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公司是*的ATCC細(xì)胞供應(yīng)商，提供荷蘭黑白花奶牛牛肺細(xì)胞；DCL1的報(bào)價(jià)，咨詢，稱技術(shù)服務(wù)，咨詢選購(gòu)。
細(xì)胞名稱     荷蘭黑白花奶牛牛肺細(xì)胞；DCL1        
形態(tài)特性      成纖維細(xì)胞樣        
生長(zhǎng)特性     貼壁生長(zhǎng)        
特征特性      該細(xì)胞系來(lái)源于一雄性荷蘭黑白花奶牛的肺組織。1990年由中科院昆明細(xì)胞庫(kù)建立。         
培養(yǎng)條件      McCoy's 5A Media (Modified with Tricine)  15%NBS        
傳代方法      1:2傳代；3-4天一次        
傳代情況     P4        
凍存條件      基礎(chǔ)培養(yǎng)基+5%DMSO+20%FBS         
支原體檢測(cè)     熒光法（-）         
STR      -        
同工酶             
染色體     
培養(yǎng)需要滿足以下條件
1、無(wú)菌、無(wú)毒的環(huán)境：首先應(yīng)保證被培養(yǎng)的細(xì)胞處于無(wú)菌、無(wú)毒的環(huán)境，即對(duì)培養(yǎng)液和所有的培養(yǎng)用具進(jìn)行無(wú)菌處理。通常還要在培養(yǎng)液中添加一定量的抗生素以防培養(yǎng)過(guò)程中的污染。

2、營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)：細(xì)胞體外培養(yǎng)所需營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)與體內(nèi)基本相同，需要有葡萄糖、氨基酸、促生長(zhǎng)因子、無(wú)機(jī)鹽、微量元素等。通常還需加入血清、血漿等一些天然成分。

3、溫度和pH：細(xì)胞體外培養(yǎng)的適宜溫度一般與動(dòng)物的體溫相近。多數(shù)細(xì)胞生存的適宜pH為7.2～7.4。

4、氣體環(huán)境：培養(yǎng)所需氣體主要有O2和CO2，O2是細(xì)胞代謝所必需的，CO2的主要作用是維持培養(yǎng)液的pH。進(jìn)行細(xì)胞培養(yǎng)時(shí)，通常采用培養(yǎng)皿或松蓋培養(yǎng)瓶，將其置于含95%空氣加5% CO2的混合氣體的培養(yǎng)箱中進(jìn)行培養(yǎng)。

操作步驟：
1. 將無(wú)菌的蓋玻片置于細(xì)胞培養(yǎng)皿中，將細(xì)胞懸液接種于培養(yǎng)皿中進(jìn)行細(xì)胞爬片，待細(xì)胞長(zhǎng)至80%時(shí)取出爬片。
2. 用PBS浸洗爬片3次，4%的多聚甲醛固定爬片15min，再次用PBS浸洗玻片3次，每次3min。
3. 0.5% Triton X-100（PBS配制）室溫孵育爬片20min，使細(xì)胞通透。
4. 3% H2O2滴加爬片上以阻斷內(nèi)源性過(guò)氧化物酶，室溫孵育15min（一般用甲醇或蒸餾水稀釋30%過(guò)氧化氫），PBS沖洗3次，每次3min。
5. 封閉血清室溫孵育20min，PBS沖洗3次，每次3min。
6. 細(xì)胞特異性一抗孵育：按照抗體說(shuō)明書稀釋比例稀釋好一抗，滴加在爬片上，于4°C濕盒中孵育一夜，PBS沖洗3次，每次3min。
7. 二抗孵育：選與一抗對(duì)應(yīng)的二抗，按比例稀釋后滴加在爬片上，37°C濕盒中孵育30min，PBS沖洗3次，每次3min。
8. 將爬片周圍水漬吸干，爬片上滴加新鮮配制的DAB顯色液，顯微鏡下觀察，當(dāng)出現(xiàn)棕黃色或棕褐色的陽(yáng)性信號(hào)時(shí)用蒸餾水沖洗終止顯色。
9. 復(fù)染：用Harris蘇木素復(fù)染30s~1min，水洗后用1%的鹽酸酒精分化，再用蒸餾水（或PBS）水洗返藍(lán)。
10. 封片：將中性樹(shù)膠滴在爬片一側(cè)，再用蓋玻片蓋上，先放平蓋玻片一側(cè)再輕輕放下另一側(cè)，以免產(chǎn)生氣泡，封好的爬片平放置于通風(fēng)廚中晾干。
11. 鏡檢觀察。

