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操作流程如下：

（1）待測樣品孔中每孔加入待測樣品100μl，每種樣品設(shè)3個平行孔；設(shè)兩個陰性對照孔，每孔加未處理組的細胞裂解液100μl；另設(shè)一個空白對照孔，加入純細胞裂解液100μl。

（2）酶標(biāo)板置4℃，包被過夜。

（3）洗板：吸干孔內(nèi)反應(yīng)液，用洗滌液過洗一遍（將洗滌液注滿板孔后，即甩去），之后將洗滌液注滿板孔，浸泡1-2分鐘，間歇搖動。甩去孔內(nèi)液體后在吸水紙上拍干。重復(fù)洗滌3-4次。

（4）陰性對照孔每孔加入PBS 50μl，樣品孔及空白孔每孔加入1:500稀釋的兔抗人AIF抗體工作液50μl。

（5）酶標(biāo)板置37℃培養(yǎng)箱的濕盒內(nèi)，孵育60min。

（6）洗板，同（4）。

（7）每孔加1:5000稀釋的HRP-標(biāo)記的山羊抗兔抗體工作液 100μl。

（8）酶標(biāo)板置37℃培養(yǎng)箱的濕盒內(nèi)，孵育60min。

（9）洗板，同（4）。

（10）每孔加TMB顯色液 100μl，輕輕混勻10s，置37℃暗處反應(yīng)15-20min。

（11）每孔加100μl 2mol/L H2SO4終止反應(yīng)。

（12）分別測450nm 吸光值W1和630nm吸光值W2，最終測得的OD值為兩者之差（W1-W2），以減少由容器上的劃痕或指印等造成的光干擾。

（13）數(shù)據(jù)處理：在得出標(biāo)本（S）和陰性對照（N）的 OD值后，計算S/N值。S/N≥2.1為陽性判定標(biāo)準(zhǔn)。

我司提供免費代測服務(wù)，凡購買我司試劑盒的用戶，只收取試劑盒的費用,其他輔助試劑全部免費。我們將根據(jù)實驗工作量和難易程度，雙方協(xié)定實驗周期，保質(zhì)保量完成委托實驗，并將實驗結(jié)果和材料用特快專遞免費寄送到您手中。

從標(biāo)本收集、保存、預(yù)試驗、實驗、數(shù)據(jù)分析等全實驗過程提供完整的技術(shù)指導(dǎo)。

公司采用的全是進口原材料研，發(fā)靈敏性高，高效性，吸附均勻、吸附性好，回收利用率高、可靠性強，無效包退包換，公司提供免費代測服務(wù)，各種種屬ELISA試劑盒產(chǎn)品齊全，質(zhì)量可靠。

實驗室注意事項：

1、所有試劑不能與皮膚直接接觸。

2、務(wù)必使用潔凈的藥勺，量筒或滴管取用試劑，不準(zhǔn)用同一種工具同時連續(xù)取用多種試劑。

3、取完一種試劑后，應(yīng)將工具洗凈、擦干后，方可取用另一種試劑。

4、試劑取用后一定要將瓶塞蓋緊，不可放錯瓶蓋和滴管，絕不允許張冠李戴，用完后將瓶放回原處。

5、已取出的試劑不能再放回原試劑瓶內(nèi)。

實驗標(biāo)準(zhǔn)品圖：

40 ng/L，5號標(biāo)準(zhǔn)品，150μl的原倍標(biāo)準(zhǔn)品加入150μl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液

20 ng/L，4號標(biāo)準(zhǔn)品，150μl的5號標(biāo)準(zhǔn)品加入150μl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液

10 ng/L，3號標(biāo)準(zhǔn)品，150μl的4號標(biāo)準(zhǔn)品加入150μl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液

5 ng/L，2號標(biāo)準(zhǔn)品，150μl的3號標(biāo)準(zhǔn)品加入150μl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液

2.5 ng/L，1號標(biāo)準(zhǔn)品，150μl的2號標(biāo)準(zhǔn)品加入150μl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液

