上海莼試生物技術(shù)有限公司
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更新時間:2017-06-01 08:20:22瀏覽次數(shù):383
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公司是*的ATCC細胞供應商,提供人葡萄膜黑色素細胞;UM的報價,咨詢,稱技術(shù)服務,咨詢選購。
細胞名稱 人葡萄膜黑色素細胞;UM
形態(tài)特性 多角
生長特性 貼壁生長
特征特性
培養(yǎng)條件 F12: Ham's F12 Nutrient Mixture 10%FBS;bFGF,霍亂毒素,異丁基甲基黃嘌呤IBMX4.4mg/200ml
傳代方法 1:3傳代;3~4天1次。
傳代情況 P5
凍存條件 基礎(chǔ)培養(yǎng)基+5%DMSO+20%FBS
支原體檢測 培養(yǎng)法(-)
STR Amelogenin:X,Y;CSF1PO:10,12;D13S317:10,11;D16S539:9,11,12;D18S51:13,15,16;D19S433:13,16.2;D21S11:28,30,31.2;D2S1338:17,OL,19,22;D3S1358:15;D5S818:9,11;D7S820:10,11,12;D8S1179:10,12,14;FGA:24;TH01:9,9.3;TPOX:9,11;vWA:17,18;
同工酶
染色體
使用權(quán)限 A類
培養(yǎng)需要滿足以下條件
1、無菌、無毒的環(huán)境:首先應保證被培養(yǎng)的細胞處于無菌、無毒的環(huán)境,即對培養(yǎng)液和所有的培養(yǎng)用具進行無菌處理。通常還要在培養(yǎng)液中添加一定量的抗生素以防培養(yǎng)過程中的污染。
2、營養(yǎng)物質(zhì):細胞體外培養(yǎng)所需營養(yǎng)物質(zhì)與體內(nèi)基本相同,需要有葡萄糖、氨基酸、促生長因子、無機鹽、微量元素等。通常還需加入血清、血漿等一些天然成分。
3、溫度和pH:細胞體外培養(yǎng)的適宜溫度一般與動物的體溫相近。多數(shù)細胞生存的適宜pH為7.2~7.4。
4、氣體環(huán)境:培養(yǎng)所需氣體主要有O2和CO2,O2是細胞代謝所必需的,CO2的主要作用是維持培養(yǎng)液的pH。進行細胞培養(yǎng)時,通常采用培養(yǎng)皿或松蓋培養(yǎng)瓶,將其置于含95%空氣加5% CO2的混合氣體的培養(yǎng)箱中進行培養(yǎng)。
操作步驟:
1. 將無菌的蓋玻片置于細胞培養(yǎng)皿中,將細胞懸液接種于培養(yǎng)皿中進行細胞爬片,待細胞長至80%時取出爬片。
2. 用PBS浸洗爬片3次,4%的多聚甲醛固定爬片15min,再次用PBS浸洗玻片3次,每次3min。
3. 0.5% Triton X-100(PBS配制)室溫孵育爬片20min,使細胞通透。
4. 3% H2O2滴加爬片上以阻斷內(nèi)源性過氧化物酶,室溫孵育15min(一般用甲醇或蒸餾水稀釋30%過氧化氫),PBS沖洗3次,每次3min。
5. 封閉血清室溫孵育20min,PBS沖洗3次,每次3min。
6. 細胞特異性一抗孵育:按照抗體說明書稀釋比例稀釋好一抗,滴加在爬片上,于4°C濕盒中孵育一夜,PBS沖洗3次,每次3min。
7. 二抗孵育:選與一抗對應的二抗,按比例稀釋后滴加在爬片上,37°C濕盒中孵育30min,PBS沖洗3次,每次3min。
8. 將爬片周圍水漬吸干,爬片上滴加新鮮配制的DAB顯色液,顯微鏡下觀察,當出現(xiàn)棕黃色或棕褐色的陽性信號時用蒸餾水沖洗終止顯色。
9. 復染:用Harris蘇木素復染30s~1min,水洗后用1%的鹽酸酒精分化,再用蒸餾水(或PBS)水洗返藍。
10. 封片:將中性樹膠滴在爬片一側(cè),再用蓋玻片蓋上,先放平蓋玻片一側(cè)再輕輕放下另一側(cè),以免產(chǎn)生氣泡,封好的爬片平放置于通風廚中晾干。
11. 鏡檢觀察。
PKM cDNA Human 人 PKM2 基因全長ORF克隆 (表達載體), 帶HA標簽
PPIB cDNA Human 人 PPIB 基因全長ORF克隆 (表達載體), 帶FLAG標簽
TGFB1 cDNA Human 人 TGF-beta 1 基因全長ORF克隆 (表達載體), 帶HA標簽
TGFB1 cDNA Human 人 TGF-beta 1 基因全長ORF克隆 (表達載體), 帶His標簽
KLRK1 cDNA Human 人 KLRK1 / CD314 / NKG2D 基因全長ORF克隆 (表達載體), 無標簽
PDGFB cDNA Human 人 PDGF-B 基因全長ORF克隆 (表達載體), 帶His標簽
PDGFB cDNA Human 人 PDGF-B 基因全長ORF克隆 (表達載體), 帶FLAG標簽
HMGB1 cDNA Human 人 HMGB1 / HMG1 基因全長ORF克隆 (表達載體), 帶His標簽
IL1B cDNA Human 人 IL1F2 / IL1B 基因全長ORF克隆 (表達載體), 無標簽
HAVCR1 cDNA Mouse 小鼠 HAVCR1 / TIM1 / TIMD1 基因全長ORF克隆 (表達載體), 無標簽
EPYC cDNA Human 人 EPYC 基因全長ORF克隆 (表達載體), 帶His標簽
RAMP3 cDNA Human 人 RAMP3 基因全長ORF克隆 (表達載體), 無標簽
HAVCR1 cDNA Human 人 HAVCR1 / TIM1 / TIMD1 基因全長ORF克隆 (表達載體), 無標簽
HPX cDNA Human 人 HPX 基因全長ORF克隆 (表達載體), 帶HA標簽
CD40LG cDNA Human 人 CD40L / TNFSF5 基因全長ORF克隆 (表達載體), 無標簽
NRP1 cDNA Human 人 Neuropilin-1 轉(zhuǎn)錄變體2 基因全長ORF克隆 (表達載體), 帶Myc標簽
EGFR cDNA Human 人 EGFR 基因全長ORF克隆 (表達載體), 帶HA標簽
EGFR cDNA Human 人 EGFR 基因全長ORF克隆 (表達載體), 無標簽
EGFR cDNA Human 人 EGFR 基因全長ORF克隆 (表達載體), 帶His標簽
EGFR cDNA Human 人 EGFR 基因全長ORF克隆 (表達載體), 帶FLAG標簽
CD180 cDNA Human 人 CD180 基因全長ORF克隆 (表達載體), 帶His標簽
TLR6 cDNA Human 人 TLR6 基因全長ORF克隆 (表達載體), 帶FLAG標簽
TNFRSF8 cDNA Human 人 CD30 / TNFRSF8 基因全長ORF克隆 (表達載體), 無標簽