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實(shí)時(shí)熒光定量PCR（quantitative real-time PCR，qPCR）是指在PCR反應(yīng)體系中加入熒光基團(tuán)，利用熒光信號(hào)積累實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)整個(gè)PCR進(jìn)程，最后通過標(biāo)準(zhǔn)曲線對(duì)未知模板進(jìn)行定量分析的方法。實(shí)時(shí)熒光定量PCR的化學(xué)原理包括探針類和非探針類兩類，探針類是利用與靶細(xì)胞序列特異性雜交的探針來指示擴(kuò)增產(chǎn)物的增加，非探針類是利用熒光染料或者特異性設(shè)計(jì)的引物來指示擴(kuò)增的增加。運(yùn)用該技術(shù)可以對(duì)DNA、RNA樣品進(jìn)行定量（包括定量和相對(duì)定量）和定性分析。
主要服務(wù)：DNA或RNA的定量分析、基因表達(dá)差異分析、基因分型。
主要技術(shù)：引物設(shè)計(jì)、RNA提取、cDNA合成、qPCR。
參數(shù)規(guī)格：
產(chǎn)品名稱：基孔肯雅病毒(CHIKV)PCR檢測(cè)試劑盒
產(chǎn)品貨號(hào)：CP99968
產(chǎn)品規(guī)格：50T
產(chǎn)品分類：熒光-PCR法
產(chǎn)品運(yùn)輸：低溫運(yùn)輸
產(chǎn)品保存：-20℃保存
產(chǎn)品有效期：一年
產(chǎn)品特點(diǎn)：本產(chǎn)品就是根據(jù)保守區(qū)設(shè)計(jì)引物而開發(fā)的高靈敏熒光定量 PCR 產(chǎn)品。
PCR反應(yīng)鑒定——PCR反應(yīng)條件:

