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參數(shù)規(guī)格：
產(chǎn)品名稱：鯛虹彩病毒病(RSIV))定性PCR檢測試劑盒
產(chǎn)品貨號：CP100141
產(chǎn)品規(guī)格：50T
產(chǎn)品分類：PCR法
產(chǎn)品運(yùn)輸：低溫運(yùn)輸
產(chǎn)品保存：-20℃保存
產(chǎn)品有效期：一年
產(chǎn)品特點(diǎn)：本產(chǎn)品就是根據(jù)保守區(qū)設(shè)計(jì)引物而開發(fā)的高靈敏熒光定量 PCR 產(chǎn)品。
PCR反應(yīng)鑒定——PCR反應(yīng)條件:

實(shí)驗(yàn)過程：
一、試劑準(zhǔn)備
1. DNA模板
2．對應(yīng)目的基因的特異引物（在PCR反應(yīng)中，新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續(xù)按照模板DNA復(fù)制，而不能從無到有，憑空合成。這一小段序列就是你所要有設(shè)計(jì)的引物?？梢允荄NA也可以是RNA，一般20多bp，需要根據(jù)你的模板鏈設(shè)計(jì)。因此，擴(kuò)增不同的基因需要設(shè)計(jì)不同的引物）
3．10×PCR Buffer
4．2mM dNTPmix：含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5．Taq酶
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二、操作步驟
1．在冰浴中，按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。
      10×PCR buffer             5μl
      dNTP mixl                 4μl
      引物1（10pM）               2μl
      引物2（10PM）              2μl
      Taq酶（2U/μl）            1μl
      DNA模板（50ng-1μg/μl）　　　 1 μl
     加ddH2O至               50 μl
     視PCR儀有無熱蓋，不加或添加石蠟油。
2．調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上，執(zhí)行擴(kuò)增。一般：在93℃預(yù)變性3-5min，進(jìn)入循環(huán)擴(kuò)增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循環(huán)30-35次，zui后在72℃ 保溫7min。
3．結(jié)束反應(yīng)，PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測或-20℃保存。
4．PCR的電泳檢測：如在反應(yīng)管中加有石蠟油，需用100μlLuFang進(jìn)行抽提反應(yīng)混合液，以除去石蠟油；否則，直接取5-10μl電泳檢測。
實(shí)驗(yàn)注意事項(xiàng)：
1）RT-PCR可以檢測組織、細(xì)胞、血液、細(xì)菌等很多材料，不同的樣本有不同要求，實(shí)驗(yàn)前請充分溝通確認(rèn)實(shí)驗(yàn)方案和樣本情況；
2）客戶盡可能提供實(shí)驗(yàn)的背景信息、物種、基因準(zhǔn)確的名稱和ID號；
3）客戶盡量不要提供DNA或RNA樣品。
4）樣本保存于液氮或干冰，也可以保存于Trizol液中。
實(shí)時(shí)熒光定量PCR（quantitative real-time PCR，qPCR）是指在PCR反應(yīng)體系中加入熒光基團(tuán)，利用熒光信號積累實(shí)時(shí)監(jiān)測整個(gè)PCR進(jìn)程，最后通過標(biāo)準(zhǔn)曲線對未知模板進(jìn)行定量分析的方法。實(shí)時(shí)熒光定量PCR的化學(xué)原理包括探針類和非探針類兩類，探針類是利用與靶細(xì)胞序列特異性雜交的探針來指示擴(kuò)增產(chǎn)物的增加，非探針類是利用熒光染料或者特異性設(shè)計(jì)的引物來指示擴(kuò)增的增加。運(yùn)用該技術(shù)可以對DNA、RNA樣品進(jìn)行定量（包括定量和相對定量）和定性分析。
主要服務(wù)：DNA或RNA的定量分析、基因表達(dá)差異分析、基因分型。
主要技術(shù)：引物設(shè)計(jì)、RNA提取、cDNA合成、qPCR。
球毛殼菌幾丁質(zhì)酶結(jié)構(gòu)域蛋白1抗體Human MYH10(Myosin Heavy Chain 10, Non Muscle) ELISA Kit人乳鐵傳遞蛋白/乳鐵蛋白(LF/LTF)免疫試劑盒

