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標(biāo)本的采集與保存：

1、血清：將收集于血清分離管的全血標(biāo)本在室溫放置2 小時(shí)或4oC 過夜，然后1000×g 離心20 分鐘，取上清即

可，或?qū)⑸锨逯糜?/span>-20oC 或-80oC 保存，但應(yīng)避免反復(fù)凍融。

2、血漿：用EDTA 或肝素作為抗凝劑采集標(biāo)本，并將標(biāo)本在采集后的30 分鐘內(nèi)于2-8oC 1000×g 離心15 分鐘，

取上清即可檢測(cè)，或?qū)⑸锨逯糜?/span>-20oC 或-80oC 保存，但應(yīng)避免反復(fù)凍融。

3、組織勻漿：

1） 取適量組織塊，于預(yù)冷PBS（0.01mol/L, pH 7.0-7.2）中清洗去除血液，稱重后備用（組織塊較大需先剪碎后再勻漿）；

2） 可同時(shí)選用多種勻漿方法達(dá)到較好的破碎效果：首先將組織塊移入玻璃勻漿器，加入5-10mL 預(yù)冷PBS 進(jìn)行充分研磨，該過程需在冰上進(jìn)行（有條件實(shí)驗(yàn)室可選用機(jī)器勻漿）；得到的勻漿液可再利用超聲破碎或反復(fù)凍融進(jìn)一步處理（超聲破碎過

我司提供免費(fèi)代測(cè)服務(wù)，凡購買我司試劑盒的用戶，只收取試劑盒的費(fèi)用,其他輔助試劑全部免費(fèi)。我們將根據(jù)實(shí)驗(yàn)工作量和難易程度，雙方協(xié)定實(shí)驗(yàn)周期，保質(zhì)保量完成委托實(shí)驗(yàn)，并將實(shí)驗(yàn)結(jié)果和材料用特快專遞免費(fèi)寄送到您手中。

從標(biāo)本收集、保存、預(yù)試驗(yàn)、實(shí)驗(yàn)、數(shù)據(jù)分析等全實(shí)驗(yàn)過程提供完整的技術(shù)指導(dǎo)。

公司采用的全是進(jìn)口原材料研，發(fā)靈敏性高，高效性，吸附均勻、吸附性好，回收利用率高、可靠性強(qiáng)，無效包退包換，公司提供免費(fèi)代測(cè)服務(wù)，各種種屬ELISA試劑盒產(chǎn)品齊全，質(zhì)量可靠。

實(shí)驗(yàn)室注意事項(xiàng)：

1、所有試劑不能與皮膚直接接觸。

2、務(wù)必使用潔凈的藥勺，量筒或滴管取用試劑，不準(zhǔn)用同一種工具同時(shí)連續(xù)取用多種試劑。

3、取完一種試劑后，應(yīng)將工具洗凈、擦干后，方可取用另一種試劑。

4、試劑取用后一定要將瓶塞蓋緊，不可放錯(cuò)瓶蓋和滴管，絕不允許張冠李戴，用完后將瓶放回原處。

5、已取出的試劑不能再放回原試劑瓶內(nèi)。

實(shí)驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)品圖：

40 ng/L，5號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品，150μl的原倍標(biāo)準(zhǔn)品加入150μl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液

20 ng/L，4號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品，150μl的5號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品加入150μl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液

10 ng/L，3號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品，150μl的4號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品加入150μl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液

5 ng/L，2號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品，150μl的3號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品加入150μl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液

2.5 ng/L，1號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品，150μl的2號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品加入150μl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液

試劑和樣本的控制方法：

一、試劑

1.試劑的選擇：國家明確要求要采用批批檢定的形式對(duì)ELISA試劑嚴(yán)格把關(guān)，我司嚴(yán)格按照國家標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行，已獲得國家承認(rèn)的“三證"，每一個(gè)產(chǎn)品都有對(duì)應(yīng)的批號(hào)，只要客戶提前下單，我們就能為您提供新批次的產(chǎn)品，不必?fù)?dān)心會(huì)有過期的試劑。我司的試劑，值得您選擇。