F9     cDNA    Mouse    小鼠 F9 / FIX 基因全長(zhǎng)ORF克隆
ITK     cDNA    Mouse    小鼠 ITK Kinase 基因全長(zhǎng)ORF克隆
ANGPTL6     cDNA    Mouse    小鼠 ANGPTL6 基因全長(zhǎng)ORF克隆
ITGB2     cDNA    Mouse    小鼠 ITGB2 基因全長(zhǎng)ORF克隆
CCL9     cDNA    Mouse    小鼠 CCL9 基因全長(zhǎng)ORF克隆
ANGPTL4     cDNA    Mouse    小鼠 Angiopoietin-like4 基因全長(zhǎng)ORF克隆
ITGB7     cDNA    Mouse    小鼠 ITGB7 基因全長(zhǎng)ORF克隆
CXCL5     cDNA    Mouse    小鼠 CXCL5 基因全長(zhǎng)ORF克隆
TNFRSF13C     cDNA    Mouse    小鼠 BAFFR / TNFRSF13C 基因全長(zhǎng)ORF克隆
TNFSF13B     cDNA    Mouse    小鼠 BAFF / TNFSF13B 基因全長(zhǎng)ORF克隆
BID     cDNA    Mouse    小鼠 BID 基因全長(zhǎng)ORF克隆
CA4     cDNA    Mouse    小鼠 CA IV 基因全長(zhǎng)ORF克隆
TNF     cDNA    Mouse    小鼠 TNFα 基因全長(zhǎng)ORF克隆
PRKCD     cDNA    Mouse    小鼠 PKC delta / PRKCD 基因全長(zhǎng)ORF克隆
F2     cDNA    Mouse    小鼠 F2 / FII 基因全長(zhǎng)ORF克隆
TNFSF11     cDNA    Mouse    小鼠 TNFSF11 / CD254 基因全長(zhǎng)ORF克隆
CCL21C     cDNA    Mouse    小鼠 CCL21C 基因全長(zhǎng)ORF克隆
BTC     cDNA    Mouse    小鼠 BTC 基因全長(zhǎng)ORF克隆
MAP2K2     cDNA    Mouse    小鼠 MAP2K2 基因全長(zhǎng)ORF克隆
AGT     cDNA    Mouse    小鼠 AGT 基因全長(zhǎng)ORF克隆
GPR56     cDNA    Mouse    小鼠 GPR56 基因全長(zhǎng)ORF克隆
CLEC11A     cDNA    Mouse    小鼠 CLEC11A 基因全長(zhǎng)ORF克隆
NLN     cDNA    Mouse    小鼠 NLN / Neurolysin 基因全長(zhǎng)ORF克隆
BSG     cDNA    Mouse    小鼠 CD147 / BSG 轉(zhuǎn)錄變體2 基因全長(zhǎng)ORF克隆
ECM1     cDNA    Mouse    小鼠 ECM1 基因全長(zhǎng)ORF克隆
SEMA4A     cDNA    Mouse    小鼠 SEMA4A 轉(zhuǎn)錄變體1 基因全長(zhǎng)ORF克隆
PLA2G1B     cDNA    Mouse    小鼠 PLA2G1B 基因全長(zhǎng)ORF克隆
IL17RA     cDNA    Mouse    小鼠 IL17RA / CD217 基因全長(zhǎng)ORF克隆
CD40LG     cDNA    Mouse    小鼠 CD40L / TNFSF5 基因全長(zhǎng)ORF克隆
NTRK3     cDNA    Mouse    小鼠 TrkC 基因全長(zhǎng)ORF克隆
BST1     cDNA    Mouse    小鼠 CD157 / BST1 基因全長(zhǎng)ORF克隆
PVRL2     cDNA    Mouse    小鼠 CD112 / Nectin2 基因全長(zhǎng)ORF克隆
SCARB1     cDNA    Mouse    小鼠 SCARB1 基因全長(zhǎng)ORF克隆
RSPO1     cDNA    Mouse    小鼠 RSPO1 基因全長(zhǎng)ORF克隆
SERPINA10     cDNA    Mouse    小鼠 SERPINA10 基因全長(zhǎng)ORF克隆
vSERPINA6     cDNA    Mouse    小鼠 SERPINA6 基因全長(zhǎng)ORF克隆
SERPINA7     cDNA    Mouse    小鼠 SERPINA7 基因全長(zhǎng)ORF克隆
MAP2K1     cDNA    Mouse    小鼠 MAP2K1 基因全長(zhǎng)ORF克隆
SRC     cDNA    Mouse    小鼠 SRC Kinase / Proto-oncogene c-Src 轉(zhuǎn)錄變體2 基因全長(zhǎng)ORF克隆
KYNU     cDNA    Mouse    小鼠 KYNU / Kynureninase 基因全長(zhǎng)ORF克隆
CLEC4E     cDNA    Mouse    小鼠 CLEC4E 基因全長(zhǎng)ORF克隆
CLEC4G     cDNA    Mouse    小鼠 CLEC4G 基因全長(zhǎng)ORF克隆
CLEC1A     cDNA    Mouse    小鼠 CLEC1A 基因全長(zhǎng)ORF克隆
CLEC1B     cDNA    Mouse    小鼠 CLEC1B 基因全長(zhǎng)ORF克隆