小孢根霉嵌合蛋白2/β2-chimaerin抗體Human NPYR2(Neuropeptide Y Receptor Y2) ELISA Kit人乳糖凝集素8(LGALS8)免疫試劑盒

人參土成對桿菌幾丁質(zhì)酶1抗體Human MAN1A1(Mannosidase Alpha Class 1A Member 1) ELISA Kit人乳酸脫氫酶A(LDHA)免疫試劑盒

假單胞菌屬白抗原CD97 alpha 抗體Human MMP-24(Matrix Metalloproteinase 24) ELISA Kit人乳清酸磷酸核糖轉(zhuǎn)移(OPRT)免疫試劑盒

更新世肉桿菌緊密連接蛋白2抗體Human MANF(Mesencephalic Astrocyte Derived Neurotrophic Factor) ELISA Kit人乳過氧化物酶(LPO)免疫試劑盒

淋病奈瑟菌緊密連接蛋白7抗體Human MAPK(Mitogen Activated Protein Kinase) ELISA Kit抗原1(SAGE1)免疫試劑盒

海南油脂酵母2號染色體開放閱讀框53抗體Human MMP-25(Matrix Metalloproteinase 25) ELISA Kit堿O-棕櫚酰基轉(zhuǎn)移酶1,肝亞型(CPT1A/CPT1)免疫試劑盒

大腸埃希氏菌2號染色體開放閱讀框54抗體Human MMRN1(Multimerin 1) ELISA Kit堿免疫試劑盒

哈茨木霉2號染色體開放閱讀框56抗體Human KERA(KeRatocan) ELISA Kit堿脂酰轉(zhuǎn)移酶(CACT)免疫試劑盒

熱脫氮地芽孢桿菌熱脫氮亞種2號染色體開放閱讀框61抗體Human LZMg(Lysozyme G) ELISA Ki堿O -乙?；D(zhuǎn)移酶(CRAT/CAT1)免疫試劑盒

茯苓癌相關(guān)抗原抗體Human LAMA4(Laminin Alpha 4) ELISA Kit人溶血血小板活化因子(lyso-PAF)免疫試劑盒

枯草芽孢桿菌分裂周期相關(guān)蛋白4抗體Human LAT(Linker For Activation of T-cell) ELISA Kit人溶酶體相關(guān)膜蛋白2(HLAMP-2)免疫試劑盒

新疆糖絲菌色素b5抗體Human LACTβ(β-Lactamase) ELISA Kit人(LZM)免疫試劑盒

球孢白僵菌鈣粘蛋白相關(guān)的神經(jīng)受體2抗體Human LDL(Low Density Lipoprotein) ELISA Kit(HCG)免疫試劑盒

禽腺病1號染色體開放閱讀框186抗體Human LCA/CD45(Leukocyte Common Antigen) ELISA Kit人相關(guān)血漿蛋白A(PAPP-A)免疫試劑盒

白布勒擔(dān)孢酵母CXC趨化因子16抗體Human LDHB(Lactate Dehydrogenase B) ELISA Kit人特異性蛋白B(PSPB)免疫試劑盒
鯛虹彩病毒病(RSIV))定性PCR檢測試劑盒煙曲霉Aspergillus│fumigatus 質(zhì)量規(guī)格：HPLC≥98%,標(biāo)準(zhǔn)品高密度脂蛋白1試劑盒L-谷氨酰;純品型;標(biāo)準(zhǔn)品;有證書

大腸埃希氏菌Escherichia│coli 質(zhì)量規(guī)格：HPLC≥97%,BR高密度脂蛋白試劑盒a-乳糖;純品型;標(biāo)準(zhǔn)品;有證書