標(biāo)本的采集與保存：

1、血清：將收集于血清分離管的全血標(biāo)本在室溫放置2 小時或4oC 過夜，然后1000×g 離心20 分鐘，取上清即

可，或?qū)⑸锨逯糜?/span>-20oC 或-80oC 保存，但應(yīng)避免反復(fù)凍融。

2、血漿：用EDTA 或肝素作為抗凝劑采集標(biāo)本，并將標(biāo)本在采集后的30 分鐘內(nèi)于2-8oC 1000×g 離心15 分鐘，

取上清即可檢測，或?qū)⑸锨逯糜?/span>-20oC 或-80oC 保存，但應(yīng)避免反復(fù)凍融。

3、組織勻漿：

1） 取適量組織塊，于預(yù)冷PBS（0.01mol/L, pH 7.0-7.2）中清洗去除血液，稱重后備用（組織塊較大需先剪碎后再勻漿）；

2） 可同時選用多種勻漿方法達到較好的破碎效果：首先將組織塊移入玻璃勻漿器，加入5-10mL 預(yù)冷PBS 進行充分研磨，該過程需在冰上進行（有條件實驗室可選用機器勻漿）；得到的勻漿液可再利用超聲破碎或反復(fù)凍融進一步處理（超聲破碎過

試劑和樣本的控制方法：

一、試劑

1.試劑的選擇：國家明確要求要采用批批檢定的形式對ELISA試劑嚴(yán)格把關(guān)，我司嚴(yán)格按照國家標(biāo)準(zhǔn)進行，已獲得國家承認(rèn)的“三證"，每一個產(chǎn)品都有對應(yīng)的批號，只要客戶提前下單，我們就能為您提供新批次的產(chǎn)品，不必?fù)?dān)心會有過期的試劑。我司的試劑，值得您選擇。

2.試劑的準(zhǔn)備：先將試劑盒先從冰箱中拿出來，在室溫下放置20-30 min后，再進行測定，使試劑盒在使用前與室溫平衡，這樣做的目的能使反應(yīng)微孔內(nèi)的溫度較快地達到所需的溫度，以滿足后面的測定需求。

二、樣本

1.內(nèi)源性干擾因素：包括類風(fēng)濕因子、補體、高濃度的非特異免疫球蛋白、異嗜性抗體、某些自身抗體等；

類風(fēng)濕因子的控制方法：

①用F(ab)2替代完整的IgG；

②標(biāo)本用聯(lián)有熱變性IgG的固相吸附劑處理；

③檢測抗原時，可用加入到標(biāo)本稀釋液中使RF降解；

補體的控制方法：

①用EDTA稀釋標(biāo)本；

②56℃ 30 min加熱血清使C1q滅活；

2.外源性干擾因素：包括標(biāo)本溶血、細菌污染、保存時間過長或凝固不全等；

控制方法：采血時規(guī)范操作，采集的血液勿用力震蕩，以防溶血；收集標(biāo)本時采用無菌試管，經(jīng)檢測后再低溫凍存；保存時間不宜過久，檢測時盡量采用新鮮標(biāo)本；對于凝固不全的血標(biāo)本可適當(dāng)加入抗凝劑，并放入37℃水中1 h，待充分凝固后再離心分離血清。

層粘蛋白α4抗體(Lamininα4)Human PIR ELISA KitL-亮甲酯鹽酸鹽

層粘蛋白α4抗體(Lamininα4)Human PITPNB ELISA Kit6-正己酸

脂質(zhì)運載蛋白1抗體Human PIGT ELISA Kit1,2,3-苯駢三氮唑

趨化因子抗體Human PIGS ELISA Kit2′-脫氧鳥苷-5′-二三鈉鹽

低密度脂蛋白受體5樣蛋白抗體Human PIGZ ELISA Kit甲基磺酸甲酯

富含亮重復(fù)跨膜神經(jīng)元蛋白3抗體Human PIH1D1 ELISA Kit三乙烯四六乙酸

扁豆凝集素Human PIK3C2G ELISA Kit十五烷酸

化富亮重復(fù)激2抗體Human IL20RA(Interleukin-20 receptor subunit alpha) ELISA Kit十三烷酸

MPO髓過氧化物酶酶聯(lián)免疫試劑盒左旋千金藤堿  分析標(biāo)準(zhǔn)品，≥98%Anti-Megsin  絲氨蛋白抑制劑B7抗體人Janus激2(JAK2)聯(lián)免疫吸附測定試劑盒

