上海莼試生物技術(shù)有限公司
主營(yíng)產(chǎn)品: ELISA試劑盒,ELISA試劑盒價(jià)格,ELISA試劑盒報(bào)價(jià) |
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參考價(jià) | 面議 |
- 型號(hào) 50T
- 品牌 其他品牌
- 廠商性質(zhì) 經(jīng)銷商
- 所在地 上海市
更新時(shí)間:2021-07-16 10:42:17瀏覽次數(shù):185
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參數(shù)規(guī)格:
產(chǎn)品名稱:豬瘟病毒(CSFV)定性PCR檢測(cè)試劑盒
產(chǎn)品貨號(hào):CP100118
產(chǎn)品規(guī)格:50T
產(chǎn)品分類:RT-PCR法
產(chǎn)品運(yùn)輸:低溫運(yùn)輸
產(chǎn)品保存:-20℃保存
產(chǎn)品有效期:一年
產(chǎn)品特點(diǎn):本產(chǎn)品就是根據(jù)保守區(qū)設(shè)計(jì)引物而開(kāi)發(fā)的高靈敏熒光定量 PCR 產(chǎn)品。
PCR反應(yīng)鑒定——PCR反應(yīng)條件:
循環(huán)步驟 | 溫度 | 時(shí)間 | 循環(huán)數(shù) |
預(yù)變性 | 94℃ | 5 min | 1 |
變性 | 94℃ | 10 sec | 30-40 |
退火 | 50-65℃ | 20 sec | 30-40 |
延伸 | 72℃ | 30 sec/kb | 30-40 |
終延伸 | 72℃ | 5 min | 1 |
實(shí)驗(yàn)過(guò)程:
一、試劑準(zhǔn)備
1. DNA模板
2.對(duì)應(yīng)目的基因的特異引物(在PCR反應(yīng)中,新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續(xù)按照模板DNA復(fù)制,而不能從無(wú)到有,憑空合成。這一小段序列就是你所要有設(shè)計(jì)的引物??梢允荄NA也可以是RNA,一般20多bp,需要根據(jù)你的模板鏈設(shè)計(jì)。因此,擴(kuò)增不同的基因需要設(shè)計(jì)不同的引物)
3.10×PCR Buffer
4.2mM dNTPmix:含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5.Taq酶
?
二、操作步驟
1.在冰浴中,按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o(wú)菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer 5μl
dNTP mixl 4μl
引物1(10pM) 2μl
引物2(10PM) 2μl
Taq酶(2U/μl) 1μl
DNA模板(50ng-1μg/μl) 1 μl
加ddH2O至 50 μl
視PCR儀有無(wú)熱蓋,不加或添加石蠟油。
2.調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心,立即置PCR儀上,執(zhí)行擴(kuò)增。一般:在93℃預(yù)變性3-5min,進(jìn)入循環(huán)擴(kuò)增階段:93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s,循環(huán)30-35次,zui后在72℃ 保溫7min。
3.結(jié)束反應(yīng),PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測(cè)或-20℃保存。
4.PCR的電泳檢測(cè):如在反應(yīng)管中加有石蠟油,需用100μlLuFang進(jìn)行抽提反應(yīng)混合液,以除去石蠟油;否則,直接取5-10μl電泳檢測(cè)。
實(shí)驗(yàn)注意事項(xiàng):
1)RT-PCR可以檢測(cè)組織、細(xì)胞、血液、細(xì)菌等很多材料,不同的樣本有不同要求,實(shí)驗(yàn)前請(qǐng)充分溝通確認(rèn)實(shí)驗(yàn)方案和樣本情況;