2.試劑的準(zhǔn)備：先將試劑盒先從冰箱中拿出來，在室溫下放置20-30 min后，再進(jìn)行測(cè)定，使試劑盒在使用前與室溫平衡，這樣做的目的能使反應(yīng)微孔內(nèi)的溫度較快地達(dá)到所需的溫度，以滿足后面的測(cè)定需求。

二、樣本

1.內(nèi)源性干擾因素：包括類風(fēng)濕因子、補(bǔ)體、高濃度的非特異免疫球蛋白、異嗜性抗體、某些自身抗體等；

類風(fēng)濕因子的控制方法：

①用F(ab)2替代完整的IgG；

②標(biāo)本用聯(lián)有熱變性IgG的固相吸附劑處理；

③檢測(cè)抗原時(shí)，可用加入到標(biāo)本稀釋液中使RF降解；

補(bǔ)體的控制方法：

①用EDTA稀釋標(biāo)本；

②56℃ 30 min加熱血清使C1q滅活；

2.外源性干擾因素：包括標(biāo)本溶血、細(xì)菌污染、保存時(shí)間過長或凝固不全等；

控制方法：采血時(shí)規(guī)范操作，采集的血液勿用力震蕩，以防溶血；收集標(biāo)本時(shí)采用無菌試管，經(jīng)檢測(cè)后再低溫凍存；保存時(shí)間不宜過久，檢測(cè)時(shí)盡量采用新鮮標(biāo)本；對(duì)于凝固不全的血標(biāo)本可適當(dāng)加入抗凝劑，并放入37℃水中1 h，待充分凝固后再離心分離血清。

操作流程如下：

（1）待測(cè)樣品孔中每孔加入待測(cè)樣品100μl，每種樣品設(shè)3個(gè)平行孔；設(shè)兩個(gè)陰性對(duì)照孔，每孔加未處理組的細(xì)胞裂解液100μl；另設(shè)一個(gè)空白對(duì)照孔，加入純細(xì)胞裂解液100μl。

（2）酶標(biāo)板置4℃，包被過夜。

（3）洗板：吸干孔內(nèi)反應(yīng)液，用洗滌液過洗一遍（將洗滌液注滿板孔后，即甩去），之后將洗滌液注滿板孔，浸泡1-2分鐘，間歇搖動(dòng)。甩去孔內(nèi)液體后在吸水紙上拍干。重復(fù)洗滌3-4次。

（4）陰性對(duì)照孔每孔加入PBS 50μl，樣品孔及空白孔每孔加入1:500稀釋的兔抗人AIF抗體工作液50μl。

（5）酶標(biāo)板置37℃培養(yǎng)箱的濕盒內(nèi)，孵育60min。

（6）洗板，同（4）。

（7）每孔加1:5000稀釋的HRP-標(biāo)記的山羊抗兔抗體工作液 100μl。

（8）酶標(biāo)板置37℃培養(yǎng)箱的濕盒內(nèi)，孵育60min。

（9）洗板，同（4）。

（10）每孔加TMB顯色液 100μl，輕輕混勻10s，置37℃暗處反應(yīng)15-20min。

（11）每孔加100μl 2mol/L H2SO4終止反應(yīng)。

（12）分別測(cè)450nm 吸光值W1和630nm吸光值W2，最終測(cè)得的OD值為兩者之差（W1-W2），以減少由容器上的劃痕或指印等造成的光干擾。

（13）數(shù)據(jù)處理：在得出標(biāo)本（S）和陰性對(duì)照（N）的 OD值后，計(jì)算S/N值。S/N≥2.1為陽性判定標(biāo)準(zhǔn)。

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EPI腎上腺素酶聯(lián)免疫試劑盒銀標(biāo)準(zhǔn)溶液 1000μg/mlAnti-AMPK beta-1(phospho Ser182) /FITC  熒光素標(biāo)記兔抗人、大、小鼠化腺苷單活化蛋白激β1抗體IgG豚鼠可溶性血管內(nèi)皮蛋白C受體(sEPCR)聯(lián)免疫吸附測(cè)定試劑盒

銀標(biāo)準(zhǔn)溶液 100µg/mL，體:1%HNO3Anti-AMPK Beta1/FITC  熒光素標(biāo)記腺苷單活化蛋白激β1抗體IgG豚鼠表皮角蛋白(EK)聯(lián)免疫吸附測(cè)定試劑盒  

