当着夫的面被夫上司玩弄,最近免费中文字幕中文高清百度 ,超碰CAOPORON入口,精品国产日韩一区二区三区

公司產(chǎn)品僅用于科研以下是細胞的訂購信息：

英文簡稱：AV 12細胞    

產(chǎn)品名稱：敘利亞倉鼠細胞系

規(guī)格：T25

形態(tài)特性：成纖維細胞樣

生長特性：貼壁生長

特征特性：

培養(yǎng)條件：DMEM(高糖）+10%FBS

傳代方法： 1:8~1:20傳代；每周換液2~3次。

貨號：CS-X64015
細胞培養(yǎng)操作規(guī)程：
一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準備：
1）準備RPMI-1640培養(yǎng)基，90%；優(yōu)質(zhì)胎牛血清，10%。
2）培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37℃，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3）凍存液：90%血清，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配，液氮儲存。
二．細胞處理：
1）復(fù)蘇細胞：將含有1mL細胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于凍存管蓋部）搖晃解凍，移入事先準備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜。第二天換液并檢查細胞密度。
2）細胞傳代：如果細胞密度達80%-90%，即可進行傳代培養(yǎng)。
對于懸浮細胞，傳代可參考以下方法：
方法一：收集細胞，1000RPM，常溫條件下離心5分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻，將細胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。

細胞培養(yǎng)的優(yōu)點：
1.研究的對象是活細胞
在實驗過程中，根據(jù)要求可始終保持細胞活力，并可長時間監(jiān)控、檢測甚至定量評估一部分活細胞的情況，包括活細胞的形態(tài)、結(jié)構(gòu)、生命活動等。
2.研究條件可以人為控制
pH、溫度、氧氣、二氧化碳、張力等物理化學(xué)的條件，可以根據(jù)實際需要進行人為的控制，同時，可以施加化學(xué)、物理、生物等因素作為條件而進行實驗觀察，這些因素同樣可以處于嚴格控制之下。
3.研究的樣本可以達到比較均一性
通過細胞培養(yǎng)一定代數(shù)后，所得到的細胞系則可以達到均一性而屬于同一類型的細胞，需要時，可采用克隆化等方法使細胞達到純化。
4.研究內(nèi)容便于觀察、檢測和記錄
采用各種研究技術(shù)：如倒置生物顯微鏡、熒光顯微鏡、電子顯微鏡、流式細胞術(shù)、激光共焦顯微鏡、免疫組織化學(xué)、原位雜交、同位素標記等各種儀器設(shè)備。

注意事項：
（1）凍存前細胞狀態(tài)，細胞在對數(shù)生，細胞密度適合，剛剛發(fā)生細胞融合，過密或連成片的細胞狀態(tài)不好，而且消化時不容易分散；
（2）凍存的密度不宜過低，10的6次方-7次方的數(shù)量級比較好，我凍存的細胞一般T25培養(yǎng)瓶（5*107），一瓶凍一管（1.5ml凍存管），10cm培養(yǎng)皿（大概10的8次方個細胞）分成兩管。
（3）消化和吹打，切忌消化過度，吹打不可太用力，不要吹出好多泡泡。消化后立即加入*培養(yǎng)基吹打哦，不是加入凍存液再吹打。
（4）離心后加入凍存液。凍存液中FBS的用量對于腫瘤細胞株而言要求不是很嚴格，我從10%-90%都用過，問題不大，個人認為10%-20%可以了，能節(jié)約處就節(jié)約點嘛！另外，凍存液可以在處理細胞前配置，放在4度冰箱預(yù)冷。細胞離心后直接用預(yù)冷的凍存液重懸，移入凍存管。
（5）關(guān)于“慢凍"，傳統(tǒng)的方法，LLC細胞凍存管用棉花包好，4度2h，-20度2h或更長，-80度過夜，最后液氮。對于條件較好的實驗室和細胞凍存數(shù)量多的實驗室，使用程序降溫盒，內(nèi)裝異丙醇，在-80度并內(nèi)可以逐漸降溫，很方便，省了包棉花、4度、-20度了。
無孢蛋白(ASPN)檢測試劑盒英文名稱：ASPN ELISA Kit色素c氧化酶1抗體包裝25ml