2)客戶盡可能提供實(shí)驗(yàn)的背景信息、物種、基因準(zhǔn)確的名稱和ID號(hào);
3)客戶盡量不要提供DNA或RNA樣品。
4)樣本保存于液氮或干冰,也可以保存于Trizol液中。
實(shí)時(shí)熒光定量PCR(quantitative real-time PCR,qPCR)是指在PCR反應(yīng)體系中加入熒光基團(tuán),利用熒光信號(hào)積累實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)整個(gè)PCR進(jìn)程,最后通過(guò)標(biāo)準(zhǔn)曲線對(duì)未知模板進(jìn)行定量分析的方法。實(shí)時(shí)熒光定量PCR的化學(xué)原理包括探針類和非探針類兩類,探針類是利用與靶細(xì)胞序列特異性雜交的探針來(lái)指示擴(kuò)增產(chǎn)物的增加,非探針類是利用熒光染料或者特異性設(shè)計(jì)的引物來(lái)指示擴(kuò)增的增加。運(yùn)用該技術(shù)可以對(duì)DNA、RNA樣品進(jìn)行定量(包括定量和相對(duì)定量)和定性分析。
主要服務(wù):DNA或RNA的定量分析、基因表達(dá)差異分析、基因分型。
主要技術(shù):引物設(shè)計(jì)、RNA提取、cDNA合成、qPCR。
銹赤蠟黃鏈霉菌12號(hào)染色體開(kāi)放閱讀框54抗體Human MFN2(Mitofusin-2) ELISA Kit降解產(chǎn)物(FDP)免疫試劑盒
慢生根瘤菌磷酸化鈣調(diào)節(jié)素抗體Human ILDR2(Immunoglobulin-like domain-containing receptor 2) ELISA Kitα鏈(FGA)免疫試劑盒
釀酒酵母分裂相關(guān)蛋白CSTF64抗體Human NPY(Neuropeptide Y) ELISA Kit(Fb)免疫試劑盒
泡盛曲霉磷酸化分裂相關(guān)蛋白CSTF64抗體Human VDAC1(Voltage-dependent anion-selective channel protein 1) ELISA Kit人纖溶抑制因子/激活的纖溶抑制物(TAFI)免疫試劑盒
馬沙門氏菌磷酸化分裂相關(guān)蛋白CSTF64抗體Human TP53 antibody(p53 antibody) ELISA Kit人纖溶酶原(Plg)免疫試劑盒
白黃馬賽菌CD3抗體Human Galactose-Deficient IgA1(Galactose-Deficient IgA1) ELISA Kit人纖溶酶抗纖溶酶復(fù)合物(PAP)免疫試劑盒
黃曲霉CD4抗體Human ENK(Enkephalin) ELISA Kit人纖溶酶/纖維蛋白溶酶(PL/Fbn)免疫試劑盒
芽孢桿菌白共同抗原抗體Human β-actin(Beta actin) ELISA Kit人纖連蛋白(FN)自身抗體免疫試劑盒
布魯塞爾德克酵母白共同抗原抗體Human AA(Arachidonic Acid) ELISA Kit人纖連蛋白(FN)免疫試劑盒
食有機(jī)物深海芽孢桿菌白共同抗原抗體Human MBP(myelin basic protein) ELISA Kit人纖調(diào)蛋白(FMOD)免疫試劑盒
卡門柏青霉間隙連接蛋白36抗體Human ACP(Acid phosphatase) ELISA Kit人細(xì)小病B19(B19V)抗體(IgM)免疫試劑盒
Methylibium12號(hào)染色體開(kāi)放閱讀框61抗體Human SOCS4(Suppressor Of Cytokine Signaling 4) ELISA Kit人周期素A2(Cyclin-A2)免疫試劑盒
釀酒酵母12號(hào)染色體開(kāi)放閱讀框63抗體Human CHAT(Choline O-acetyltransferase) ELISA Kit人周期蛋白依賴性激酶2(CDK2)免疫試劑盒
毛栓孔菌12號(hào)染色體開(kāi)放閱讀框68抗體Human HbsAg(hepatitis B virus Surface Antigen) ELISA Kit人周期蛋白A1(CCNA1)免疫試劑盒