五味子素 分析標(biāo)準(zhǔn)品，≥98%Anti-Melamine  三聚抗體人胰腺癌標(biāo)志物(CA242)聯(lián)免疫吸附測定試劑盒

丹參酮I  分析標(biāo)準(zhǔn)品，≥98%Anti-Melamine  三聚抗體人胰腺特異性轉(zhuǎn)錄因子1α (PTF1α)聯(lián)免疫吸附測定試劑盒

分析標(biāo)準(zhǔn)品，≥98%Anti-Melan-A/MART-1/Melanoma HMB45  黑色素瘤相關(guān)抗原/黑色素-A抗體人胰腺再生蛋白1α(REG1α)聯(lián)免疫吸附測定試劑盒

≥98% (HPLC)Anti-MEK1/MAPKK1/MEKK1  MEK1/MAPKK1抗體(N-端)人胰腺再生蛋白4(REG4)聯(lián)免疫吸附測定試劑盒

3,3’-二沒食子酯茶黃素 分析標(biāo)準(zhǔn)品, ≥98.0% (HPLC)Anti-Menin/Men1  Menin抑癌蛋白抗體人酚磺轉(zhuǎn)移(SULT1A1)聯(lián)免疫吸附測定試劑盒

知母皂苷A-Ⅲ 分析標(biāo)準(zhǔn)品，≥97%Anti-Metal ion transporter  擬南介金屬離子轉(zhuǎn)運蛋白抗體人胰脂肪(PL)聯(lián)免疫吸附測定試劑盒

細辛 分析標(biāo)準(zhǔn)品，≥98%Anti-Mfn1  線粒體融合蛋白1抗體人非受體型蛋白酪氨11(PTPN11)聯(lián)免疫吸附測定試劑盒

四氫巴馬汀 分析標(biāo)準(zhǔn)品，≥98%Anti-MGMT  O6DNA轉(zhuǎn)移抗體人抑瘤素M(OSM)聯(lián)免疫吸附測定試劑盒

香蒲新苷 分析標(biāo)準(zhǔn)品，≥98%Anti-Metallothionein  金屬硫蛋白抗體人核心蛋白聚糖(DCN)聯(lián)免疫吸附測定試劑盒

延齡草苷 分析標(biāo)準(zhǔn)品，≥98%Anti-LAMR1  層粘連蛋白受體1抗體（N端）人阻抑素(PHB)聯(lián)免疫吸附測定試劑盒

乙酰蒲公英萜 分析標(biāo)準(zhǔn)品，≥90%Anti-MTA1  腫瘤轉(zhuǎn)移相關(guān)蛋白1抗體人隱花色素1(CRY1)聯(lián)免疫吸附測定試劑盒

鳶尾黃素 分析標(biāo)準(zhǔn)品，≥97% Anti-LAMR1(CT)  層粘連蛋白受體1抗體（C端）人優(yōu)球蛋白(EL)聯(lián)免疫吸附測定試劑盒  

牡荊素-2-O-鼠李糖苷 分析標(biāo)準(zhǔn)品，≥98%Anti-Myf6  生肌調(diào)節(jié)因子6抗體人信號素4D(SEMA4D)聯(lián)免疫吸附測定試劑盒  

漢黃芩素 分析標(biāo)準(zhǔn)品，≥99%Anti-LAMR1  層粘連蛋白受體1單克隆抗體人受體5(SSTR5)聯(lián)免疫吸附測定試劑盒