì)１抗體IgG豬補(bǔ)體因子B(CFB)聯(lián)免疫吸附測(cè)定試劑盒

2-脫氧-L-核糖 99%Anti-SMN1/FITC  熒光素標(biāo)記運(yùn)動(dòng)神經(jīng)元生存蛋白1抗體IgG豬色素b-561(CYB561)聯(lián)免疫吸附測(cè)定試劑盒

1-乙-(3-二氨)碳二亞鹽鹽 98.5% Anti-Snail/FITC  熒光素標(biāo)記抗Snail蛋白抗體IgG豬單氧化A(MAOA)聯(lián)免疫吸附測(cè)定試劑盒

D(+)巖藻糖 99%Anti-Snake poison Protein/FITC  熒光素標(biāo)記抗蛇蛋白抗體（蝮蛇）IgG豬紅生成素受體(EPOR)聯(lián)免疫吸附測(cè)定試劑盒

L-巖藻糖 99%Anti-Snake poison Protein/FITC  熒光素標(biāo)記抗蛇蛋白抗體（中華眼鏡蛇）IgG豬前動(dòng)力蛋白受體2(PKR2)聯(lián)免疫吸附測(cè)定試劑盒