米曲霉Aspergillus│oryzae 質(zhì)量規(guī)格：HPLC≥98%，標(biāo)準(zhǔn)品高靈敏度促甲狀腺激素試劑盒D-山梨;純品型;標(biāo)準(zhǔn)品;有證書

擬盤多毛孢Pestalotiopsis│sp. 質(zhì)量規(guī)格：HPLC≥85%,BR高分子量脂聯(lián)素試劑盒酸鈣;純品型;標(biāo)準(zhǔn)品;有證書

強(qiáng)壯類芽孢桿菌Paenibacillus│validus 質(zhì)量規(guī)格：HPLC≥98%，標(biāo)準(zhǔn)品高分子量角蛋白試劑盒安賽蜜;純品型;標(biāo)準(zhǔn)品;有證書

豬霍亂沙門氏菌Salmonella│choleraesuis 質(zhì)量規(guī)格：≥98%,BR高爾基體抗體試劑盒鞣花酸;純品型;標(biāo)準(zhǔn)品;有證書

米曲霉Aspergillus│oryzae 質(zhì)量規(guī)格：HPLC≥98%，標(biāo)準(zhǔn)品高爾基蛋白73試劑盒阿斯巴甜（甜味素）;純品型;標(biāo)準(zhǔn)品;有證

硫氧化博斯氏菌Bosea thiooxidans 質(zhì)量規(guī)格：≥98%,BR高半試劑盒(3);純品型;標(biāo)準(zhǔn)品;有證

橢圓釀酒酵母Saccharomyces│cerevisiae var.ellipsoideus 質(zhì)量規(guī)格：HPLC≥98%,標(biāo)準(zhǔn)品剛地弓形蟲試劑盒肉桂;純品型;標(biāo)準(zhǔn)品;有證書
使用方法：
一、樣品DNA的制備
用自選方法提取細(xì)菌樣品DNA。注意：DNA純化方法是決定檢測靈敏度的關(guān)鍵因素。如果不能很好純化樣品DNA，后面的PCR再靈敏也不能提高整體檢測靈敏度。
二、制備O157:H7標(biāo)準(zhǔn)曲線（以10-10E6這6個(gè)10倍稀釋度為例。由于標(biāo)準(zhǔn)品濃度非常高，因此下列稀釋操作一定要在獨(dú)立的區(qū)域進(jìn)行，千萬不能污染樣品或本試劑盒的其他成分）。為增加產(chǎn)品穩(wěn)定性和避免擴(kuò)散傳染性病原，本產(chǎn)品不提供活體病毒做陽性對照，只提供沒有傳染性的、可以直接使用的DNA片段作為陽性對照。
1. 標(biāo)記6個(gè)離心管，分別為6，5，4，3，2和1號。
2. 用帶芯槍頭分別加入45 μL超純水（用帶芯槍頭，下同）。
3. 先將本試劑盒提供的陽性對照用TE緩沖液或超純水10倍梯度稀釋到10E7拷貝/μL（注：請不要將本試劑盒提供的標(biāo)準(zhǔn)品一次性稀釋至10E7拷貝/μL，建議每次稀釋10倍，梯度稀釋至10E7拷貝/μL）。
4. 在6號管中加入5 μL 10E7拷貝/μL的O157:H7陽性對照(上步稀釋所得)，充分震蕩1分鐘，得10E6拷貝/μL的陽性對照。
5. 換槍頭，從6號管中取5 μL溶液到5號管中，充分震蕩1分鐘，得10E5拷貝/μL的陽性對照。
6. 換槍頭，從5號管中取5 μL溶液到4號管中，重復(fù)上面的操作直到得到6個(gè)稀釋度的陽性對照。
7. NC管中不加任何陽性對照。
8. 從1-6號管中分別取5 μL和待測樣品一起進(jìn)行定量PCR（見下步），每個(gè)樣品做3次重復(fù)。PCR后得到每個(gè)陽性對照稀釋樣品的熒光PCR Ct值，并以之為縱軸，以濃度的對數(shù)值為橫軸，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。