類芽孢桿菌屬角蛋白15抗體Human IMPDH2(Inosine 5′-Monophosphate Dehydrogenase 2) ELISA Kit人因子信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)抑制因子3(SOCS-3)免疫試劑盒
氧化節(jié)桿菌1號(hào)染色體開(kāi)放閱讀框103抗體Human TPAb(Treponema pallidum antibody) ELISA Kit人因子信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)抑制因子1(SOCS-1)免疫試劑盒
豬瘟病毒(CSFV)定性PCR檢測(cè)試劑盒: 意大利青霉 質(zhì)量規(guī)格:HPLC>99%(干品),標(biāo)準(zhǔn)品基質(zhì)衍生因子1β試劑盒蝙蝠葛苷;Menisdaurin
鏈霉菌屬Streptomyces│sp. 質(zhì)量規(guī)格:>950μg/mg,BR基質(zhì)衍生因子1a試劑盒補(bǔ)骨脂寧;Corylin
芽孢桿菌屬Bacillus│sp. 質(zhì)量規(guī)格:效價(jià)測(cè)定基質(zhì)裂解蛋白/基質(zhì)溶素試劑盒白頭翁素;Anemonin
鐮孢Fusarium│sp. 質(zhì)量規(guī)格:>99%,USP基質(zhì)金屬蛋白酶組織抑制因子1試劑盒白樺脂;Betulinicaldehy
鞘氨醇單胞菌Sphingomonas│sp. 質(zhì)量規(guī)格:含量測(cè)定基質(zhì)金屬蛋白酶抑制因子4試劑盒;Phenylacetic aci
鹽生鹽古桿菌Halobacterium│halobuim 質(zhì)量規(guī)格:>900μg/mg,BR基質(zhì)金屬蛋白酶抑制因子3試劑盒α-菠甾-3-O-β-D-葡萄糖苷;α
使用方法:
一、樣品DNA的制備
用自選方法提取細(xì)菌樣品DNA。注意:DNA純化方法是決定檢測(cè)靈敏度的關(guān)鍵因素。如果不能很好純化樣品DNA,后面的PCR再靈敏也不能提高整體檢測(cè)靈敏度。
二、制備O157:H7標(biāo)準(zhǔn)曲線(以10-10E6這6個(gè)10倍稀釋度為例。由于標(biāo)準(zhǔn)品濃度非常高,因此下列稀釋操作一定要在獨(dú)立的區(qū)域進(jìn)行,千萬(wàn)不能污染樣品或本試劑盒的其他成分)。為增加產(chǎn)品穩(wěn)定性和避免擴(kuò)散傳染性病原,本產(chǎn)品不提供活體病毒做陽(yáng)性對(duì)照,只提供沒(méi)有傳染性的、可以直接使用的DNA片段作為陽(yáng)性對(duì)照。
1. 標(biāo)記6個(gè)離心管,分別為6,5,4,3,2和1號(hào)。
2. 用帶芯槍頭分別加入45 μL超純水(用帶芯槍頭,下同)。
3. 先將本試劑盒提供的陽(yáng)性對(duì)照用TE緩沖液或超純水10倍梯度稀釋到10E7拷貝/μL(注:請(qǐng)不要將本試劑盒提供的標(biāo)準(zhǔn)品一次性稀釋至10E7拷貝/μL,建議每次稀釋10倍,梯度稀釋至10E7拷貝/μL)。
4. 在6號(hào)管中加入5 μL 10E7拷貝/μL的O157:H7陽(yáng)性對(duì)照(上步稀釋所得),充分震蕩1分鐘,得10E6拷貝/μL的陽(yáng)性對(duì)照。
5. 換槍頭,從6號(hào)管中取5 μL溶液到5號(hào)管中,充分震蕩1分鐘,得10E5拷貝/μL的陽(yáng)性對(duì)照。
6. 換槍頭,從5號(hào)管中取5 μL溶液到4號(hào)管中,重復(fù)上面的操作直到得到6個(gè)稀釋度的陽(yáng)性對(duì)照。
7. NC管中不加任何陽(yáng)性對(duì)照。
8. 從1-6號(hào)管中分別取5 μL和待測(cè)樣品一起進(jìn)行定量PCR(見(jiàn)下步),每個(gè)樣品做3次重復(fù)。PCR后得到每個(gè)陽(yáng)性對(duì)照稀釋樣品的熒光PCR Ct值,并以之為縱軸,以濃度的對(duì)數(shù)值為橫軸,繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。