銀標(biāo)準(zhǔn)溶液 100μg/mlAnti-Amylin/FITC  熒光素標(biāo)記兔抗糖尿病相關(guān)肽/胰島淀粉樣肽抗體IgG豚鼠高分子量角蛋白(CK-HMW)聯(lián)免疫吸附測(cè)定試劑盒

鈧標(biāo)準(zhǔn)溶液 1000μg/mlAnti-Ang- II /FITC  熒光素標(biāo)記血管緊張素II抗體IgG豚鼠神經(jīng)調(diào)節(jié)蛋白3(NRG-3)聯(lián)免疫吸附測(cè)定試劑盒

1000µg/mL，體：10%HCLAnti-ANG-2/FITC  熒光素標(biāo)記血管生成素-2抗體IgG豚鼠半胱天冬3(CASP3)聯(lián)免疫吸附測(cè)定試劑盒

硒標(biāo)準(zhǔn)溶液 1000μg/mlAnti-Ankyrin G/ANK-3/ankyrin 3/FITC  熒光素標(biāo)記錨定蛋白G抗體IgG豚鼠紅藻氨離子型谷氨受體2(GRIK2)聯(lián)免疫吸附測(cè)定試劑盒

硒標(biāo)準(zhǔn)溶液 100mg/L,溶劑：水Anti-ANGPTL1/ANG-1 /FITC  熒光素標(biāo)記血管位蛋白樣1/血管生成素樣蛋白-1抗體IgG豚鼠小核糖核蛋白多肽D1(SNRPD1)聯(lián)免疫吸附測(cè)定試劑盒

100mg/L(20?C)，體:1%HClAnti-ANGPTL2/ANG-2 /FITC  熒光素標(biāo)記血管位蛋白樣2/血管生成素樣蛋白-2抗體IgG豚鼠質(zhì)衍生因子4(SDF-4)聯(lián)免疫吸附測(cè)定試劑盒

硅標(biāo)準(zhǔn)溶液 1000μg/mlAnti-ANGPTL4/ANG-4 /FITC  熒光素標(biāo)記血管位蛋白樣4/血管生成素樣蛋白-4抗體IgG豚鼠抗核膜糖蛋白210抗體(AGPA)聯(lián)免疫吸附測(cè)定試劑盒  

鍶標(biāo)準(zhǔn)溶液 1000μg/mlAnti-Annexin I/FITC  熒光素標(biāo)記人、大、小鼠膜粘連蛋白 I抗體IgG豚鼠外信號(hào)調(diào)節(jié)激(ERK)聯(lián)免疫吸附測(cè)定試劑盒

硫根離子標(biāo)準(zhǔn)溶液1000μg/mlAnti-Annexin II/FITC  熒光素標(biāo)記膜粘連蛋白-2抗體IgG豚鼠色素b-561(CYB561)聯(lián)免疫吸附測(cè)定試劑盒

硫根離子標(biāo)準(zhǔn)溶液500mg/L，溶劑：水Anti-Annexin III /FITC  熒光素標(biāo)記膜粘連蛋白 Ⅲ抗體IgG豚鼠蛋白(PP)聯(lián)免疫吸附測(cè)定試劑盒

硫根離子標(biāo)準(zhǔn)溶液5000mg/L，溶劑：水Anti-Annexin IV /FITC  熒光素標(biāo)記膜粘連蛋白 Ⅳ抗體IgG豚鼠干擾素誘導(dǎo)Tα亞族趨化因子 (I-TAC)聯(lián)免疫吸附測(cè)定試劑盒

硫根離子標(biāo)準(zhǔn)溶液100μg/ml,體:硫鈉溶液Anti-Annexin V/FITC  熒光素標(biāo)記重組膜粘連蛋白-5(人)抗體IgG豚鼠免疫球蛋白A1 (IgA1)聯(lián)免疫吸附測(cè)定試劑盒

硫根離子標(biāo)準(zhǔn)溶液1000μg/ml,溶劑:水Anti-Annexin VI/FITC  熒光素標(biāo)記膜粘連蛋白 VI抗體IgG豚鼠腫瘤壞死因子配體相關(guān)分子-1A(TL1A)聯(lián)免疫吸附測(cè)定試劑盒