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公司產(chǎn)品僅用于科研以下是細(xì)胞的訂購信息：

英文簡稱：HCCS-2935細(xì)胞    

產(chǎn)品名稱：肺腺癌細(xì)胞

規(guī)格：T25

形態(tài)特性：上皮細(xì)胞

生長特性：貼壁生長

特征特性：

培養(yǎng)條件：RPMI1640+10%FBS

傳代方法： 1:4~1:6傳代；每周換液2~3次。

貨號(hào)：CS-X64041
細(xì)胞培養(yǎng)操作規(guī)程：
一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備：
1）準(zhǔn)備RPMI-1640培養(yǎng)基，90%；優(yōu)質(zhì)胎牛血清，10%。
2）培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37℃，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3）凍存液：90%血清，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配，液氮儲(chǔ)存。
二．細(xì)胞處理：
1）復(fù)蘇細(xì)胞：將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于凍存管蓋部）搖晃解凍，移入事先準(zhǔn)備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。
2）細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
對(duì)于懸浮細(xì)胞，傳代可參考以下方法：
方法一：收集細(xì)胞，1000RPM，常溫條件下離心5分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻，將細(xì)胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。

細(xì)胞培養(yǎng)的優(yōu)點(diǎn)：
1.研究的對(duì)象是活細(xì)胞
在實(shí)驗(yàn)過程中，根據(jù)要求可始終保持細(xì)胞活力，并可長時(shí)間監(jiān)控、檢測甚至定量評(píng)估一部分活細(xì)胞的情況，包括活細(xì)胞的形態(tài)、結(jié)構(gòu)、生命活動(dòng)等。
2.研究條件可以人為控制
pH、溫度、氧氣、二氧化碳、張力等物理化學(xué)的條件，可以根據(jù)實(shí)際需要進(jìn)行人為的控制，同時(shí)，可以施加化學(xué)、物理、生物等因素作為條件而進(jìn)行實(shí)驗(yàn)觀察，這些因素同樣可以處于嚴(yán)格控制之下。
3.研究的樣本可以達(dá)到比較均一性
通過細(xì)胞培養(yǎng)一定代數(shù)后，所得到的細(xì)胞系則可以達(dá)到均一性而屬于同一類型的細(xì)胞，需要時(shí)，可采用克隆化等方法使細(xì)胞達(dá)到純化。
4.研究內(nèi)容便于觀察、檢測和記錄
采用各種研究技術(shù)：如倒置生物顯微鏡、熒光顯微鏡、電子顯微鏡、流式細(xì)胞術(shù)、激光共焦顯微鏡、免疫組織化學(xué)、原位雜交、同位素標(biāo)記等各種儀器設(shè)備。

注意事項(xiàng)：
（1）凍存前細(xì)胞狀態(tài)，細(xì)胞在對(duì)數(shù)生，細(xì)胞密度適合，剛剛發(fā)生細(xì)胞融合，過密或連成片的細(xì)胞狀態(tài)不好，而且消化時(shí)不容易分散；
（2）凍存的密度不宜過低，10的6次方-7次方的數(shù)量級(jí)比較好，我凍存的細(xì)胞一般T25培養(yǎng)瓶（5*107），一瓶凍一管（1.5ml凍存管），10cm培養(yǎng)皿（大概10的8次方個(gè)細(xì)胞）分成兩管。
（3）消化和吹打，切忌消化過度，吹打不可太用力，不要吹出好多泡泡。消化后立即加入*培養(yǎng)基吹打哦，不是加入凍存液再吹打。
（4）離心后加入凍存液。凍存液中FBS的用量對(duì)于腫瘤細(xì)胞株而言要求不是很嚴(yán)格，我從10%-90%都用過，問題不大，個(gè)人認(rèn)為10%-20%可以了，能節(jié)約處就節(jié)約點(diǎn)嘛！另外，凍存液可以在處理細(xì)胞前配置，放在4度冰箱預(yù)冷。細(xì)胞離心后直接用預(yù)冷的凍存液重懸，移入凍存管。
（5）關(guān)于“慢凍"，傳統(tǒng)的方法，LLC細(xì)胞凍存管用棉花包好，4度2h，-20度2h或更長，-80度過夜，最后液氮。對(duì)于條件較好的實(shí)驗(yàn)室和細(xì)胞凍存數(shù)量多的實(shí)驗(yàn)室，使用程序降溫盒，內(nèi)裝異丙醇，在-80度并內(nèi)可以逐漸降溫，很方便，省了包棉花、4度、-20度了。
基質(zhì)金屬蛋白酶10(MMP10)檢測試劑盒英文名稱：MMP10 ELISA Kit7號(hào)染色體開放閱讀框59抗體包裝5MG

基質(zhì)金屬蛋白酶1(MMP1)檢測試劑盒英文名稱：MMP1 ELISA Kit7號(hào)染色體開放閱讀框64抗體包裝250mg

肌原纖蛋白1(FBN1)檢測試劑盒英文名稱：FBN1 ELISA Kit8號(hào)染色體開放閱讀框12抗體包裝1g

肌營養(yǎng)不良蛋白關(guān)聯(lián)糖蛋白1(DAG1)檢測試劑盒英文名稱：DAG1 ELISA Kit8號(hào)染色體開放閱讀框31抗體包裝250mg