實(shí)驗(yàn)過程：
一、試劑準(zhǔn)備
1. DNA模板
2．對(duì)應(yīng)目的基因的特異引物（在PCR反應(yīng)中，新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續(xù)按照模板DNA復(fù)制，而不能從無到有，憑空合成。這一小段序列就是你所要有設(shè)計(jì)的引物?？梢允荄NA也可以是RNA，一般20多bp，需要根據(jù)你的模板鏈設(shè)計(jì)。因此，擴(kuò)增不同的基因需要設(shè)計(jì)不同的引物）
3．10×PCR Buffer
4．2mM dNTPmix：含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5．Taq酶
?
二、操作步驟
1．在冰浴中，按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。
      10×PCR buffer             5μl
      dNTP mixl                 4μl
      引物1（10pM）               2μl
      引物2（10PM）              2μl
      Taq酶（2U/μl）            1μl
      DNA模板（50ng-1μg/μl）　　　 1 μl
     加ddH2O至               50 μl
     視PCR儀有無熱蓋，不加或添加石蠟油。
2．調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上，執(zhí)行擴(kuò)增。一般：在93℃預(yù)變性3-5min，進(jìn)入循環(huán)擴(kuò)增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循環(huán)30-35次，zui后在72℃ 保溫7min。
3．結(jié)束反應(yīng)，PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測(cè)或-20℃保存。
4．PCR的電泳檢測(cè)：如在反應(yīng)管中加有石蠟油，需用100μlLuFang進(jìn)行抽提反應(yīng)混合液，以除去石蠟油；否則，直接取5-10μl電泳檢測(cè)。
實(shí)驗(yàn)注意事項(xiàng)：
1）RT-PCR可以檢測(cè)組織、細(xì)胞、血液、細(xì)菌等很多材料，不同的樣本有不同要求，實(shí)驗(yàn)前請(qǐng)充分溝通確認(rèn)實(shí)驗(yàn)方案和樣本情況；
2）客戶盡可能提供實(shí)驗(yàn)的背景信息、物種、基因準(zhǔn)確的名稱和ID號(hào)；
3）客戶盡量不要提供DNA或RNA樣品。
4）樣本保存于液氮或干冰，也可以保存于Trizol液中。
使用方法：
一、樣品DNA的制備
用自選方法提取細(xì)菌樣品DNA。注意：DNA純化方法是決定檢測(cè)靈敏度的關(guān)鍵因素。如果不能很好純化樣品DNA，后面的PCR再靈敏也不能提高整體檢測(cè)靈敏度。
二、制備O157:H7標(biāo)準(zhǔn)曲線（以10-10E6這6個(gè)10倍稀釋度為例。由于標(biāo)準(zhǔn)品濃度非常高，因此下列稀釋操作一定要在獨(dú)立的區(qū)域進(jìn)行，千萬不能污染樣品或本試劑盒的其他成分）。為增加產(chǎn)品穩(wěn)定性和避免擴(kuò)散傳染性病原，本產(chǎn)品不提供活體病毒做陽性對(duì)照，只提供沒有傳染性的、可以直接使用的DNA片段作為陽性對(duì)照。
1. 標(biāo)記6個(gè)離心管，分別為6，5，4，3，2和1號(hào)。
2. 用帶芯槍頭分別加入45 μL超純水（用帶芯槍頭，下同）。
3. 先將本試劑盒提供的陽性對(duì)照用TE緩沖液或超純水10倍梯度稀釋到10E7拷貝/μL（注：請(qǐng)不要將本試劑盒提供的標(biāo)準(zhǔn)品一次性稀釋至10E7拷貝/μL，建議每次稀釋10倍，梯度稀釋至10E7拷貝/μL）。
4. 在6號(hào)管中加入5 μL 10E7拷貝/μL的O157:H7陽性對(duì)照(上步稀釋所得)，充分震蕩1分鐘，得10E6拷貝/μL的陽性對(duì)照。
5. 換槍頭，從6號(hào)管中取5 μL溶液到5號(hào)管中，充分震蕩1分鐘，得10E5拷貝/μL的陽性對(duì)照。
6. 換槍頭，從5號(hào)管中取5 μL溶液到4號(hào)管中，重復(fù)上面的操作直到得到6個(gè)稀釋度的陽性對(duì)照。
7. NC管中不加任何陽性對(duì)照。
8. 從1-6號(hào)管中分別取5 μL和待測(cè)樣品一起進(jìn)行定量PCR（見下步），每個(gè)樣品做3次重復(fù)。PCR后得到每個(gè)陽性對(duì)照稀釋樣品的熒光PCR Ct值，并以之為縱軸，以濃度的對(duì)數(shù)值為橫軸，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。
短裙竹蓀3-3ADP核糖基化因子結(jié)合蛋白2抗體Human HSD17B2 ELISA Kit小鼠骨成型蛋白受體1A(BMPR-1A)免疫試劑盒

紡錘形擬酵母加壓素受體2抗體Human HSD17B4 ELISA Kit小鼠骨成型蛋白9(BMP-9)免疫試劑盒

蒂莫內(nèi)馬賽菌凋亡相關(guān)斑點(diǎn)樣蛋白ASC抗體Human HSD17B6 ELISA Kit小鼠骨成型蛋白7(BMP-7)免疫試劑盒

蘋果鏈格孢絲狀肌動(dòng)蛋白結(jié)合蛋白抗體Human HIST2H2AA4 ELISA Kit小鼠骨成型蛋白4(BMP-4)免疫試劑盒

長(zhǎng)雙歧桿菌抗3抗體Human HMCN1 ELISA Kit小鼠骨成型蛋白2(BMP-2)免疫試劑盒

發(fā)酵假絲酵母人血清白蛋白單克隆抗體Human Histone-H3 ELISA Kit小鼠骨成型蛋白15(BMP-15)免疫試劑盒

牡丹葡萄孢載脂蛋白A4抗體Human HIST3H2A ELISA Kit小鼠骨保護(hù)素(OPG)免疫試劑盒

黃色桿菌磷酸化Rho鳥苷酸交換因子2抗體Human HIGD1A ELISA Kit小鼠過氧化酶(GSH-Px)免疫試劑盒

百脈根中間根瘤菌磷酸化絲狀肌動(dòng)蛋白結(jié)合蛋白抗體Human HIGD1B ELISA Kit小鼠脫羧酶自身抗體IgM(GAD-Ab-IgM)免疫試劑盒