吻素受體(KISS1R)檢測試劑盒英文名稱：KISS1R ELISA Kit表面趨化因子受體4相關(guān)蛋白4抗體包裝5ml

吻素1(KISS1)檢測試劑盒英文名稱：KISS1 ELISA Kit表面趨化因子受體4相關(guān)蛋白6抗體包裝1g

胃泌素抑制肽(GIP)檢測試劑盒英文名稱：GIP ELISA Kit表面趨化因子受體4相關(guān)蛋白8抗體包裝5g

胃泌素(GT)檢測試劑盒英文名稱：GT ELISA Kit抗體包裝100g

原C(PGC)檢測試劑盒英文名稱：PGC ELISA Kit上皮類癌相關(guān)抗原抗體包裝25g

原A(PGA)檢測試劑盒英文名稱：PGA ELISA Kit磷酸化蛋白磷酸激酶PKC/CPI-17抗體包裝5g

味覺受體1型成員2(TAS1R2)檢測試劑盒英文名稱：TAS1R2 ELISA Kit著絲粒蛋白K包裝100g

尾加壓素2受體(UTS2R)檢測試劑盒英文名稱：UTS2R ELISA Kit腫瘤/抗原1B包裝25g

維生素D受體(VDR)檢測試劑盒英文名稱：VDR ELISA Kit轉(zhuǎn)鐵蛋白受體抗體包裝5g

維生素D結(jié)合蛋白(DBP)檢測試劑盒英文名稱：DBP ELISA Kit8號染色體開放閱讀框K29抗體包裝1g

維生素B9(VB9)檢測試劑盒英文名稱：VB9 ELISA Kit色素P450 3A4抗體包裝250mg

維酸X受體α(RXRα)檢測試劑盒英文名稱：RXRα ELISA Kit色素CYP2D1抗體包裝5g

圍脂滴蛋白4(PLIN4)檢測試劑盒英文名稱：PLIN4 ELISA KitCD33抗體包裝1g

微粒體S轉(zhuǎn)移酶1(MGST1)檢測試劑盒英文名稱：MGST1 ELISA Kit視網(wǎng)膜母瘤結(jié)合蛋白8抗體包裝5g
AV 12細胞糖類抗原125(CA125)檢測試劑盒英文名稱：CA125 ELISA Kit磷酸化活化復(fù)制因子2抗體包裝250mg

糖化血紅蛋白A1c(A1c)檢測試劑盒英文名稱：A1c ELISA Kit凋亡相關(guān)蛋白3抗體包裝1g

糖蛋白130(gp130)檢測試劑盒英文名稱：gp130 ELISA Kit自噬相關(guān)蛋白18抗體包裝1g

碳酸酐酶2(CA-2)檢測試劑盒英文名稱：CA-2 ELISA Kit自噬相關(guān)蛋白4A抗體包裝5g

碳酸酐酶1(CA-1)檢測試劑盒英文名稱：CA-1 ELISA Kit載脂蛋白A4抗體包裝5g

碳酸酐酶(CA)檢測試劑盒英文名稱：CA ELISA Kit12脂氧合酶抗體包裝25g

胎球蛋白A(Fetuin A)檢測試劑盒英文名稱：Fetuin A ELISA Kit血管緊張素III抗體包裝5g

胎盤生長因子(PLGF)檢測試劑盒英文名稱：PLGF ELISA Kit腺苷酸環(huán)化酶3抗體包裝1g

胎盤泌乳素(PL)檢測試劑盒英文名稱：PL ELISA Kit血管動蛋白抗體包裝25g

鎖鏈素(Desmosine)檢測試劑盒英文名稱：Desmosine ELISA Kit腺病早期E1A蛋白抗體包裝5g

羧化不全骨鈣素(ucOC)檢測試劑盒英文名稱：ucOC ELISA Kit磷酸化活化復(fù)制因子2抗體包裝1g

髓樣細胞觸發(fā)性受體2(TREM2)檢測試劑盒英文名稱：TREM2 ELISA Kit磷酸化活化復(fù)制因子2抗體包裝250mg

髓樣分化因子88(MyD88)檢測試劑盒英文名稱：MyD88 ELISA Kit磷酸化失調(diào)癥蛋白1抗體包裝250mg

髓鞘堿性蛋白(MBP)檢測試劑盒英文名稱：MBP ELISA Kit錨蛋白重復(fù)結(jié)構(gòu)域蛋白17抗體包裝1g

髓磷脂堿性蛋白(MBP)檢測試劑盒英文名稱：MBP ELISA Kit胞質(zhì)乙脫氫酶1抗體包裝5g
實驗報告
一、產(chǎn)分離與培養(yǎng)：
   1、無菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，最后將成1mm3左右大小；
   2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置；
   3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復(fù)此步驟2-3次，直至組織*被消化；
   4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸，接種于25cm2培養(yǎng)瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；
   5、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基，按實驗需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)；
二、免疫熒光鑒定：
   1、待心房肌細胞生長至80%融合時，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min；
   2、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；
   3、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細胞30min；
   4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜；
   5、PBS沖洗細胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；
   6、用PBS沖洗3次，每次10min，最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。