肌營養(yǎng)不良蛋白(DMD)檢測試劑盒英文名稱：DMD ELISA Kit8號(hào)染色體開放閱讀框33抗體包裝5g

肌細(xì)胞生成素(MYOG)檢測試劑盒英文名稱：MYOG ELISA KitⅡ型膠原蛋白抗體包裝100g

肌微管素相關(guān)蛋白9(MTMR9)檢測試劑盒英文名稱：MTMR9 ELISA Kit軟骨蛋白1抗體包裝25g

肌肽合酶1(CARNS1)檢測試劑盒英文名稱：CARNS1 ELISA Kit顱面部發(fā)育蛋白1抗體包裝500g

肌酸激酶MB同工酶(CKMB)檢測試劑盒英文名稱：CKMB ELISA Kit肥大羧肽酶A3抗體包裝1g

肌肉生長抑制素(MSTN)檢測試劑盒英文名稱：MSTN ELISA Kit1號(hào)染色體開放閱讀框105抗體包裝250mg

肌球蛋白重鏈4(MYH4)檢測試劑盒英文名稱：MYH4 ELISA KitⅠ型補(bǔ)體受體抗體（C3b/C4b受體抗體）包裝5g

肌球蛋白重鏈2(MYH2)檢測試劑盒英文名稱：MYH2 ELISA Kit趨化樣因子受體1抗體包裝1g

肌球蛋白重鏈1(MYH1)檢測試劑盒英文名稱：MYH1 ELISA Kit趨化樣因子受體1抗體包裝1g

肌球蛋白ⅤA(MYO5A)檢測試劑盒英文名稱：MYO5A ELISA Kit磷酸化β-連環(huán)蛋白/β-連環(huán)素/β鏈接素抗體包裝1g

肌球蛋白ⅠA(MYO1A)檢測試劑盒英文名稱：MYO1A ELISA Kit磷酸化β-連環(huán)蛋白/β-連環(huán)素/β鏈接素抗體包裝250mg
HCCS-2935細(xì)胞骨粘連蛋白(ON)檢測試劑盒英文名稱：ON ELISA Kitβ淀粉樣肽（1-28）抗體包裝5g

骨形成蛋白6(BMP-6)檢測試劑盒英文名稱：BMP-6 ELISA Kit有絲分裂激酶B抗體包裝5g

骨形成蛋白(BMPs)檢測試劑盒英文名稱：BMPs ELISA Kit軟骨蛋白聚糖抗體包裝25g

骨涎蛋白(BSP)檢測試劑盒英文名稱：BSP ELISA Kit去整合素樣金屬蛋白酶10抗體包裝5g

骨退化特異標(biāo)志物(CTX-2)檢測試劑盒英文名稱：CTX-2 ELISA Kit含錨蛋白重復(fù)序列-因子信號(hào)抑制物盒蛋白家族9抗體包裝100mg

骨特異性堿性磷酸酶B(ALP-B)檢測試劑盒英文名稱：ALP-B ELISA Kit含錨蛋白重復(fù)序列-因子信號(hào)抑制物盒蛋白家族8抗體包裝1ml

骨特性堿性磷酸酶(BALP)檢測試劑盒英文名稱：BALP ELISA Kit植物生長ABP1抗體包裝25ml

骨橋素(OPN)檢測試劑盒英文名稱：OPN ELISA Kit肌動(dòng)蛋白相關(guān)蛋白1抗體包裝5ml

骨膠原交聯(lián)(Cr)檢測試劑盒英文名稱：Cr ELISA Kitα紅分化相關(guān)因子抗體包裝1g

骨鈣素/骨蛋白(OT/BGP)檢測試劑盒英文名稱：OT/BGP ELISA Kit血管緊張素激活蛋白1抗體包裝5g

骨鈣素(OT)檢測試劑盒英文名稱：OT ELISA KitAlpha清蛋白抗體包裝1g

骨鈣素(BGP)檢測試劑盒英文名稱：BGP ELISA KitAFAP1L2抗體包裝1g

骨成型蛋白受體Ⅱ(BMPR-Ⅱ)檢測試劑盒英文名稱：BMPR-Ⅱ ELISA Kit神經(jīng)分化相關(guān)蛋白AHNAK抗體包裝5MG

骨成型蛋白受體1A(BMPR-1A)檢測試劑盒英文名稱：BMPR-1A ELISA Kit粘合連接相關(guān)蛋白1抗體包裝1g

骨成型蛋白9(BMP-9)檢測試劑盒英文名稱：BMP-9 ELISA Kit去整合素樣金屬蛋白酶13抗體包裝5g
實(shí)驗(yàn)報(bào)告
一、產(chǎn)分離與培養(yǎng)：
   1、無菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，最后將成1mm3左右大?。?/span>
   2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置；
   3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復(fù)此步驟2-3次，直至組織*被消化；
   4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細(xì)胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細(xì)胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸，接種于25cm2培養(yǎng)瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；
   5、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基，按實(shí)驗(yàn)需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)；
二、免疫熒光鑒定：
   1、待心房肌細(xì)胞生長至80%融合時(shí)，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min；
   2、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；
   3、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細(xì)胞30min；
   4、按1: 100的比例稀釋?duì)?actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過夜；
   5、PBS沖洗細(xì)胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；
   6、用PBS沖洗3次，每次10min，最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。