天藍(lán)色鏈霉菌肌動(dòng)蛋白相關(guān)蛋白2/3亞型1A抗體Human HIVEP1 ELISA Kit小鼠脫羧酶自身抗體IgG(GAD-Ab-IgG)免疫試劑盒

支氣管敗血波氏菌錨蛋白重復(fù)結(jié)構(gòu)域蛋白32抗體Human Hikeshi ELISA Kit小鼠脫氫酶(GDH/GLDH)免疫試劑盒

糞產(chǎn)堿菌糞亞種共濟(jì)失調(diào)7樣蛋白3B抗體Human HERC4 ELISA Kit小鼠孤腓肽(OFQ/N)免疫試劑盒

平菇(科大雜優(yōu))感染性蛋白蛋白1抗體Human HEPACAM ELISA Kit小鼠鉤端螺旋體IgG(Lep IgG)免疫試劑盒

釀酒酵母含錨蛋白重復(fù)序列-因子信號(hào)抑制物盒蛋白家族5抗體Human HIGD1B ELISA Kit小鼠睪酮(T)免疫試劑盒

污泥根瘤菌植物生長(zhǎng)激素ABP1抗體Human HEPACAM ELISA Kit小鼠高鐵血紅蛋白(MHB)免疫試劑盒

鴨疫里氏桿菌磷酸化活化復(fù)制因子2抗體Human Hikeshi ELISA Kit小鼠高遷移率族蛋白B1(HMGB-1)免疫試劑盒
基孔肯雅病毒(CHIKV)PCR檢測(cè)試劑盒蘇云金芽孢桿菌日本亞種Bacillus│thuringiensis subsp. japanensis et al. 質(zhì)量規(guī)格：HPLC>98%,標(biāo)準(zhǔn)品溶血血小板活化因子試劑盒;Oleanic acid

動(dòng)性微菌Planomicrobium│sp. 質(zhì)量規(guī)格：HPLC>98%,USP溶酶體相關(guān)膜蛋白2試劑盒芹菜素;Apigenin

白靈菇Pleurotus│nebrodensis 質(zhì)量規(guī)格：>98%,USP試劑盒蒲公英甾醋酸酯;Taraxastery

高溫放線菌屬Thermoactinomyces│sp. 質(zhì)量規(guī)格：>98%,BR絨毛膜試劑盒普拉洛芬;Pranoprofen

藻瑚菌Multiclavula│mucida (Pers.) R.H. Petersen 質(zhì)量規(guī)格：HPLC>99%,標(biāo)準(zhǔn)品相關(guān)血漿蛋白A試劑盒派利文堿;Perivine

安卡紅曲Monascus│anka 質(zhì)量規(guī)格：>98.5%,USP,BR特異性蛋白B試劑盒霹靂蘿芙木堿;Perakine

青霉Penicillium│sp. 質(zhì)量規(guī)格：HPLC>98%,標(biāo)準(zhǔn)品特異性β1糖蛋白4試劑盒β-蒎烯;beta-Pinene

平菇pleurotus│sp. 質(zhì)量規(guī)格：干品含量>98%,USP32特異性β1糖蛋白試劑盒蘋果酸;Malic acid

大島芽孢桿菌Bacillus│oshimensis 質(zhì)量規(guī)格：HPLC>98%,標(biāo)準(zhǔn)品皰疹抗體試劑盒葡萄糖;D(+)-Glucose